收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

表达ZJ-1株新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的筛选及其免疫效力试验

张体银  
【摘要】:新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的病毒性传染病之一,广泛流行于世界上许多国家和地区,给养禽业造成了巨大的经济损失。NDV属副粘病毒属,其病毒囊膜由两种蛋白组成,其中之一为融合蛋白(Fusion,F),它参与病毒的融合与穿透,在疾病的免疫保护方面发挥着重要作用。我国目前仍以疫苗接种为主来控制该病,常用的油乳剂灭活苗和弱毒活苗对该病的控制起到重要作用,但其存在生产成本高,易散毒,使用后干扰ND疫情监测等缺点,因此,有必要研制新一代安全高效的基因工程疫苗。本实验利用本室分离的鹅源ZJ-1株NDV构建了表达F基因的4株重组鸡痘病毒(rFPV_(282E4)-SF_A、rFPV_(LP)-SF_A、rFPV_(282E4)-SF_B和rFPV_(LP)-SF_B),并对其进行遗传稳定性分析和免疫效力试验。 1 表达ZJ-1株NDV F基因重组鸡痘病毒的筛选及其遗传稳定性测定 利用FuGEN~(TM)6 Transfection Reagent进行转染,分别将含有NDV F基因的转移载体P11SF和PN11SF与282E4株和大空斑鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝斑筛选,得到纯化的重组病毒rFPV_(282E4)-SF_A、rFPV_(LP)-SF_A、rFPV_(282E4)-SF_B和rFPV_(LP)-SF_B。PCR试验表明重组病毒基因组中含有F基因;间接免疫荧光试验(IFA)表明重组病毒中的F基因能够得到表达。 重组病毒经CEF连续传20代,覆盖含x-gal的琼脂,其在CEF上形成的空斑均为蓝斑。间接免疫荧光试验表明,重组病毒传20代后F基因的表达未受影响。取0、10和20代重组病毒DNA为模板进行PCR,均可扩增出约1.7 Kb的F基因片段。取rFPV_(282E4)-SF_B和rFPV_(LP)-SF_B的0、10和20代PCR产物进行测序后与转移载体中的F基因相比,核苷酸和氨基酸无任何变化,显示了该重组病毒具有良好的遗传稳定性。 2 重组病毒的动物试验 2.1 重组病毒对SPF鸡的免疫效力 5日龄SPF鸡随机分为6组,进行皮下接种W_1FPV_(LP)、rFPV_(282E4)-SF_A、 扬州大学硕士学位论文 rFPvL产SF^、亦PvZ:2以一SF。和:FPvLP一SFB lo4PFUz只,油苗为o.Zml/只,免疫后3 周龄用1护ELDS。F48E8株NDv进行滴鼻攻击。通过EusA抗体水平和保护效率 来评价重组病毒的免疫效力,结果除wtFPvLP组全部死亡外,其余组均100%保护。 2.2重组病毒对商品鸡的免疫效力 将26日龄商品鸡随机分为7组,以105PFu/只的量分别将wtFPvLP、 rFpVZ:2E4一sF^、rFpVLP一sFA、rFpVZsZE4一sF。和亦PVL产sF。进行皮下接种,油苗为 o.Zmlz只,另外设空白对照组。免疫后21天以lo5ELnso F4sEs株Nnv滴鼻攻毒, 观察14天,其保护效率rFPVZsZE4一SF^、rFPVLP一SF^、rFPVZsZE4一SFB和:FPvLP一SFs 分别为64%、60%、52%、88%;油苗和WtFPVLP分别为1 00%、0。 3应用间接ELIsA检测鸡痘病毒抗体方法的初步建立 应用CEF扩增的鸡痘病毒(FPV)提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和 灵敏性的间接ELIsA方法来检测FPV抗体。通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被 浓度为2.7u留孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD妻0.098。 将400份FPV或者重组鸡痘病毒免疫过的实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性 检出率为81.25%(325/4 00)。此外,将该方法与琼脂扩散试验进行比较检测血清 样品,结果显示本方法的灵敏度比琼脂扩散试验灵敏400一800倍,而且还有特异性 强,操作简便、快速等优点。 综上所述,本试验成功筛选了4株重组鸡痘病毒,并且具有良好的遗传稳定 性,对SPF鸡能提供100%的保护。该疫苗的研制成功将会加速新型基因工程疫苗 替代传统灭活苗的步伐,并将为ND的防制带来新的技术手段。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张体银;孙蕾;刘武杰;刘秀梵;;表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性[J];中国预防兽医学报;2006年04期
2 甘军纪;刘武杰;彭大新;吴艳涛;刘秀梵;;表达NDVHN基因的重组鸡痘病毒的部分生物学特性研究[J];畜牧与兽医;2011年06期
3 张体银;孙蕾;梁萍;刘秀梵;;表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的筛选[J];中国兽医学报;2006年01期
4 张体银;王光锋;孙蕾;梁萍;刘秀梵;;新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的安全性及免疫效力[J];中国兽医科学;2008年02期
5 智海东,王云峰,张晶,王玫,王凤雪,童光志;传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究[J];畜牧兽医学报;2005年08期
6 甘军纪;田志鹏;陶鸽;陈素娟;彭大新;刘秀梵;;单表达和共表达NDVF和HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的免疫效力比较试验[J];中国预防兽医学报;2010年10期
7 贾雷立,金宁一,夏志平,金扩世;新城疫病毒cDNA探针在重组鸡痘病毒鉴定中的应用[J];中国兽医学报;2004年03期
8 智海东,王云峰,王玫,王利丽,王凤雪,张绍杰,童光志;新城疫病毒F基因与传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒免疫保护产生时间的测定[J];中国兽医科技;2005年01期
9 刘武杰;仇旭升;马怀良;孙蕾;陈素娟;彭大新;刘秀梵;;三种重组鸡痘病毒联合与单独免疫效力比较[J];中国免疫学杂志;2008年06期
10 王云峰;;鸡痘病毒载体多价基因工程疫苗及禽流感等亚单位疫苗研制[J];中国农村科技;2006年08期
11 姜焱,刘伟忠,吴艳涛,彭大新,张如宽,刘秀梵;新城疫病毒F48E8株核衣壳蛋白基因在鸡痘病毒中的表达及其部分序列分析[J];农业生物技术学报;1999年03期
12 陶静;叶红;;新城疫F蛋白基因工程疫苗的研究现状[J];安徽农业科学;2011年17期
13 田占成;孙永科;王云峰;智海东;刘胜旺;孙惠玲;王玫;童光志;;表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒对SPF鸡的免疫保护作用[J];畜牧兽医学报;2006年06期
14 曹殿军,刘惠莉,王莉林,闵平,张莹,卢景良;鸡新城疫病毒HN基因在重组鸡痘病毒中的表达及其保护性的研究[J];中国免疫学杂志;1998年01期
15 邢力,彭大新,朱爱华,刘秀梵,张如宽;马立克氏病病毒Rispens株B抗原基因的克隆及其重组鸡痘病毒的构建[J];微生物学报;1999年02期
16 丁巧玲,陈溥言;马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白gB在重组鸡痘病毒中的表达[J];畜牧兽医学报;2003年01期
17 韦栋平,徐忠林,张如宽,刘秀梵;新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立[J];肉品卫生;2004年07期
18 张绍杰,童光志,王柳,仇华吉,倪建强,孟松树,于力,王玫;传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB在重组鸡痘病毒中的表达[J];中国预防兽医学报;2000年03期
19 程坚,刘秀梵,彭大新,吴艳涛;表达鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建[J];农业生物技术学报;2002年02期
20 甘军纪;刘秀梵;彭大新;;重组鸡痘病毒活疫苗X-gal染色空斑计数法的建立[J];畜牧与兽医;2010年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 智海东;王云峰;王玫;仇华吉;童光志;;表达新城疫病毒F_(48)E_9株融合蛋白重组鸡痘病毒的构建[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
2 胡北侠;吴艳涛;刘秀梵;张如宽;;新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
3 孟春春;仇旭升;徐丹;陈鸿军;于圣青;丁铲;;两株ClassⅠ新城疫病毒的全基因组序列测定及分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
4 姜艳华;黄川;宋德志;高灵茜;杨哲;黄企光;赖振屏;罗金莲;樊晓晖;;三株新城疫病毒体外对人喉癌Hep-2细胞杀伤效应的比较研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
5 刘华雷;陈云霞;管峰;郑东霞;赵云玲;王志亮;;Class I新城疫病毒反向遗传操作系统建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 孙英杰;陈鸿军;詹媛;仇旭升;于洋;宋翠萍;于圣青;丁铲;;新城疫病毒CLASSI强毒株磷蛋白的表达及细胞内定位[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 于洋;仇旭升;徐丹;詹媛;陈鸿军;于圣青;丁铲;;ClassⅠ和ClassⅡ新城疫病毒微型基因组的构建及比较[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
8 徐玲霞;刘梅;程旭;周生;韦玉勇;戴亚斌;;鸭源新城疫病毒强毒株P基因及V蛋白的遗传分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
9 胡静涛;杨文涛;肖冲;王泽;丁壮;王春凤;;GFP标记的重组新城疫病毒HN基因乳酸菌表达载体的构建[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
10 鲁会军;金扩世;韩松;金宁一;;猪源新城疫病毒JL01株分离鉴定及F基因遗传进化分析[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴艳涛;新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2000年
2 孙蕾;外源基因插入不同复制非必需区影响重组鸡痘病毒抵抗母源抗体干扰的能力[D];扬州大学;2005年
3 王云峰;表达多种外源基因的鸡痘病毒载体疫苗构建及免疫学评价[D];中国农业科学院;2005年
4 胡海霞;表达C亚型禽偏肺病毒糖蛋白和融合蛋白的重组新城疫病毒二价苗的构建及免疫效力评价[D];吉林大学;2011年
5 韦栋平;共表达新城疫病毒融合蛋白基因和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[D];扬州大学;2004年
6 刘武杰;H5亚型禽流感或新城疫不同遗传背景的毒株在鸡体的交叉保护性[D];扬州大学;2009年
7 夏志平;共表达NDV F、IBDV VP0基因的重组鸡痘病毒构建及其实验免疫研究[D];中国人民解放军军需大学;2002年
8 甘军纪;表达鸡新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究[D];扬州大学;2010年
9 朱继红;NDV HN基因和CAV Apoptin基因对宫颈癌细胞的体外杀伤作用及其体内抑瘤效应研究[D];吉林大学;2008年
10 刘培欣;新城疫病毒单克隆抗体制备及部分NP蛋白抗原表位鉴定分析[D];东北农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡北侠;新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2001年
2 张体银;表达ZJ-1株新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的筛选及其免疫效力试验[D];扬州大学;2004年
3 徐忠林;共表达NDV F 基因与H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[D];扬州大学;2005年
4 曲鲁江;新城疫病毒单克隆抗体的建立及其遗传变异分析研究[D];新疆农业大学;2001年
5 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
6 孙委委;两株新城疫病毒分离株全基因组序列的测定及在CEF和鸡胚传代的含量变化分析[D];中国农业科学院;2010年
7 梅双双;新城疫病毒野毒株的分离鉴定及其融合蛋白部分序列同源性分析[D];河北农业大学;2002年
8 许凌峰;新城疫病毒F基因和传染性法氏囊病毒VP0基因在重组鸡痘病毒中的共同表达及其免疫原性[D];中国人民解放军军需大学;2002年
9 王海燕;新城疫病毒F_48E_9株接种鸡胚的病理学观察及其P蛋白基因的克隆与表达[D];内蒙古农业大学;2001年
10 米志强;新城疫病毒昌黎株F基因的序列分析、表达及重组病毒免疫原性的研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 惠岭;鹧鸪新城疫咋防治[N];河北农民报;2006年
2 吕纪增;鹧鸪新城疫的防治[N];中国畜牧兽医报;2006年
3 张艺兵 黄丛平;山东局推广RT-PCR检测方法[N];中国国门时报;2004年
4 河北省辛集市畜禽科技服务中心 肖亚彬 任灵霞 梁剑峰;蛋鸡传喉和新城疫混合感染[N];江苏农业科技报;2006年
5 郑安明;美国研制成功新一代新城疫疫苗[N];中国国门时报;2006年
6 中国科学技术信息研究所;墨西哥育出新城疫疫苗玉米[N];农资导报;2006年
7 清苑职教中心 张俊杰;当前流行鸡病好难治[N];河北农民报;2006年
8 邢台市兽医院 邢兰君;治蛋鸡新城疫和肾传支混合感染中西医结合疗效好[N];河北农民报;2007年
9 记者 彭溢;哈兽研抗击禽流感再出“杀手锏”[N];黑龙江日报;2008年
10 老贵;家禽传染病的新特点[N];云南科技报;2008年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978