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《扬州大学》 2004年
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奶牛γ-干扰素基因的表达及其在乳房炎防治中的初步应用

许金俊  
【摘要】:γ-干扰素(IFN-γ)是在病毒等特定诱生剂的诱导下,由机体的T细胞和NK细胞所分泌产生的一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的细胞因子,一直是现代医学和生物学领域研究的热点,利用基因工程技术生产的商品化重组γ-干扰素已经成功应用于人类疾病的预防和控制。与人IFN-γ相比,动物IFN-γ的研究普遍滞后,自Cerretti 1986年首次报道牛IFN-γ(BoIFN-γ)基因后,国外学者先后利用多种表达系统表达出了重组奶牛IFN-γ(rBoIFN-γ),并对应用rBoIFN-γ控制奶牛乳房炎进行了一些研究探讨,国内这方面的研究尚处于空白。为了开拓利用rBoIFN-γ控制奶牛乳房炎的新途径,克服传统的依靠药物和疫苗手段控制乳房炎所存在的效果差、细菌耐药性增加、药物残留和免效失败等诸多方面的缺陷,本研究在克隆出BoIFN-γ基因的基础上,利用多种表达系统对BoIFN-γ基因进行了表达和表达产物活性比较分析,选择出具有较高生物学活性的rBoIFN-γ,并在奶牛乳房炎治疗中进行了小规模田间应用试验,旨在为临床上奶牛乳房炎的防治提供新方法和新手段。 一、奶牛γ-干扰素基因成熟肽片段在大肠杆菌中的高效可溶性表达及其特异性抗体的制备 根据已发表的奶牛BoIFN-γ基因的cDNA序列设计—对引物,应用一步法逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从经PHA刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出BoIFN-γ基因不含信号肽的成熟肽特异性cDNA片段。将RT-PCR产物克隆到pUCm-T载体,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的BoIFN-γ基因序列完全正确。用限制性内切酶将该基因片段从pUCm-T载体切下后按正确的阅读框架亚克隆入大肠杆菌表达载体pGEX-6P-1谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因的下游,经IPTG诱导和SDS-PAGE比较分析证实表达出了与预期大 扬州大学博士论文 小42 kDa相符的GST一BOIFN·丫融合蛋白。超声波裂解分析发现融合蛋白主要以 可溶性形式得到表达,经过薄层扫描测定可溶性融合蛋白表达量约占菌体可溶性 总蛋白的25%。通过VSV一MDBK细胞病变抑制试验证实,融合蛋白具有一定的 生物学活性,在MDBK细胞上抑制vsv病毒的活性可达到1 .6384x104U/mg。 通过SDS一PAGE电泳分离融合蛋白,切取含目的条带凝胶,液氮冻干碾碎后 作为免疫原腹腔免疫BALB/C小鼠,免疫4一5次后采集血清,经过间接EUSA试 验证实所制备的抗体特异性的针对GST一BOIFN一丫融合蛋白,为下一步制备抗 rBOIFN一Y特异性单抗和rBofFN一丫的表达鉴定提供了有力的保障。 二、抗重组奶牛Y一干扰素特异性单克隆抗体的研制及鉴定 利用大肠杆菌表达的融合蛋白GST-BOIFN一丫经SDS一PAGE电泳后,切取融合 蛋白条带作为抗原腹腔免疫BALB/C小鼠,取脾脏细胞与SP刀O细胞进行细胞融 合,以表达GST-BOIFN一丫的大肠杆菌超声波裂解物和表达GST的大肠杆菌的超声 波裂解物分别作为包被抗原,通过间接EUSA方法比较筛选到2株效价高、性质 稳定的只与表达GsT一BOIFN一的大肠杆菌超声波裂解物反应而不与表达GST的大 肠杆菌的超声波裂解物反应的针对rBOIFN一丫的特异性单克隆抗体,分别命名为 4A3和4G5。Westem一blotting印迹试验证实,本研究所获得的单克隆抗体 4A3和 4G5均能与IPTG诱导过的表达GST一BofFN一Y融合蛋白的重组菌反应,识别分子 量为42kDa特异性蛋白质条带,与IPTG诱导的表达GST的非重组菌不反应,进 一步确认得到的单抗特异性识别rBOIFN一Y。间接ELSIA试验检测证实,4A3单 抗腹水的效价可以达到1:1.3x107,细胞上清效价可达到卜25600,4G5单抗腹水 和细胞上清的效价均比4A3略低。应用捕获ELisA方法进行亚类鉴定结果表明单 抗4A3为IgGZb亚型,单抗4G5抗体亚型为191迈。中和试验结果表明,单抗4A3 对大肠杆菌表达的rBofFN一丫具有一定的中和作用。本研究所获得的两株单抗为下 一步利用peDNA和杆状病毒真核表达系统表达rBofFN一Y时表达产物的检测鉴定 和表达产物的亲和层析纯化提供了可靠的手段和保障。 三、奶牛补干扰素基因的克隆及其在COs一1细胞中的暂态表达 由于原核表达系统的诸多缺陷,为了开发真核表达的安全、高效、廉价的 rB01FN一丫用于生产实践,同时鉴于许多基因在真核表达系统中表达产量极低或不 表达,我们对刀口刀刁叭Y基因在COS一1细胞中进行了暂态表达试验.应用两步法 RT·PCR技术从经PHA刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出含信号肤 许金俊:奶牛丫一干扰素基因的表达及其在乳房炎防治中的初步应用 的刀协刀刁叭Y基因cDNA片段.将扩增出的刀。刀刁瞬r基因cDNA克隆到pMD 18一T 载体中,经过限制性酶切分析筛选正向插入的克隆并测序.将该基因片段从 pMD18一载体中用角”dm和刀。功Hl双酶切后克隆到真核表达载体 peDNA3.l龙eo。(+)中,构建真核表达载体peDNA一BOIFN一丫,通过脂质体转染 COS一1细胞,用抗rBOIFN一Y单抗和FrrC标记的羊抗鼠IgG分别作为一抗和二抗 进行间接免疫荧光实验(IEA)检测,结果表明,在COS一1细胞的细胞膜和胞浆内 均有rBOIFN一Y的表达,通过VSV一MDBK细胞病变抑制试验证实,转染后细胞培 养上清液具有一定的干扰素活性,转染后72h时细胞培养上清液在MDBK细胞上 抑
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S858.23

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 夏伦斌;王新华;连宏军;薄新文;钟发刚;;γ干扰素及其在动物疾病防控中的应用[J];动物医学进展;2007年05期
2 王玲;李宏胜;陈炅然;苗小楼;王正兵;尚若锋;;细胞因子在奶牛乳房炎生物学防治中的应用[J];中国畜牧兽医;2011年12期
3 胡晓静;刘棋;付薇;徐贤坤;熊毅;;鹅γ-干扰素的原核表达及抗病毒活性研究[J];畜牧与兽医;2012年02期
4 宋亚攀;杨利国;;中国奶牛乳房炎防治研究进展[J];中国奶牛;2010年12期
5 古小彬;杨光友;赖松家;杨厚春;孙家刚;彭文杰;郑晶;廖艳;沈爱琼;王淑贤;;长毛兔和獭兔IFN-γ基因的克隆与真核表达及表达产物的生物学活性[J];中国兽医科学;2010年12期
6 许金俊;秦爱建;刘岳龙;金文杰;;细胞因子在奶牛乳房炎防治中的应用研究进展[J];中国预防兽医学报;2006年06期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 王玲;李宏胜;陈炅然;苗小楼;王正兵;郭天芬;;细胞因子在奶牛乳房炎生物学防治中的应用[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 曹立亭;乳酸链球菌素治疗奶牛临床型乳房炎的研究[D];浙江大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 孙谦;马冠状病毒核蛋白基因片段的表达及其抗体检测试剂盒的研制[D];扬州大学;2007年
2 夏伦斌;绵羊γ干扰素(IFN-γ)基因的克隆、表达与抗病毒活性初步研究[D];石河子大学;2007年
3 邓成钢;犬IFN-α基因的克隆、表达及其生物学活性的研究[D];扬州大学;2008年
4 王红;犬α-干扰素的表达及其治疗犬病毒性肠炎临床疗效观察[D];中国农业科学院;2009年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 程坚,刘秀梵,彭大新,刘红旗,吴艳涛,张如宽;共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[J];病毒学报;2003年01期
2 吴志光,夏春,汪明,蒋金书;鸡II型干扰素存在亚型[J];动物医学进展;2001年01期
3 严作廷,李宏胜,郁杰,巩忠福;中草药防治奶牛乳房炎的研究概况[J];动物医学进展;2003年02期
4 黄汉菊,黄浩,张缨,王帆,黄振武;IFN-γ在沙眼衣原体感染的细胞培养中的影响[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2001年02期
5 许金俊,秦爱建,刘岳龙,金文杰,李瑞芳;奶牛γ-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达[J];扬州大学学报;2003年01期
6 文浩,周学良;重组人γ-型干扰素单克隆抗体的鉴定[J];中国生物制品学杂志;1996年02期
7 徐建生,成大荣,陈雷,董国雄,李俊宝;重组融合蛋白GST SLT ⅡeB表达条件的研究[J];扬州大学学报(自然科学版);1999年04期
8 林锋强,潘杭君,胡松华;奶牛乳房炎疫苗研究进展[J];中国奶牛;2002年01期
9 戴建华,秦爱建,许金俊,刘岳龙,金文杰;鸡γ-干扰素基因的克隆及其在原核和真核系统中的表达[J];中国预防兽医学报;2003年04期
10 郭英,杨丽新,王坤,闵军,陈积圣;含人γ-干扰素基因真核表达载体的构建及其在肝癌细胞中的表达[J];中国普通外科杂志;2002年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王丽芳;单保恩;单铁强;;香加皮三萜类化合物对甲基苄基亚硝胺诱导的食管癌大鼠调节性T细胞功能的影响[J];癌变·畸变·突变;2010年03期
2 刘营;李玉保;;鲁西地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J];安徽农学通报;2008年19期
3 任曙光;酉靖国;朱玉涛;霍桐树;吴建华;秦建华;;奶牛乳房炎的免疫预防[J];安徽农业科学;2007年31期
4 李超;林祥梅;李全芬;韩雪清;;干扰素单克隆抗体的研究进展[J];安徽农业科学;2010年05期
5 李娟;单长民;;干扰素通过上调BAX蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡的研究[J];安徽农业科学;2012年08期
6 张捷;乐威;陈家宽;;我国奶牛乳房炎致病性金黄色葡萄球菌血清型分布[J];氨基酸和生物资源;2006年04期
7 张珠明;汪仁莉;何生虎;;吴忠市奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验[J];现代农业科技;2009年17期
8 王兴满;汤仁树;俞海洋;赵俊;王明丽;;两种细胞株滴定重组猪α干扰素效价的比较研究[J];现代农业科技;2009年24期
9 鲍鸣,仲大莲,许发芝,余为一,李槿年;鸡γ-干扰素基因的克隆与原核表达[J];安徽农业大学学报;2004年01期
10 侯伟,钱冬萌,闫志勇,赵百慧,付强,王斌;基因变构IL-2重组克隆的构建[J];青岛大学医学院学报;2003年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵丹萍;陶彬;陈立功;李艳琴;宋勤叶;李潭清;杨芳;李红园;袁洪兴;;PCV2感染对猪瘟弱毒疫苗接种猪免疫应答的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 宋亚攀;杨利国;孙丽萍;宋洛文;滑国华;;奶牛乳房炎防治新技术简介[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
3 郭庆;王鲁;朱伟;何炳坤;;贵阳地区奶牛乳房炎的调查及综合防治措施[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
4 王英年;刘加洪;孙荣丽;张可佳;官明德;于华;李黎;张春玲;;P-选择素、IL-1α、sFas、sFasL、AM检测对结核性与恶性胸腔积液鉴别诊断价值暨与CEA比较系列研究[A];结核与肺部疾病论文集[C];2005年
5 陈晓;陈莉;陈亚琼;杨振华;;T_(H1)型/T_(H2)型细胞因子对体外培养人早孕滋养层细胞HCG分泌及其PCNA和Bcl-2表达的影响[A];第四届全国不孕症暨保留生育功能微创手术研讨会论文集[C];2010年
6 雷楗勇;张莲芬;杨健良;金坚;;人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
7 王英杰;王长法;高运东;仲跻峰;安利国;杨桂文;陈营;杨宏军;;应用双重PCR方法对奶牛乳腺炎金葡菌溶血毒素进行分型[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
8 魏雪涛;李银;刘宇卓;张敬峰;;鸡干扰素基因的分子克隆与序列测定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
9 钱琨;尹天燕;赵士学;金文杰;秦爱建;;牛γ干扰素快速特异检测方法的建立与应用[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
10 孟凡会;田青武;曹永献;刘忠强;孙波;赵洪国;;深低温冻存对脐血单个核细胞免疫特性影响的研究[A];第五届全国低温生物医学及器械学术大会会议论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜淑贞;玉米赤霉烯酮对断奶仔猪的毒性初探及改性蒙脱石的脱毒效应研究[D];山东农业大学;2010年
2 陈志芬;人白细胞介素15与18协同作用肿瘤浸润淋巴细胞对结肠癌细胞杀伤功能的研究[D];武汉大学;2010年
3 孙叙敏;复方阿胶浆协同化疗的减毒增效作用及其机制实验研究[D];北京中医药大学;2011年
4 陆晔斌;低氧诱导胰腺癌免疫逃逸机制及相关信号通路的初步研究[D];中南大学;2010年
5 卫娜;鹅白细胞介素2受体α链与白细胞介素18特性的初步研究[D];东北农业大学;2011年
6 杨丰利;南宁市郊奶牛乳腺炎相关研究及其对繁殖性能的影响[D];广西大学;2011年
7 魏萍;SAg-SEB和MDV诱导雏鸡与荷瘤小鼠免疫学变化及细胞凋亡的研究[D];东北农业大学;2000年
8 李术;奶山羊氟病毒理学的研究[D];东北农业大学;2001年
9 宋慧锋;人胎儿皮肤无瘢痕愈合机制的实验研究[D];第二军医大学;2001年
10 刘辉;LPS诱导的巨噬细胞珠高、低反应并存及其机制的研究[D];第二军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈玉红;生物活性预混料对断奶仔猪免疫功能影响的研究[D];华中农业大学;2010年
2 龚瑞;粘附素ClfA和Cna对金黄色葡萄球菌乳腺炎的免疫保护研究[D];华中农业大学;2010年
3 吴学宝;猪瘟病毒影响RANTES产生分子机制的研究[D];华中农业大学;2010年
4 张元鹏;趋化因子类病毒受体的研究[D];山东农业大学;2010年
5 周凡;中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞增殖作用的研究[D];安徽农业大学;2010年
6 梅雪;毒素清对肺炎痰热证大鼠肺组织JAK/STAT信号转导通路的影响[D];河南中医学院;2010年
7 兰海滨;白附子混悬液对H_(22)荷瘤小鼠端粒酶活性及p16和bcl-2基因表达相关性研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
8 卜献策;中药复方对脾气虚变应性鼻炎大鼠鼻黏膜IL-2,β1-Defensin mRNA及血清IgE表达量的影响[D];成都中医药大学;2010年
9 白丽欣;黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果的研究[D];河北农业大学;2011年
10 李蕾;蛤蚧蛋白分离提取及其抗肿瘤分子机制研究[D];广西医科大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡贞延;钱凤芹;秦良勇;;奶牛隐性乳房炎的诊断研究——JMT与CMT的效能比较[J];山东农业科学;1991年05期
2 连京华,李玉峰,高广尧,蔡蕊,王爱琴;兽用干扰素的研究进展[J];山东农业科学;2005年01期
3 李增举,成建国;盐酸左旋咪唑对奶牛隐性乳房炎的治疗试验[J];山东农业科学;1998年02期
4 宋华容;李正国;罗瑞卿;关辉;谷新利;张飞;周霞;;石河子地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及中药抑菌试验[J];安徽农业科学;2009年09期
5 王珣章,谢伟东,龙綮新,苏德明,钟江,蒲蛰龙;形成多角体的杆状病毒载体系统的建立[J];病毒学报;1991年03期
6 刘岳龙,秦爱建,金文杰,叶建强,吉荣,崔治中,段玉友;鸡贫血病毒VP1基因在大肠杆菌中的高效表达及其生物学特性的初步分析[J];病毒学报;2002年01期
7 程坚,刘秀梵,彭大新,刘红旗,吴艳涛,张如宽;共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[J];病毒学报;2003年01期
8 郭丽,王健伟,洪涛;冠状病毒分子生物学研究进展[J];病毒学报;2003年04期
9 侯引绪;张玉仙;魏朝利;史建国;李学武;;奶牛真菌性乳房炎症状及防治[J];北京农业职业学院学报;2007年03期
10 李洪忠;蔡生胜;;鲜牛奶中抗生素残留的检测[J];中国牛业科学;2008年02期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 韩春来;鸡干扰素与干扰素受体重组蛋白的生物学特性及其相互作用[D];中国农业大学;2005年
2 李成应;治疗奶牛乳房炎的复方中药制剂的开发研究[D];内蒙古农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 程青芳;防治泌乳期奶牛隐性乳房炎中草药的筛选及作用机理的研究[D];河北农业大学;2002年
2 陈涛;猪α型干扰素基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[D];南京师范大学;2002年
3 丁忠庆;鸡γ干扰素基因的克隆和表达及其多克隆抗体的制备[D];东北农业大学;2003年
4 苑方重;中药新剂型防治奶牛乳房炎的研究[D];河北农业大学;2003年
5 崔焕忠;奶牛乳房炎基因工程亚单位疫苗实验免疫研究[D];吉林农业大学;2004年
6 王彤光;犬细小病毒单克隆抗体在治疗犬细小病毒病上的应用研究[D];西北农林科技大学;2003年
7 王贇;奶牛乳腺炎多联疫苗的研制[D];西北农林科技大学;2004年
8 马艳丽;Nisin-中药复合高效环保型饵料添加剂的研究[D];河北工业大学;2005年
9 孙先明;水溶性壳聚糖对奶牛乳房炎防治效果的研究[D];山东农业大学;2005年
10 赵英杰;长白猪IFN-γ基因的克隆、序列分析、原核高效表达及其抗病毒活性的测定[D];吉林大学;2005年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘薇;吴迪梅;;北京市奶牛养殖结构及粪污处理现状分析[J];北京农业;2011年36期
2 白雪;赵建增;梁志选;屈雪琪;李勇;梅林;温涛;何斌;杨举;罗胜军;邢海云;高英杰;;IFN-γ研究进展及其在猪繁殖与呼吸综合征研究中的应用[J];中国畜牧兽医;2010年12期
3 王玲;李宏胜;陈炅然;苗小楼;王正兵;尚若锋;;细胞因子在奶牛乳房炎生物学防治中的应用[J];中国畜牧兽医;2011年12期
4 程兰玲;曹贵方;温世勇;赵鹏伟;关洪敏;菅瑞珍;;荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的差异表达[J];中国畜牧兽医;2012年06期
5 赵彪;张清;张玲;王德云;刘家国;武毅;张玉清;范云鹏;胡元亮;;中药复方抗鸡新城疫作用及其对雏鸡免疫内分泌调节的影响[J];甘肃农业大学学报;2012年04期
6 刘钦松;张丛丛;刘孟刚;许彤;;人源白细胞介素(h-IL2)基因克隆及原核表达的研究[J];华北农学报;2011年S2期
7 梅淑伟;玉荣;白秀珍;;中药治疗奶牛乳房炎 解决“抗生奶”问题[J];畜牧与饲料科学;2012年Z1期
8 潘晓梅;窦永喜;才学鹏;;猪干扰素-γ的研究进展[J];生物技术通报;2008年06期
9 刘洪波;吴灿权;谢颖;梁洪;蔡昌学;;表达鼠干扰素γ的重组卡介苗的构建及鉴定[J];中国生物制品学杂志;2011年08期
10 王彬;汤德元;李春燕;曾智勇;王凤;甘振磊;周厚品;;长白猪IL-4基因克隆及真核表达载体的构建[J];猪业科学;2010年11期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 王玲;李宏胜;陈炅然;苗小楼;王正兵;郭天芬;;细胞因子在奶牛乳房炎生物学防治中的应用[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 杨雪峰;复方阿莫西林纳米乳的制备及其对奶牛临床型乳房炎的药效学研究[D];西北农林科技大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 傅军科;奶牛GM-CSF的克隆、表达、活性检测与乳房炎治疗试验[D];石河子大学;2009年
2 张浒;PRL基因多态性与荷斯坦奶牛DHI测定指标的关联分析[D];华中农业大学;2011年
3 潘晓梅;猪干扰素-γ的表达、纯化及生物学活性研究[D];新疆农业大学;2008年
4 金红岩;抗鹅γ-干扰素单克隆抗体制备及鉴定[D];东北农业大学;2008年
5 武玉梅;牛IFN-γ与奶牛乳房炎S. aureus FnBPA D区基因的串联及表达[D];内蒙古农业大学;2009年
6 欧阳萍;人溶菌酶—抗菌肽融合表达及其对小鼠乳房炎的疗效观察[D];吉林大学;2009年
7 朱辉;秦岭大熊猫IFN-γ基因的克隆、表达及免疫活性研究[D];西北农林科技大学;2009年
8 谭明芬;犬β干扰素的基因克隆、原核表达及活性测定[D];扬州大学;2010年
9 白雪;不同CSF免疫状态下猪体PRRS免疫状态及IFN-γ分泌细胞的变化特征的研究[D];吉林大学;2012年
10 李莹莹;犬用干扰素的制备方法研究及质量体系建立[D];长春工业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王志亮,彭大新,张如宽,焦新安,崔虹,侯云德,刘秀梵;中国疫苗株鸡痘病毒插入载体的构建与MDV糖蛋白B的表达[J];病毒学报;1996年01期
2 吴志光,夏春,汪明,蒋金书;鸡II型干扰素存在亚型[J];动物医学进展;2001年01期
3 冯世玉,冯敏,费德财,吴风斌,于跃林,冯翠平,杨春华,王培顺;奶牛乳房炎治疗药剂——乳疾宁的研究[J];黑龙江畜牧兽医;1996年10期
4 马井岩,马玉军;奶牛隐性乳房炎治疗试验报告[J];黑龙江畜牧兽医;1997年04期
5 甘志华,李启良,蒋武成,陈衍基,刘文福,汪南生,冯旗德,唐似男;复方丹参液治疗奶牛隐性乳房炎试验[J];湖南农学院学报;1995年01期
6 程坚,吴艳涛,彭大新,刘秀梵,张如宽;鸡γ-干扰素基因的克隆与鉴定[J];农业生物技术学报;2000年03期
7 李宏胜,杜小丽,徐继英;毛白杨叶提取物对奶牛乳房炎抑菌观察[J];天津畜牧兽医;1999年01期
8 成大荣,徐建生,董国雄,李俊宝;类志贺氏菌毒素型变异体基因的克隆与鉴定[J];扬州大学学报(自然科学版);1999年03期
9 徐建生,成大荣,陈雷,董国雄,李俊宝;重组融合蛋白GST SLT ⅡeB表达条件的研究[J];扬州大学学报(自然科学版);1999年04期
10 高庆田,朱其苏;“中药乳炎消油剂”临床应用综述[J];中国奶牛;2000年04期
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中国期刊全文数据库 前10条
1 何德兵,杨宗智,薛贡来,黄大松;中西兽医结合治疗奶牛临床型乳房炎效果观察[J];新疆畜牧业;1988年03期
2 周利青,王文魁;奶牛乳房炎的研究进展[J];畜牧兽医科技信息;2005年05期
3 王娜;段小卫;;奶牛乳房炎的防治措施[J];畜牧与饲料科学;2010年01期
4 董富贵;徐军;刘永前;;谈中草药治疗奶牛乳房炎[J];现代农业科技;2009年11期
5 胡辉忠;胡苍云;;用中药方剂治疗奶牛的各种乳房炎[J];现代农业科技;2007年17期
6 尼玛;;奶牛乳房炎的防治[J];青海畜牧兽医杂志;2010年01期
7 刘君;陈创夫;褚明亮;王远志;;牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定[J];动物医学进展;2008年09期
8 李月恒;抑制奶牛干奶期乳房炎的新药──干奶康乳剂[J];动物科学与动物医学;1996年01期
9 夏祖和;张淼;;关于中草药防治奶牛乳房炎[J];金陵科技学院学报;2006年02期
10 张凤茹;张建军;刘美丽;;浅析奶牛乳房炎的综合防治[J];内蒙古科技与经济;2007年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李跃;张玉;;奶牛安全生产与环境[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(上册)[C];2004年
2 曹凯军;田真;高继伟;冯英;;如何让奶牛有回归自然的感觉——新西兰FONTERRA公司天津奶牛场设计感受[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
3 ;北京奶牛中心——国家重点高科技、产业化奶牛良种繁育基地[A];中国牛业高峰会暨中国畜牧业协会牛业分会成立大会论文集[C];2005年
4 王文义;史泽根;冯全福;马卫华;;影响奶牛繁殖效率的主要因素及控制措施[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
5 李瑞芳;秦爱建;许金俊;;抗奶牛γ-干扰素特异性单克隆抗体的研制及其特性[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
6 王铭华;;影响奶牛产奶量的原因及对策[A];齐齐哈尔市畜牧业发展战略研讨会论文集[C];2003年
7 倪志江;高振江;李伟;;奶牛精确饲喂实验研究初报[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
8 罗伯特·华森;;国际奶牛育种新技术[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
9 王建平;王加启;;热应激奶牛血液中热休克蛋白表达量的研究[A];中国畜牧兽医学会养牛学分会2011年学术研讨会论文集[C];2011年
10 邱昌功;;奶牛生产性能测定(DHI)中常见问题的分析及应对措施[A];2010中国牛业进展[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;秋天奶牛高产饲养法[N];湖北科技报;2009年
2 上海光明荷斯坦牧业有限公司牧场管理部 王赞江;浅谈规模化奶牛场奶牛乳腺保健[N];中国畜牧兽医报;2009年
3 安钢集团附属企业公司三博乳业分公司 陈定文 席进华;延长奶牛利用年限的技术措施[N];河南科技报;2009年
4 张永根;夜间巧管理 奶牛产奶多[N];鸡西日报;2009年
5 王伟;东兴村奶牛率先告别“大锅饭”[N];黑龙江经济报;2008年
6 本报记者 张五四;老吴养奶牛依然很无奈[N];中国畜牧兽医报;2011年
7 杨晓利;多汁料对奶牛很重要[N];山西科技报;2000年
8 刘钢;奶牛产后卧地不超咋治[N];山西科技报;2004年
9 郝德权;奶牛增产十二招[N];山东科技报;2001年
10 上海光明荷斯坦牧业有限公司 王赞江;奶牛驱虫保健[N];中国畜牧兽医报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 许金俊;奶牛γ-干扰素基因的表达及其在乳房炎防治中的初步应用[D];扬州大学;2004年
2 袁峥嵘;金黄色葡萄球菌诱导奶牛实验性乳腺炎研究[D];中国农业科学院;2011年
3 牛丽莉;奶牛乳房炎相关血浆蛋白质初步分析[D];中国农业科学院;2009年
4 王建锋;临床型奶牛乳房炎乳腺组织亚细胞比较蛋白质组学研究[D];甘肃农业大学;2009年
5 柴春彦;铜缺乏症奶牛神经损伤分子机理[D];东北农业大学;2000年
6 刘东明;证据不确定性推理和奶牛疾病治疗专家系统的研究[D];东北农业大学;2004年
7 乔良;奶牛维生素A瘤胃降解规律及过瘤胃保护维生素A效果评价的研究[D];内蒙古农业大学;2008年
8 许庆方;影响苜蓿青贮品质的主要因素及苜蓿青贮在奶牛日粮中应用效果的研究[D];中国农业大学;2005年
9 梁建光;有机锌源的化学特性及其对奶牛的生物学活性和作用机理研究[D];中国农业科学院;2006年
10 张进隆;奶牛卵母细胞及早期胚胎基因表达分析[D];甘肃农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王美秀;奶牛微生态制剂的研制[D];内蒙古农业大学;2005年
2 林锋强;人参皂甙对奶牛金黄色葡萄球菌乳房炎菌苗的免疫佐剂作用[D];浙江大学;2002年
3 张夫千;奶牛抗乳房炎性状候选基因的研究[D];宁夏大学;2005年
4 夏耘;不同β-胡萝卜素水平对奶牛产奶量及乳品质的影响[D];甘肃农业大学;2007年
5 袁曦;中国荷斯坦奶牛β-防御素基因LAP分子克隆及真核表达初步研究[D];四川农业大学;2009年
6 马健;奶牛低酸度酒精阳性分子机理及其与热休克蛋白(HSP70)关系的研究[D];山东农业大学;2009年
7 朱剑英;复方蜂胶擦剂治疗奶牛乳腺炎的研究[D];中国农业大学;2005年
8 黄瑛;昌吉市奶牛结核病、布鲁氏菌病普查与防治对策研究[D];西北农林科技大学;2005年
9 冯晓琼;抗奶牛孕酮单克隆抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立[D];吉林大学;2007年
10 陈建晖;奶牛乳腺上皮细胞系的建立[D];东北农业大学;2008年
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