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《扬州大学》 2002年
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我国部分地区新城疫病毒融合蛋白基因和分子流行病学的初步研究

倪雪霞  
【摘要】: 从我国部分地区(华东地区和新疆地区)1985~2001年间发病鸡群中分离了20个新城疫病毒(NDV),按OIE的标准方法对其进行了毒力的测定,包括致死鸡胚平均死亡时间(MDT)和一日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI),结果表明这20株鸡源NDV均为强毒。在此基础上,利用RT-PCR、基因克隆技术和序列测定获得了其中18个分离株融合蛋白(F)基因5’端1700核苷酸(nt)序列。通过DNAStar软件对F基因47~470nt间片段进行同源性分析比较并绘制了遗传进化树枝状结构发生图,结合334~1672nt间三种限制性内切酶(RE:Hinf Ⅰ,BstO Ⅰ及Rsa Ⅰ)位点的分布情况,确定了这些分离株的基因分类地位。结果表明,这1 8个鸡源NDV分别属于三个基因型,其中一个为新发现的基因Ⅸ型,属于另外两个已知基因Ⅵ、Ⅶ型的毒株与国外同基因型NDV相比又有明显差异。Ⅸ型分离株位于遗传进化发生树新出现的一个主干分支,与相邻的Ⅲ型及Ⅰ型NDV间遗传距离分别为8.0~8.6%和16.5~17.6%。基因Ⅵ型分离株在Ⅵ型主分支中分布于两个新的簇,为新的基因亚型Ⅵf、Ⅵg,在与相邻基因亚型的遗传距离上,Ⅵf与Ⅵb间为9.2~11.5%,Ⅵf与Ⅵg间为6.2~6.8%,Ⅵg与Ⅵd间为2.5~3.3%。归于基因Ⅶ型的NDV分离株中有6个属于已知的基因Ⅶc和Ⅶd亚型,毒株JS-2/98和JX-2/99形成一个新的簇,是新的Ⅶe基因亚型,Ⅶe型NDV与相邻Ⅶc和Ⅶb型间遗传距离分别为3.0~5.0%和2.7~6.2%。在RE位点分布上与已知的Ⅰ~Ⅷ基因型及其中的Ⅵa~Ⅵd、Ⅶa、Ⅶb亚型不同的是,基因IX型毒株的F基因540nt存在Rsa Ⅰ位点,同时缺乏1198nt Hinf Ⅰ位点、1478nt BstOI位点和1625nt Rsa Ⅰ位点;Ⅵf和Ⅵg亚型毒株不具有872nt Rsa Ⅰ位点;本次实验的8个Ⅶ型分离株RE位点具有Ⅶa、Ⅶb和Ⅷ型NDV不具有的872nt Rsa Ⅰ位点,并且, 扬州大学硕士学位论文 缺乏Vna亚型1350nt处Hinfl位点而具有752nt处BstOI位点,且大 部分不具备Vllb亚型的736n处Hinfl位点。由核昔酸序列推导了F蛋 白高变区1一125位氨基酸(aa),通过分析比较发现了新的基因型和基 因亚型与其他基因型毒株的差异还体现在aa位点的变化上。基因双型 毒株出现Ileg~valg和Vall06一Ala,“6的替换,班r、班g亚型却没有出 现其它班亚型的sers一Pr。,变异。这一结果显示在我国华东和新疆地 区近十几年来至少有3个基因型同时流行,包括新发现的基因型和基 因亚型。属于姐型的8个毒株在90年代以后分离株中占有最大的比例 且全部是97年以后分离的,98年以后分离的NDV毒株均属于VII型, 说明Vll型毒株是我国部分地区正在发生ND流行的优势基因型,与国 内外报道的第四次大流行的流行特征一致。 根据针对NDV融合蛋白(F)的7株单克隆抗体与22个不同基因 型不同来源NDV毒株的反应情况,初步证实这些NDV毒株F蛋白存 在抗原表位的细微差异,但这种差异性与不同基因型间无必然的相关 性。根据最新资料报道的F蛋白三维结构的抗原表位的定位结果,分 析和比较了22个毒株在这些表位中关键aa位点的变异情况后发现, 在维持F蛋白空间结构中起重要作用的3个抗原位点一一第72位、161 位和343位aa位点上,所有毒株高度一致,未产生任何变异。此外只 有4个毒株在个别位点发生aa替代,并且这种替代与不同基因型无直 接关系,进一步证明了不同NDV分离株F蛋白存在的细微的抗原变化 与建立在F基因基础上的基因分型无必然相关性。通过不同来源不同 基因型(亚型)NDV灭活苗与常规疫苗(包括Lasota弱毒活疫苗和灭 活疫苗)的免疫保护效力的比较,证实了所有疫苗均能激发机体产生 抗不同基因型NDV的抵抗力,Hl抗体变化都具有一个抗体滴度迅速上 升的过程,动态特征除Lasota弱毒活疫苗组有些不同外相当一致。保 护力的最终统计结果证明了不同来源不同基因型NDV可以达到交叉保 护,即在实验条件下常规疫苗对不同基因型NDv的侵袭能产生足够的 保护力。从而进一步证实了NDV不同基因型的分类与引起机体免疫应 答的抗原变化无直接相关性。
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S852.65

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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2 姚春峰;刘文博;胡顺林;马怀良;薛峰;刘慧谋;刘秀梵;;新城疫病毒分离株的生物学特性鉴定及F蛋白基因序列分析[J];病毒学报;2009年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 秦卓明;新城疫病毒流行株致病性和抗原性及其与F和HN基因变异的相关性[D];山东农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 姚春峰;我国部分地区新城疫病毒的部分生物学特性鉴定及分子流行病学研究[D];扬州大学;2007年
2 周静;河北省鸡新城疫病毒分离株分子流行病学研究[D];河北农业大学;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
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3 刘华雷,王永坤,严维巍,朱国强,周继宏,田慧芳;中国部分地区新城疫病毒的分子流行病学研究[J];扬州大学学报(自然科学版);2001年01期
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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5 黄银云;;不同来源的5株新城疫病毒的分离·鉴定与基因型分析[J];安徽农业科学;2010年29期
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9 黄勇,万洪全,刘红旗,吴艳涛,刘秀梵;鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组的序列测定[J];病毒学报;2003年04期
10 单松华,邵朝纲,邹键,李春阳,胡永强,王忠宽,龚祖埙;鸽基因Ⅶ型新城疫病毒的分离鉴定[J];病毒学报;2003年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
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2 温贵兰;李永明;;抗新城疫单克隆抗体的制备与特异性分析[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
3 曹殿军;郭鑫;梁荣;闫丽辉;刘培欣;闵平;陈杰;;我国部分地区NDV的分子流行病学研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
4 严维巍;王永坤;周继宏;田慧芳;朱国强;李玉峰;庄国宏;;一株鸡副粘病毒F基因重要片段的扩增、克隆与分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
5 严维巍;王永坤;周继宏;田慧芳;钱忠明;朱国强;刘华雷;李玉峰;;鹅副粘病毒分类地位之初探[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
6 王永坤;严维巍;周继宏;田慧芳;朱国强;钱忠明;李玉峰;刘华雷;庄国宏;王建业;郁斌;;鸡副粘病毒病病毒特性和基因型的研究及防制[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
7 曹殿军;郭鑫;梁荣;闫丽辉;刘培欣;闵平;陈杰;;我国部分地区新城疫病原分子流行病学研究[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
8 宋翠萍;陈晓兰;丁铲;;新城疫病毒致病力演变研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
9 ;Mutation in the length of Hemagglutinin-Neuraminidase protein is a prerequisite for evolution to virulence of Newcastle disease virus[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
10 汤承;张斌;张兆敏;马莉;刘小银;李明义;岳华;;检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株RNA的双重RT-PCR方法的建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 母连志;拯救GPMV毒株细胞系的构建及靶向沉默P基因抑制GPMV复制研究[D];吉林大学;2011年
2 于淼;山东鸡新城疫病毒分离鉴定与Ⅱ+Ⅶ基因型灭活疫苗研究[D];南京农业大学;2009年
3 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
4 吴艳涛;新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2000年
5 张绍杰;表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];中国农业科学院;2000年
6 丁壮;新城疫病毒HN蛋白基因的克隆、序列分析、表达及其免疫原性研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
7 智海东;表达新城疫病毒F基因和传染性喉气管炎病毒gB基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];中国农业科学院;2002年
8 夏志平;共表达NDV F、IBDV VP0基因的重组鸡痘病毒构建及其实验免疫研究[D];中国人民解放军军需大学;2002年
9 孙建宏;NDV La Sota与V4株对鸡T细胞亚群影响及其F蛋白抗原优势表位的比较研究[D];东北农业大学;2003年
10 万洪全;鹅源新城疫病毒部分生物学特性鉴定及其囊膜糖蛋白基因序列分析[D];扬州大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贾清;鸡新城疫抗体检测试纸条的研制及初步应用[D];华中农业大学;2010年
2 吴焕荣;鸭副粘病毒的致病性研究[D];山东农业大学;2010年
3 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
4 辛英豪;DHV-Ⅰ单克隆抗体的制备与胶体金试纸条的研制[D];山东农业大学;2010年
5 孙杰;经鸭胚传递的鸭副黏病毒分子生物学特性研究[D];山东农业大学;2010年
6 张厚锋;种鸡非典型新城疫的诊断及病后不同时期种蛋品质及带毒情况检测分析[D];山东农业大学;2010年
7 王超;肉仔鸡新城疫、禽流感混合感染的综合诊断[D];山东农业大学;2010年
8 孙静;商品肉鸡呼吸道病原体共感染的检测[D];山东农业大学;2011年
9 刘霞;鸭源新城疫油乳剂灭活疫苗制备的研究[D];山东农业大学;2011年
10 李建侠;种鸭生殖系统新城疫病毒检测及鸭新城疫病毒垂直感染动物试验[D];山东农业大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐秀龙,刘秀梵;抗鸡新城疫病毒单克隆抗体及所测定的毒株的抗原差异[J];病毒学报;1988年01期
2 王志玉;副粘病毒融合蛋白活性位点中亮氨酸基因突变分析[J];病毒学报;2000年01期
3 吴艳涛,倪雪霞,万洪全,刘文博,刘秀梵;我国部分地区不同动物来源新城疫病毒的分子流行病学研究[J];病毒学报;2002年03期
4 黄勇,万洪全,刘红旗,吴艳涛,刘秀梵;鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组的序列测定[J];病毒学报;2003年04期
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8 秦卓明;马保臣;袁小远;徐怀英;何叶峰;崔治中;;新城疫分离毒HN基因的分子特性和片段同源相关性[J];病毒学报;2007年01期
9 宋敏训,谭文君,王莉莉,李锋,黄兵,牟建青,王春玲;鸡新城疫不同毒株间的交叉保护性研究[J];山东家禽;2001年04期
10 秦卓明,何叶峰,徐怀英,贾强,金维江,张世栋,欧阳文军,李莉;种鸡感染新城疫强毒的诊断与防制[J];山东家禽;2002年05期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 万洪全;鹅源新城疫病毒部分生物学特性鉴定及其囊膜糖蛋白基因序列分析[D];扬州大学;2002年
2 黄勇;鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的测定及含该毒株全基因组cDNA的转录载体的构建[D];扬州大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 刘华雷;禽副粘病毒Ⅰ型分离株囊膜糖蛋白基因生物学特性的初步研究[D];扬州大学;2001年
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3 杨瑞梅;东北地区新城疫分子流行病学研究[D];甘肃农业大学;2003年
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5 李杰峰;鸡新城疫病毒地方株的分离鉴定及其HN基因的克隆与序列分析[D];河北农业大学;2006年
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【二级引证文献】
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2 王郁杨;开妍;段志强;吴双;胡顺林;王晓泉;刘秀梵;;新城疫病毒人工感染鹅脾脏差异表达蛋白质组初步分析[J];畜牧兽医学报;2012年07期
3 索朗斯珠;何天文;贡嘎;田飞鹏;格桑卓玛;;藏鸡新城疫病毒的分离与初步鉴定[J];中国家禽;2011年15期
4 刘海侠;胡顺林;彭大新;;新城疫病毒HI抗体效价与流行株感染排毒之间的相关性[J];中国家禽;2012年10期
5 胡北侠;黄艳艳;张秀美;何叶峰;秦卓明;黄庆华;;3株单抗对新城疫病毒HN抗原变异的分析[J];中国兽医学报;2008年11期
6 孙静;刁有祥;刘霞;孙杰;李建侠;;1株鸡新城疫强毒株的分离鉴定及致病性[J];中国兽医学报;2012年05期
7 索朗斯珠;李永涛;郭学波;邹忠;艾尼瓦尔;金梅林;;新城疫病毒西藏分离株的生物学特性鉴定及遗传进化分析[J];中国兽医学报;2012年06期
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中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 胡北侠;黄艳艳;姜宁朋;黄庆华;张秀美;;输卵管积液蛋鸡强毒NDV的分离鉴定与分子特征[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
2 刘秀梵;胡顺林;;我国新城疫病毒的分子流行病学及新疫苗研制[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙静;商品肉鸡呼吸道病原体共感染的检测[D];山东农业大学;2011年
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5 李梅;检测NDV诱导特异性IFN-γ、IL-4的ELISPOT试验方法建立及应用[D];山东农业大学;2008年
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中国期刊全文数据库 前8条
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7 郑安明;美国研制成功新一代新城疫疫苗[N];中国国门时报;2006年
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2 陈德胜;传染性支气管炎病毒中国地方流行毒株的分子流行病学研究[D];南京农业大学;2000年
3 韦栋平;共表达新城疫病毒融合蛋白基因和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[D];扬州大学;2004年
4 黎志东;HIV分子流行病学及辅受体突变导致HIV感染抑制机理的研究[D];第四军医大学;2002年
5 秦卓明;新城疫病毒流行株致病性和抗原性及其与F和HN基因变异的相关性[D];山东农业大学;2006年
6 李晓霞;新城疫病毒气溶胶发生与传染机制及其在生产鸡舍环境中的监测[D];山东农业大学;2009年
7 韩定芬;乳腺癌流行病学及雌激素代谢酶相关基因的研究[D];武汉大学;2004年
8 程相朝;新城疫病毒地方株分子流行病学调查及其疫病控制[D];南京农业大学;2003年
9 胡海霞;表达C亚型禽偏肺病毒糖蛋白和融合蛋白的重组新城疫病毒二价苗的构建及免疫效力评价[D];吉林大学;2011年
10 吴艳涛;新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 倪雪霞;我国部分地区新城疫病毒融合蛋白基因和分子流行病学的初步研究[D];扬州大学;2002年
2 米志强;新城疫病毒昌黎株F基因的序列分析、表达及重组病毒免疫原性的研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
3 曲鲁江;新城疫病毒单克隆抗体的建立及其遗传变异分析研究[D];新疆农业大学;2001年
4 邓明俊;新城疫病毒F基因真核表达质粒的构建及动物免疫试验[D];西北农林科技大学;2003年
5 徐守振;NDV Sddy-02株F基因的克隆与序列分析及E.coli CpG-DNA在新城疫疫苗上的应用研究[D];山东农业大学;2003年
6 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
7 宁军;新城疫病毒F基因乳酸菌表达载体的构建与表达[D];吉林农业大学;2008年
8 刘华雷;禽副粘病毒Ⅰ型分离株囊膜糖蛋白基因生物学特性的初步研究[D];扬州大学;2001年
9 王青;新城疫病毒F基因在真核及原核表达系统中的表达[D];西北农林科技大学;2007年
10 杨振泉;新城疫病毒融合蛋白在转基因水稻中的表达[D];扬州大学;2004年
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