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《扬州大学》 2004年
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转基因克隆山羊的再克隆

殷烈  
【摘要】:转基因动物是目前生物领域的研究热点。体细胞核移植技术在制备转基因动物方面有许多优点,例如:可以快速扩大转基因动物的群体,且能保持外源基因稳定传递。将克隆动物进行再次克隆,可以研究体细胞积累的变异对个体发育、繁殖和健康的影响。 本实验以转基因克隆山羊的卵巢颗粒细胞和耳尖成纤维细胞为供核细胞,以超排得到的MⅡ期卵母细胞去核后作为供质细胞,进行核移植。将供核细胞注射到去核卵母细胞的卵周隙,经电融合获得重构胚,再经离子霉素(Ionomycin,5μM,5min)和6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP,2mM,5h)处理激活。结果:(1)融合率:颗粒细胞为49.3%,成纤维细胞为56.2%;(2)桑葚胚/囊胚率:颗粒细胞为25%,成纤维细胞为32.7%;(3)成功率(产仔数/重构卵数):颗粒细胞为1.1%,成纤维细胞为1.3%;(4)共出生羔羊5只,存活2只;(5)经PCR-RFLP鉴定,各出生羔羊确为供核细胞的克隆山羊。 经PCR鉴定,各继代克隆羊均继承了供核山羊携带的外源基因(Neo~r基因)。为检测Neo~r基因的表达情况,分别取供核山羊和继代克隆山羊的耳尖成纤维细胞,用含800μg/ml G418的培养液进行抗性培养,结果各细胞表现的抗药性有差异。 由此证实,(1)成年转基因克隆山羊的成纤维细胞和颗粒细胞能够在MⅡ期卵母细胞质的作用下去分化、重新编程,并发育得到个体,效率与普通山羊体细胞核移植效率相当;(2)通过核移植可以将外源基因稳定传递给后代,但是,在体外培养的成纤维细胞中,外源基因的表达情况各不相同。
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S827

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 徐娟;成年山羊乳腺上皮细胞转染人乳铁蛋白基因及细胞株的建立[D];扬州大学;2006年
2 徐冬兰;BLG/hLF基因转染山羊乳腺上皮细胞及TSA对转染基因表达的影响[D];扬州大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
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3 邹贤刚,李光三,王玉阁,肖英达,李碧荣,黄国屏,钟元,杜淼,徐少甫,穆宗尧,孙长美,王杏龙,杜福良,成勇,成国祥,李国忠,王捍东,吴维芬,王立康;山羊(Capra hircus)胚胎细胞经继代细胞核移植后其发育能力的研究[J];科学通报;1995年03期
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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4 敬晓棋;雷安民;窦忠英;;核移植胚胎核仁超微结构变化[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 李裕强;张涌;;我国动物胚胎工程技术的产业化战略分析[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
6 施巧婷;王旭光;王力虎;刘贤侠;杨梅;郭志勤;;不同类型供体细胞及不同供体细胞处理方法对山羊体细胞核移植效率的影响[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
7 吕洛;应康;魏少敏;林惠芬;马来记;毛裕民;;积雪草甙对真皮成纤维细胞胶原合成的诱导作用[A];2004年中国化妆品学术研讨会论文集[C];2004年
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10 李广君;王树迎;王慧;侯衍猛;黄丽波;;济宁青山羊发情周期不同阶段LHR在输卵管中的分布及其mRNA表达[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
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2 肖芃;腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的体外培养及其增殖与凋亡的相关研究[D];华中科技大学;2011年
3 马丽菊;云南宣威肺癌细胞系侧群细胞特征分析[D];昆明医学院;2011年
4 孟步亮;BDNF转基因成纤维细胞移植促进脊髓可塑性的分子信号通路研究[D];昆明医学院;2011年
5 韦霄;饮用水中碘乙酸和碘仿的检测识别、遗传毒性和潜在致癌性研究[D];复旦大学;2011年
6 朱杰昌;阻断CD40/CD40L共刺激通路联合FTY720在小鼠心脏移植中的抗排斥反应作用研究[D];天津医科大学;2009年
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8 朱化彬;奶牛体外胚胎生产技术的研究[D];甘肃农业大学;2011年
9 张德福;猪体细胞核移植及其相关技术研究[D];南京农业大学;2008年
10 张艳丽;转基因克隆法制作人溶酶体β-葡萄糖苷酶奶山羊乳腺生物反应器的研究[D];南京农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 敏云馨;藏獒三种组织成纤维细胞系的构建及生物学研究[D];西北民族大学;2010年
2 阮小华;合作猪肾成纤维细胞系的构建及生物学鉴定[D];西北民族大学;2010年
3 王同;GRIM-19抑制肺腺癌细胞株SPC-A1生长及作用机制体内外实验研究[D];安徽医科大学;2010年
4 李军;畜禽饲料中硝基呋喃类药物快速检测技术研究[D];河北农业大学;2011年
5 赵杨祉;肿瘤患者自体外周血来源CIK、NK细胞体外扩增影响因素及杀伤活性研究[D];吉林大学;2011年
6 李晓叶;抗犬1型腺病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立[D];吉林大学;2011年
7 温咏平;脂麻花醇提物体外抗肿瘤生物活性及其机理的初步研究[D];暨南大学;2010年
8 邰大鹏;鸡胚不同组织细胞的体外培养及永生化[D];内蒙古大学;2011年
9 李昊;绵羊卵母细胞体外成熟与体细胞核移植的研究[D];东北林业大学;2011年
10 杨苗;奶牛乳腺上皮细胞低温保存与复苏培养的初步研究[D];内蒙古农业大学;2011年
【同被引文献】
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3 武坚,刘明军,李文蓉,黄俊成,史洪才,郭志勤;精子载体介导法生产转基因绵羊的研究[J];草食家畜;2001年S2期
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5 杨彩侠,陈大元;动物克隆机理研究进展[J];动物学研究;2003年01期
6 王伟,高秀来,陈立南;电穿孔法高效转染COS-7成纤维细胞系[J];解剖学研究;2000年02期
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中国硕士学位论文全文数据库 前2条
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【二级引证文献】
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1 赵志荀;吴国华;颜新敏;许丹;李健;朱海霞;崔力凡;高顺平;孙晓林;马保华;张强;;表达抑制山羊痘病毒ORF095 shRNA的山羊成纤维细胞系的建立[J];甘肃农业大学学报;2012年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 张燕;转sfat-1基因乳腺上皮细胞体外培养研究[D];中国农业科学院;2011年
2 周咏松;组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体乳腺特异性表达载体的构建及其细胞表达研究[D];扬州大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
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3 王玉阁,邹贤刚,成国祥,成勇,陈建泉,刘洁,张靖溥,张旭晨,劳为德,张锁林,徐少甫,杜淼;由胎儿成纤维细胞而来的克隆山羊(Capra hircus)[J];科学通报;1999年21期
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6 韦精卫,孟凡丽,韦英明,杨素芳,石德顺;黄牛体细胞核移植初步研究[J];广西农业生物科学;2004年04期
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4 李蕾;李尚为;靳松;秦朗;黄仲英;马黔红;李培旭;;应用颗粒细胞部分剥除法提高常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)胚胎质量和妊娠率的实验研究[A];第二届全国不育症研讨会论文汇编[C];2007年
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9 许峰;朱遂强;康慧聪;;锂-匹鲁卡品致痫促进大鼠齿状回颗粒细胞神经生发[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
10 易康乐;陈华海;李纯锦;孙艳玲;陈露;石德顺;周虚;;BDNF和NGF对牛颗粒细胞体外生长的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
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1 实习生 周英;转基因如何从小鼠到人类?[N];科技日报;2010年
2 记者 刘霞;由转基因动物生产的药物首次在美上市[N];科技日报;2009年
3 记者 熊燕;国内首例转基因猕猴在滇培育成功[N];云南日报;2010年
4 李荔;牛昱宇:转基因猕猴培育成功[N];北京科技报;2010年
5 刘征;英国专家呼吁加强转基因动物管理[N];农民日报;2002年
6 本报记者 徐虹;转基因动物有害吗?[N];四川日报;2000年
7 记者 张可喜;日本科学家培育出转基因动物[N];新华每日电讯;2000年
8 丁香 译;首个转基因动物药物获准上市[N];中国医药报;2009年
9 记者 王翰林;我国转基因动物乳腺反应器研究获突破[N];科技日报;2007年
10 吴洣麓;转基因动物将成人类天然药厂?[N];北京科技报;2006年
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1 王铁东;抗猪瘟病毒转基因猪的构建及初步研究[D];吉林大学;2009年
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3 李莉;检测Cre重组酶活性的转基因报告猪的建立[D];吉林大学;2009年
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7 高国龙;牛体细胞克隆中供体和受体细胞制备及重构胚构建的影响因素研究[D];华中农业大学;2007年
8 潘求真;利用体细胞核移植技术生产转基因山羊的研究[D];东北农业大学;2002年
9 杨东山;转基因克隆法制作人胰岛素原牛乳腺生物反应器的研究[D];内蒙古大学;2005年
10 李向臣;牛卵母细胞去核方法及体细胞核移植的研究[D];西北农林科技大学;2007年
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1 殷烈;转基因克隆山羊的再克隆[D];扬州大学;2004年
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3 胡军和;猪体细胞核移植研究[D];西北农林科技大学;2005年
4 刘春霞;马皮肤成纤维细胞体外培养与异质克隆胚构建[D];内蒙古农业大学;2004年
5 杨正田;核移植制备t-PAm山羊乳腺生物反应器的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
6 海棠;牛体细胞核移植研究[D];内蒙古大学;2005年
7 李向臣;牛孤雌胚体外培养和体细胞核移植的研究[D];西北农林科技大学;2003年
8 鲁进;山羊卵母细胞体外成熟及核移植研究[D];西北农林科技大学;2005年
9 秦蔚;ARM平台下Linux内核移植技术的分析研究与应用[D];昆明理工大学;2004年
10 于洋;利用电融合方法生产体细胞克隆小鼠[D];东北农业大学;2005年
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