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《扬州大学》 2001年
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SMD人工抗原的制备研究

周兰香  
【摘要】: 磺胺类药物常用作饲料添加剂及用于畜禽疾病的治疗和预防,但它们都有一定的 残留和毒性,对食品卫生、人体的健康具有潜在危害性,因此,磺胺类药物在肉类、 乳类、禽蛋类等食品性动物组织中的残留问题日益受到关注。我国规定磺胺类药物的 总残留量不得超过300ng/ml。目前检测磺胺类药物残留的化学方法有高效液相色谱法 (HPLC)、薄层色谱法(TLC)和气相色谱法(GC)等,这些化学方法虽然非常敏感、准 确,但检测时间长、耗资大、人员素质要求高,不适合大量样品的筛选测定。酶联免 疫吸附法(ELISA)作为一种快速、特异和灵敏度较高的新型免疫测定技术正逐渐被 应用于磺胺类药物残留的检测。磺胺对甲氧嘧啶(SMD)是畜禽类常用的一种抗球虫 药,建立ELISA法测定磺胺对甲氧嘧啶(SMD)残留具有非常重要的现实意义,为 此开展了本论文的研究工作,制备SMD人工抗原为建立ELISA法提供免疫原和包被 原。 本文分别以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为蛋白质载体,采用戊二 醛法将半抗原SMD分别与BSA、OVA偶联,合成了全抗原SMD-BSA和SMD-OVA。 其中SMD-BSA将在ELISA中用作免疫原,SMD-OVA用作包被原。在200~500nm 波长范围内,分别对SMD-BSA、SMD-OVA、SMD和BSA进行紫外扫描,它们的紫 外扫描图谱结果表明半抗原SMD与载体蛋白间的偶联是成功的。另外对SMD-BSA 的冻干粉和SMD、BSA固体进行红外光谱测定,其结果也证明偶联是成功的。 为了考察和研究抗体生成的规律,筛选出特异性强、效价高的抗体,以提高ELISA 检测的灵敏度和选择性,通过改变实验条件,合成了多种不同结合比的SMD-BSA。 在BSA用量、戊二醛用量固定的情况下,改变SMD用量,得到了结合比分别为10、 19、11、13的SMD-BSA。在SMD用量、BSA用量固定的情况下,改变戊二醛用量, 得到了结合比分别为14、19、9、7、10的SMD-BSA。可见结合比均在5~20范围内, 符合半抗原与BSA载体连接的分子比要求,所以本实验制得的SMD-BSA均可用于免 疫,以获得抗血清从而得到SMD抗体。 在本研究工作的基础上可进一步建立酶联免疫吸附法(ELISA)测定磺胺对甲氧 嘧啶残留,还可进一步研制开发试剂盒投放于市场及进出口检疫,也可预先在实验室 包被好酶标板,现场使用时只需加入样品和抗体、酶标二抗、保温清洗及加入底物等, 扬州大学硕士学位论文2 即可短时间内测定大量样品,便于大量样品的筛选,总之,本研究工作继续深入下去 将在实际应用中具有广阔前景。
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