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《扬州大学》 2002年
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猪水肿病毒素保护性抗原的菌体表面表达及其黏膜免疫反应

徐建生  
【摘要】: 随着分子生物学技术的发展,人们对猪水肿病的致病因子和致病机理有了较深入的了解,对其致原菌毒素(Shiga-like toxin Ⅱ virant,SLT-Ⅱv或SLT-Ⅱe,以下简称水肿病毒素)的分子生物学特性已有了较多的研究,其中包括SLT-Ⅱe基因的克隆与测序。SLT-Ⅱe操纵子全长为1980bp,由两个亚单位基因构成——SLTⅡeA和SLT-ⅡeB。其中A亚单位是SLT-Ⅱe的毒性亚单位,B亚单位是SLT-Ⅱe的保护性抗原的所在处。该病在世界各国都有发生,发病后死亡率达80%~100%,给养猪业带来了较大的损失。 本研究在SLT-ⅡeB亚单位基因克隆、定序及在菌细胞内表达的基础上,利用菌体表面表达抗原技术,构建大肠杆菌表面表达SLT-ⅡeB的重组菌,旨在对其作为黏膜疫苗而激发的黏膜免疫反应进行初步的研究。 用聚合酶链式反应(PCR)技术,从大肠杆菌PPSLT-ⅡeB中扩增出204bp的SLT-ⅡeB基因的编码序列,从金黄色葡萄球菌中扩增出621bp的SPA细胞壁固定区序列(SPA-X),将扩增的SLT-ⅡeB与SPA-X基因片段连接后克隆进pEZZ-18载体,转化到大肠杆菌HB101后,经酶切分析等方法筛选到阳性的重组质粒pZBSPAX,并对该重组质粒进行序列测定,证明了该重组质粒就是同时含有SLT-ⅡeB和SPA-X的克隆。 通过在不同温度、不同培养时间及IPTG诱导条件下重组菌PZBSPAX融合蛋白表达的检测,利用免疫荧光抗体技术及免疫胶体金技术,证明重组大肠杆菌PZBSPAX可表面表达PP-SLT-ⅡeB-SPAX融合蛋白;利用SDS-PAGE、Western-blotting对重组大肠杆菌PZBSPAX的表达产物进行分析,结果表明该重组菌表达的融合蛋白PP-SLT-ⅡeB-SPAX与预期的大小一致,且具有SLT-ⅡeB的抗原性。 用重组菌PZBSPAX口服免疫1日龄和15同龄仔猪,通过对免疫后1d、3d、7d、10d、15d、30d的粪检菌的抗氨苄青霉素试验及对其进行质粒酶切分析,显示该重组菌能稳定地定居于仔猪肠道至少30天(至实验结束时);利用间接ELISA方法对免疫后10d、15d、30d仔猪肠黏液特异性SIgA及血清特异性IgA、IgG进行了检测,并对其OD值与非免疫对照组及与由载体菌(HB101大肠杆菌)包被酶标板后检测的OD值进行了比较分析,结果显 扬州大学博卜学位论文 示了重组菌PzBS队x经仔猪口服后能产生较高水平的肠勃液特异性SlgA 和血清特异性IgA、IgG,提示该重组菌作为口服疫苗可激发仔猪肠勃膜免 疫反应,同时也可引起全身性体液免疫反应。 本研究成功地构建了革兰氏阴性菌(HB 1 01)的表面表达载体系统, 并成功地将仔猪水肿病毒素保护性抗原一B亚单位在其表面表达,这在国内 外的相关文件中尚未见报道,而有关豁膜疫苗在猪体内激发的豁膜免疫反应 的研究在国内外同样较少报道。相信本研究所构建的细菌表面表达猪水肿病 毒素保护性抗原的重组菌作为勃膜疫苗预防仔猪水肿病将具有较广阔的应 用前景,也相信该表面表达的活细菌载体系统的成功构建会为其它疾病的勃 膜疫苗的研制提供一种方法和思路。
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S852.4

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 杨玲媛;任文凯;王文策;杨丹丹;印遇龙;;猪水肿病疫苗的研究进展[J];安徽农业科学;2011年09期
2 林艺远;刘国平;杨明柳;吴斌;;猪水肿病发病机理研究进展[J];动物医学进展;2006年07期
3 苗玉和;舒秀伟;陆承平;;应用小鼠替代仔猪检验仔猪水肿病灭活疫苗效力研究[J];畜牧与兽医;2008年08期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 刘国平;猪水肿病基因工程亚单位菌苗及F18~+E. coli的病原学研究[D];华中农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 冯瑜菲;猪水肿病大肠杆菌毒力因子鸡卵黄抗体制备及Stx2e基因LAMP方法建立[D];东北农业大学;2011年
2 林艺远;致猪水肿病大肠杆菌ELISA抗体检测方法及基因工程亚单位疫苗的初步研究[D];华中农业大学;2006年
3 付海兵;仔猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株的构建[D];东北农业大学;2007年
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5 潘虹;产志贺毒素大肠杆菌毒素基因敲除及毒力测定的研究[D];甘肃农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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3 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
4 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
5 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
6 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
7 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
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10 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈珍;万春和;曾亮明;朱春华;林甦;刘斌琼;林羽;黄瑜;;H9N2亚型禽流感安徽分离株CK/AH/1/10的分子特征[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 毛立;李文良;严少华;钟声;郭俊尧;江杰元;;山羊流产病料中牛病毒性腹泻病毒的检测[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 刘洋;布日额;吴金花;郭闯;锡林高娃;刘燕;;内蒙古中东部地区乳源性大肠杆菌PCR检测及其耐药性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 李研东;韩雪;赵彦岭;米振杰;高振同;李肖莉;;单链抗体的制备及其在残留检测上的应用前景[A];中国畜牧兽医学会动物药品学分会第四届全国会员代表大会暨2011学术年会论文集[C];2011年
5 李新民;党琦;;天佛参口服液(TFS)诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及机理探讨[A];2011年中华名中医论坛暨发挥中西医优势防治肿瘤高峰论坛论文集[C];2011年
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7 徐慧;韦莉;佟瑞平;龚玉梅;王宏俊;孙惠玲;张培君;;溶血性曼氏杆菌PCR诊断试剂盒的研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
8 李喜旺;董奎龙;彭玉伟;;中药“牛孕灵”冲剂治疗奶牛不孕症的临床疗效总结[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
9 邬纯鸿;黄毅;王文莉;钟代彬;吴广安;方艳军;;现代化奶牛场乳房炎病因调查及其防治[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
10 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
2 姚美玲;H9N2亚型禽流感病毒气溶胶发生与传染机制及其感染SPF鸡的特点[D];山东农业大学;2010年
3 戴银;鸡MHCⅠ类分子结构与抗病性关系的研究[D];安徽农业大学;2010年
4 李永芹;养殖鱼类病原菌检测芯片技术的建立[D];中国海洋大学;2010年
5 黎满香;感染猪的粪肠球菌的分离鉴定及部分特性和诊断方法研究[D];湖南农业大学;2010年
6 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
7 闫振贵;不同途径免疫NDV弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫反应的研究[D];山东农业大学;2011年
8 乔小放;RNA干扰SUMO1基因对结肠癌Hct116细胞生物学行为的影响[D];吉林大学;2011年
9 李素;猪瘟病毒感染血管内皮细胞的差异蛋白质及细胞因子表达变化分析[D];吉林大学;2011年
10 孙瑜;ET-1受体拮抗剂和阿伐他汀联合应用在动脉粥样硬化病变进程中的抑制作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 罗晶晶;斑点叉尾鮰生鱼片加工过程中的微生物变化[D];华中农业大学;2010年
2 黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年
3 刘新军;表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D];华中农业大学;2010年
4 王延昭;利用免疫磁珠技术富集肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌[D];华中农业大学;2010年
5 严琦;副猪嗜血杆菌与巨噬细胞相互作用的初步研究[D];华中农业大学;2010年
6 王艳伟;PRRSV感染激活RANTES产生的信号通路研究[D];华中农业大学;2010年
7 崔翔;动物可食组织中安眠酮残留的ELISA检测方法研究[D];华中农业大学;2010年
8 费晶晶;两个家蚕FKBP12基因的研究[D];浙江理工大学;2010年
9 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
10 王翠;杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基STT3a的基因克隆与功能分析[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李文学;青学刚;刘刚;;高免卵黄抗体应用研究现状及发展趋势[J];安徽农业科学;2010年24期
2 胡静,俞守义,阚飙,刘志华;缺失HPI毒力岛的EAggEC O42突变菌株的构建及鉴定[J];第一军医大学学报;2005年11期
3 张雪寒,何孔旺,张书霞;产肠毒素性大肠杆菌肠毒素的研究概况[J];动物医学进展;2003年03期
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5 刘国平,吴斌,刘梦元,何启盖,陈焕春;猪大肠杆菌水肿毒素SLT-IIeA基因的克隆和序列分析[J];动物医学进展;2004年01期
6 姜连连,董国雄,徐建生,董辉,黄兵;猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位与志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位的联合表达[J];动物医学进展;2005年05期
7 成大荣,徐建生,王秋娟,孙怀昌,高崧;大肠杆菌F18ac菌毛FedA蛋白的表达与鉴定[J];动物医学进展;2005年06期
8 成大荣;黄维嘉;张迎春;张科军;徐建生;;不同毒力基因型大肠杆菌的毒力测定[J];动物医学进展;2005年12期
9 林艺远;刘国平;杨明柳;吴斌;;猪水肿病发病机理研究进展[J];动物医学进展;2006年07期
10 成大荣;朱善元;钱金梅;董丙敏;;大肠埃希菌F18菌毛结构亚单位抗原特性的研究[J];动物医学进展;2009年02期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 杨健美;施慧;高崧;陈祥;刘秀梵;;表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌的构建与免疫保护试验[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
2 赵战勤;吴斌;刘国平;林艺远;周锐;金梅林;陈焕春;;猪水肿毒素A1亚基的可溶性表达及其表达产物的生物学特性研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(上)[C];2005年
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1 李咏梅;肠出血性及产志贺样毒素大肠埃希菌耐药机制的研究[D];吉林大学;2004年
2 乔岩梅;炭疽芽孢杆菌特征基因恒温扩增检测方法的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2007年
3 刘国平;猪水肿病基因工程亚单位菌苗及F18~+E. coli的病原学研究[D];华中农业大学;2007年
4 王劼;猪源肠毒素大肠杆菌K88ac和F18ac菌毛蛋白基因的表达及其在卵黄抗体生产中的应用[D];华中农业大学;2007年
5 甄宇红;抗奶牛乳腺炎特异性卵黄抗体的制备及活性研究[D];大连理工大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯瑜菲;猪水肿病大肠杆菌毒力因子鸡卵黄抗体制备及Stx2e基因LAMP方法建立[D];东北农业大学;2011年
2 王凤彩;鸡卵黄免疫球蛋白的提取及生物活性的研究[D];天津科技大学;2003年
3 程学慧;预防仔猪腹泻外源抗体—卵黄抗体研究[D];华中农业大学;2003年
4 严振龙;仔猪水肿病病菌毒力因子相互关系的研究及诊断方法的初步建立[D];扬州大学;2002年
5 郭玉广;致断奶仔猪腹泻、水肿病大肠杆菌F18菌毛a因子单克隆抗体的研制及其初步应用[D];扬州大学;2003年
6 刘国平;猪水肿病大肠杆菌分离鉴定及fedF基因克隆和表达的研究[D];华中农业大学;2004年
7 齐翀;大肠杆菌毒素融合基因的构建及其表达产物免疫原性研究[D];吉林大学;2005年
8 闫祖书;仔猪水肿病病原分离鉴定及免疫防制研究[D];西北农林科技大学;2004年
9 林艺远;致猪水肿病大肠杆菌ELISA抗体检测方法及基因工程亚单位疫苗的初步研究[D];华中农业大学;2006年
10 张笑意;精制抗新城疫病毒卵黄抗体的研制[D];南京农业大学;2006年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨玲媛;任文凯;王文策;杨丹丹;印遇龙;;猪水肿病疫苗的研究进展[J];安徽农业科学;2011年09期
2 李求知;杭柏林;王青;胡建和;;致仔猪水肿病大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J];河南科技学院学报(自然科学版);2011年02期
3 任文凯;刘建飞;彭远义;;猪水肿病大肠杆菌FedF的B细胞抗原表位预测[J];吉林畜牧兽医;2009年10期
4 周宏超;索占伟;胡格;范光丽;刘钟杰;穆祥;;槲皮素对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌PGI2、TXA2及PAF的影响[J];西北农业学报;2008年02期
5 周宏超;高立云;王中杰;索占伟;张涛;范光丽;刘钟杰;穆祥;;猪水肿病病理模型复制[J];西北农业学报;2008年02期
6 周宏超;范光丽;穆祥;胡格;索占伟;;金丝桃苷对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌PGI2、TXA2及PAF的影响[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2007年04期
7 周宏超;索占伟;范光丽;刘钟杰;穆祥;;SLT-Ⅱe对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的影响[J];中国兽医科学;2009年08期
8 付海兵;丁琳;杨春柳;许亚卓;师东方;;猪水肿病大肠杆菌基因突变株的构建[J];中国预防兽医学报;2007年11期
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10 吴军;周传铎;刘钟杰;索占伟;段慧琴;穆祥;李禹涛;;SLT-Ⅱe对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响[J];中国兽医杂志;2009年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 周宏超;中药复方主要成分对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能的影响[D];西北农林科技大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡文霞;猪水肿病大肠杆菌毒力基因突变菌株对猪的免疫效果研究[D];东北农业大学;2011年
2 冯瑜菲;猪水肿病大肠杆菌毒力因子鸡卵黄抗体制备及Stx2e基因LAMP方法建立[D];东北农业大学;2011年
3 付海兵;仔猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株的构建[D];东北农业大学;2007年
4 杨明柳;致猪水肿病大肠杆菌二重PCR检测方法及三价灭活菌苗研究[D];华中农业大学;2007年
5 丁琳;志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备[D];东北农业大学;2008年
6 雷彬;如东县部分地区仔猪水肿病流行病学调查和病理组织学检查[D];安徽农业大学;2008年
7 杨春柳;猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株部分生物学特性及口服免疫效果的研究[D];东北农业大学;2009年
8 满晓营;猪水肿病与仔猪副伤寒二价基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2009年
9 刘云浩;发酵床养猪中益生菌对主要病原细菌的控制效果初探[D];中国农业科学院;2012年
10 潘虹;产志贺毒素大肠杆菌毒素基因敲除及毒力测定的研究[D];甘肃农业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 成大荣,徐建生,董国雄,李俊宝;类志贺氏菌毒素型变异体基因的克隆与鉴定[J];扬州大学学报(自然科学版);1999年03期
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3 成大荣,徐建生,董国雄,李俊宝;类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体B亚单位基因的表达与鉴定[J];中国预防兽医学报;1999年05期
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【相似文献】
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3 石家庄市行唐县兽医防疫站 王金合;仔猪水肿病的防与治[N];河北农民报;2010年
4 杨淑琴;春季仔猪水肿病的综合预防[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2009年
5 河北远征药业股份有限公司市场部;仔猪水肿病的防治[N];中国畜牧报;2004年
6 高秉龙 黄莹;仔猪水肿病有“克星”[N];湖北科技报;2000年
7 汪应梅;仔猪水肿病的防治[N];湖北科技报;2002年
8 晓东;仔猪水肿病的防治[N];湖北科技报;2002年
9 邢台市兽医院 邢兰君 高社朝;仔猪水肿病闹开了[N];河北科技报(农村版);2001年
10 故城县辛庄乡孙务畜牧兽医站(253801) 孙立国 康志新;不让仔猪水肿病逞凶[N];河北科技报(农村版);2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐建生;猪水肿病毒素保护性抗原的菌体表面表达及其黏膜免疫反应[D];扬州大学;2002年
2 郑婵颖;NR2A亚单位胞内C末端区对NMDA受体装配、运输以及表面表达的影响[D];浙江大学;2005年
3 傅展燕;活细胞可视化研究NMDA受体在神经元的表面表达、分布及其与突触形成和功能的关系[D];中国协和医科大学;2002年
4 孔燕;人类γδT细胞识别应激分子-4型UL16结合蛋白的机制研究[D];中国协和医科大学;2008年
5 杨巍;NR2B亚单位C末端调控NMDA受体运输和膜表达的分子机制[D];浙江大学;2008年
6 葛俊伟;猪流行性腹泻病毒主要结构蛋白不同抗原片段在重组干酪乳杆菌中的表达及其免疫学评价[D];东北农业大学;2008年
7 齐锦;MICA反应性γδT细胞抗肿瘤作用的研究[D];中国协和医科大学;2003年
8 邱爽;NMDA受体亚单位装配、运输以及膜表面表达的分子机制[D];浙江大学;2007年
9 梅家转;NKG2D介导的同种异体NK细胞对人鼻咽癌细胞CNE2及其多药耐药细胞CNE2/DDP杀伤活性的研究[D];南方医科大学;2007年
10 于书彦;AMPA受体运输在杏仁外侧核NMDA受体依赖性的突触可塑性调节中的作用[D];山东大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 严振龙;仔猪水肿病病菌毒力因子相互关系的研究及诊断方法的初步建立[D];扬州大学;2002年
2 魏广丽;干酪乳杆菌表面展示表达TGEV-S抗原表位及其免疫原性分析[D];黑龙江八一农垦大学;2008年
3 谷贵章;幽门螺杆菌ureB基因抗原片段的乳酸乳球菌表面表达体系的研究[D];浙江工商大学;2007年
4 丁琳;志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备[D];东北农业大学;2008年
5 闫祖书;仔猪水肿病病原分离鉴定及免疫防制研究[D];西北农林科技大学;2004年
6 毕金燕;GaIE在酿酒酵母表面的固定化表达及NodC在大肠杆菌中的表达及活性测定[D];山东大学;2007年
7 来景辉;皖北地区仔猪水肿病流行病学调查及防控[D];南京农业大学;2006年
8 方文山;吉林地区仔猪水肿病流行病学调查及灭活疫苗的制备[D];中国农业科学院;2007年
9 雷彬;如东县部分地区仔猪水肿病流行病学调查和病理组织学检查[D];安徽农业大学;2008年
10 付海兵;仔猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株的构建[D];东北农业大学;2007年
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