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高效表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒的构建及免疫效力试验

陈平  
【摘要】: H9亚型AIV近年在我国部分地区广泛流行,给养禽业造成了严重的经济损失。油乳剂全病毒灭活苗虽对该亚型禽流感的控制发挥了重要作用,但却存在生产成本高,疫苗使用后会严重影响禽流感疫情监测等缺点。为了研制新一代安全、高效、使用方便的基因工程疫苗,本试验利用人工合成的强启动子Ps构建了高效表达AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPV-Ps-HA),进行了初步的免疫效力试验,与痘苗病毒P7.5启动子调控表达相同基因的重组鸡痘病毒(rFPV-P7.5-HA)以及油乳剂灭活苗进行了比较,确定了其应用价值。现将主要研究内容概述如下: 1.高效表达AIV HA基因的重组鸡痘病毒的构建 pUC18HA和SK质粒经HindⅢ,Kpn Ⅰ双酶切后连接得中间质粒SKHA;将质粒SKHA用BamH Ⅰ酶切回收1.7kbHA基因,插入到高效表达插入载体中得高效表达转移载体pFG11SHA,利用FuGENE~(TM)6介导的方法将转移载体转染由亲本禽痘病毒282E4感染的鸡胚成纤维细胞。经蓝白斑筛选、纯化重组病毒,经PCR及间接免疫荧光试验鉴定,得高效表达H9A基因且遗传性状稳定的重组病毒rFPV-Ps-HA。 2.rFPV-Ps-HA的免疫效力试验 将SPF白来航鸡随机分组,按试验设计将rFPV-P7.5-HA、rFPV-Ps-HA以及油乳剂灭活苗以颈部皮下注射1日龄鸡,15日龄以H9亚型AIV F株翅静脉攻毒。攻毒后进行采样,分离病毒,统计疫苗的免疫保护指数,检测泄殖腔、气管的排毒规律。 (1).rFPV-Ps-HA的免疫效力试验 扬州大学硕士学位论文三 在sPF鸡的免疫保护试验中,10,PFu:FPv一P7.5一队的Px为52.4,10,PFu rFPV一Ps一HA为94.7,与油乳剂灭活苗免疫效力相当,均高于:FPV一P7.5~HA。证明 构建的高效表达AIV HA基因的重组鸡痘病毒确实可提高免疫效力。 (2).泄殖腔、气管排毒规律的检测 rFPV一Ps一HA疫苗组不论是从泄殖腔还是从气管途径,均能有效地抑制病毒的 排出。并且通过对SPF鸡的攻毒试验可以看出,泄殖腔的排毒率要高于气管的排 毒率。因此,通常可采用泄殖腔排毒率作为评价疫苗保护效力的一个指标。 综上所述,本试验构建了高效表达Hg亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒 rFPV一Ps一HA,并对它进行了免疫效力试验,发现在相同条件下,rFPV一Ps一HA的 免疫效力高于rFPV一P7.5.HA,与油乳剂灭活苗相当。降低了生产成本,为重组疫 苗的推广应用奠定了基础。


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