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表达鸡马立克氏病病毒糖蛋白B基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及免疫效力试验

卢军  
【摘要】: 本试验对高效表达鸡马立克氏病病毒(MDV)1型疫苗毒株CVI988/Rispens gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性、生物安全性以及毒种的纯净性、中试冻干疫苗的保存期、rFPV-gB/R+HVT+rFPV-IFN-Ⅱ联合疫苗的免疫保护效果、rFPV-IFN-Ⅱ的免疫佐剂作用及其使用的合适剂量进行了系统的研究。 rFPV-gB/R在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续传30代,再将10代、20代rFPV-gB/R通过SPF鸡各传5代。与传代前相比,gB基因的核苷酸和氨基酸序列均未发生任何变化。以10代、20代rFPV-gB/R进行实验室免疫效力实验,结果两个免疫组间的羽囊排毒、早期增重、病毒血症和免疫保护率均无明显差异,rFPV-gB/R在细胞传代后仍保持了原有的免疫原性。说明CVI988/Rispens gB基因插入FPV-282E4载体不影响病毒的复制,rFPV-gB/R可以在CEF上稳定传代,而且gB基因保持了高度的遗传稳定性。 纯净性检验的结果表明,rFPV-gB/R毒种及其中试冻干疫苗未污染任何细菌、霉菌或支原体,具有高度的纯净性。rFPV-gB/R中试冻干疫苗在-20℃保存12个月,病毒浓度始终大于或等于10~9PFU/ml,基本保持稳定。由此证明rFPV-gB/R的毒种和中试产品符合申报新兽药制造和检验规程的要求。 为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测rFPV-gB/R在鸡体内的存在部位及其消长;检测rFPV-gB/R在鸡体的生长繁殖性能和毒力变化;检测传代后rFPV-gB/R gB基因的核苷酸变化;并将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触感染性。试验结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存活时间大约为7天,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,重组病毒的gB基因核苷 扬州大学硕士研究生论文 酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见 重组病毒免疫鸡没有接触传染性,不存在环境散毒的问题。以上结果表明, rFPv一gB瓜不仅能在CEF上稳定传代,也能在鸡体内稳定地遗传,可以用于1日 龄雏鸡的免疫,具有高度的生物安全性。 实验室免疫效力试验以:FPv.IFN一n作免疫佐剂,rFPv一gB瓜+HVT+ rFPV~IFN一n联合疫苗有效降低了商品化狼山鸡羽囊排毒水平,抑制了 MDV的血 液复制,减轻了由于FPV早期免疫引起的增重减缓的副反应,联合疫苗的免疫保 护率达到92.75%,接近CVI988肠spens液氮疫苗免疫保护水平(93.09%); rFPv~IFN一H的免疫佐剂作用明显,使用的合适剂量为rFPv一gB瓜的1/10(即 105PFU/羽)。 由此可见,重组鸡痘病毒基因工程疫苗rFPV一gB瓜具有良好的遗传稳定性和 生物安全性,无外源病毒和支原体污染,符合生物制品制造和检验规程申报的要 求;该重组疫苗与HVT、FPV~IFN一11组成的联合疫苗免疫效果良好,生产成本低, 使用方便,具有较好的推广应用前景。


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