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重组禽腺病毒JS-eGFP的生物学特性与致病性研究

张科  
【摘要】:根据群特异性抗原的不同,禽腺病毒(Fowl Adenovirus, FAV)属可分为3群:Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅲ群,其中Ⅰ群禽腺病毒包括从鸡、火鸡、鹅及其它禽类分离获得的腺病毒。在免疫学上,Ⅰ群禽腺病毒能诱导感染鸡产生高水平的中和性循环抗体,即使在高水平循环抗体存在的背景下,宿主仍然可受到病毒的再次感染,而且病毒在局部黏膜系统长期复制。因此,Ⅰ群禽腺病毒有望作为良好的、可持续复制的活病毒载体侯选病毒。 复制非必需片段的筛选对于将禽腺病毒构建成病毒活载体至关重要。本实验室前期从健康鸡群中分离出一株Ⅰ群禽腺病毒,并对其复制非必需片段进行了鉴定,构建了表达增强型绿色荧光蛋白eGFP的重组病毒rFAVI-eGFP。在此基础上,本研究对该重组病毒的部分理化特性和在鸡体内的复制和致病性进行了初步的研究。 一、表达增强型绿色荧光蛋白的重组Ⅰ群禽腺病毒部分理化特性与致病性的初步研究 对rFAVI-eGFP的特性研究结果表明,重组病毒rFAVI-eGFP具有凝集大鼠红细胞的特性,在形态上与野生病毒FAVI-JS没有区别;rFAVI-eGFP在CEK上盲传40代后,其荧光强度与初代没有显著差别;通过病毒蚀斑试验,也没有发现野生病毒斑的形成;此外,rFAVI-eGFP在CEK和鸡胚上的生长曲线与野生病毒FAVI-JS基本相似;这些结果证实,该重组病毒是稳定遗传的。该病毒在体外细胞上能够复制,为禽腺病毒重组基因工程疫苗的研究提供了条件。 为了弄清楚rFAVI-eGFP和FAVI-JS的病原性,通过大剂量肌肉注射感染1日龄和10日龄SPF鸡,每隔五天扑杀五只,进行人工致病性试验。结果发现,试验鸡在感染病毒后,未出现任何明显临床症状,不影响早期增重,提示病毒无致病性。进一步研究,通过在不同时间段的排毒、带毒情况检测,证明病毒能够在试验鸡体内存在并少量排毒。组织病理学切片观察结果表明,部分脏器有轻微病变,大部分脏器基本没有病变。血液中病毒分离阴性,仅从肠中检测出一份组织样品带毒。证


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