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《扬州大学》 2005年
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减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒口服DNA疫苗的免疫效力研究

焦凤超  
【摘要】:近年来,以减毒鼠伤寒沙门氏菌作为载体靶向运送DNA疫苗至抗原提呈细胞,在小鼠和鸡模型中开展了大量的研究表明,能够激发机体产生细胞免疫应答、体液免疫应答和局部黏膜免疫应答。本试验在实验室原有的重组菌X4550(asd-pVAX1-HA)基础上,构建了以减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207为运送载体的重组菌SL7207(pVAX1-HA)、SL7207(pVAX1-NP)、SL7207(pVAX1-HA1)和SL7207(pVAX1-HA2),通过不同的组合就其安全性和免疫效力进行评价。 首先根据GenBank中已发表的A型流感NP全基因序列设计并合成了一对PCR引物,通过RT-PCR扩增了鹅源H5亚型AIV毒株A/Goose/Jiangsu/1/2000(H5N1)NP基因。以重组质粒asd-pVAX1-HA为模板,设计并合成了两对引物,通过PCR方法扩增出HA1和HA2分段基因。将上述三种PCR产物克隆入pGEM-T easy vector进行测序。序列分析结果表明,所克隆到的NP基因与部分已发表的A型流感病毒NP序列的同源性在85%-97.9%,具有型特异性;HA1和HA2基因与模板序列同源性为100%。用EcoRV和XhoI双酶切NP基因,插入pVAX1相应酶切位点,构建成pVAX1-NP;用HindⅢ和BamHI双酶切HA1和HA2基因,分别插入pVAX1的相应酶切位点构建成pVAX1-HA1和pVAX1-HA2。转染COS-7细胞后通过间接免疫荧光试验证实NP、HA1和HA2基因在该细胞中得到了表达,说明三种质粒可以用于DNA疫苗试验。最后通过电转化方法将三种质粒以及pVAX1-HA导入鼠伤寒沙门氏菌SL7207,分别命名为 SL7207(pVAX1-HA)、SL7207(pVAX1-NP)、SL7207(pVAX1-HA1)和SL7207(pVAX1-HA2),为进一步进行体内安全性和免疫效力试验奠定了基础。 携带质粒的重组菌在体外培养或入侵体内后,由于抗性选择压力的逐渐降低或消失,其携带质粒的比例也会随之降低,因此有必要对其体内外携带质粒的稳定性进行评价。结果表明,重组菌在体外培养9h后,携带质粒的比例开始明显下降(90%);SPF雏鸡口服接种10~(10)CFU重组菌后,肝、脾等处分离的携带质粒重
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S852.52

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 潘志明,焦新安,张小荣,张晓明,黄金林,万洪全,刘秀梵;运送鹅源新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌及其免疫原性[J];农业生物技术学报;2004年04期
2 于长青,邹全明,王缚鲲,鲁东水,曾浩;口服幽门螺杆菌疫苗后小鼠粘膜免疫应答研究[J];上海免疫学杂志;2001年04期
3 梁雪芽,方维焕,江玲丽;鸡新城疫口服DNA疫苗的安全性、稳定性与免疫效力[J];生物工程学报;2003年01期
4 李芳,张萍,许彦国,李燕,陆虹;白细胞介素-2对狂犬疫苗细胞免疫应答增强作用的研究[J];中国生化药物杂志;1998年06期
5 张小荣,焦新安,潘志明,张晓明,刘秀梵,黄金林 ,张如宽;以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性[J];微生物学报;2004年02期
6 乔传玲,于康震,姜永萍,张建林,邓国华,孟庆文,田国斌,唐秀英;表达禽流感病毒核蛋白基因重组禽痘病毒的构建及其免疫保护性研究[J];中国农业科学;2003年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陶静;叶红;;新城疫F蛋白基因工程疫苗的研究现状[J];安徽农业科学;2011年17期
2 刘丽平;薛晖;;禽流感疫苗研究进展[J];现代农业科技;2007年14期
3 杨煦;刘玉芬;刘怀然;;新城疫疫苗的研究进展[J];现代农业科技;2012年02期
4 焦凤超;焦新安;潘志明;黄金林;张小荣;刘秀梵;;减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的实验免疫效果研究[J];病毒学报;2006年01期
5 刘文博;张小荣;曹永忠;王海燕;吴艳涛;焦新安;刘秀梵;;表达禽流感病毒特异性siRNA分子减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建[J];病毒学报;2007年02期
6 王养会;李谱华;张淼涛;张彦明;;表达猪瘟病毒石门株E0基因重组鸡痘病毒的构建及动物免疫试验[J];病毒学报;2008年01期
7 徐之勇;仲崇岳;李军民;宝银梅;;禽流感疫苗的研究概况[J];家禽科学;2007年11期
8 徐文;;新城疫疫苗的最新研究进展[J];家禽科学;2008年06期
9 郭鹰,邹全明,朱永红,吴超,郭刚,毛旭虎,袁小澎;BALB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌热休克蛋白A疫苗的免疫应答[J];第三军医大学学报;2004年09期
10 贾伟新,曹伟胜,廖明,张桂红,辛朝安;禽用核酸疫苗的研究进展[J];动物医学进展;2004年03期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 潘志明;焦新安;黄金林;唐丽华;张晓明;张小荣;刘秀梵;;携带新城疫病毒DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
2 潘志明;焦新安;黄金林;殷月兰;唐丽华;张辉;张晓明;张小荣;刘秀梵;;携带新城疫病毒DNA疫苗的鼠伤寒沙门氏菌及其安全性与免疫效力[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
3 曾瑜虹;王红宁;李玉玲;阳泰;汪雪;张鹏举;;携带禽传染性支气管炎病毒N基因减毒沙门菌活载体疫苗的构建[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
2 于淼;山东鸡新城疫病毒分离鉴定与Ⅱ+Ⅶ基因型灭活疫苗研究[D];南京农业大学;2009年
3 马有智;猪链球菌溶血素基因的克隆及其原核和真核表达[D];浙江大学;2003年
4 李永清;禽流感病毒M2基因克隆、表达及其重组马立克氏病病毒的构建[D];中国农业大学;2004年
5 程相朝;新城疫病毒地方株分子流行病学调查及其疫病控制[D];南京农业大学;2003年
6 潘志明;重组减毒细菌运送CD8~+T细胞表位的机理及携带新城疫病毒DNA 疫苗鼠伤寒沙门氏菌的免疫生物学特性研究[D];扬州大学;2004年
7 杜爱芳;鸡球虫病的中药防治与DNA疫苗研究[D];浙江大学;2004年
8 胡思顺;禽流感病毒H9N2亚型和鸡毒霉形体HS株主要抗原性基因的克隆与表达研究[D];华中农业大学;2005年
9 秦卓明;新城疫病毒流行株致病性和抗原性及其与F和HN基因变异的相关性[D];山东农业大学;2006年
10 黄兵;表达禽流感病毒H5血凝素禽腺病毒重组体的构建及其特性研究[D];南京农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 董辉;鸡新城疫HI抗体水平及带毒状况调查[D];山东农业大学;2010年
2 张厚锋;种鸡非典型新城疫的诊断及病后不同时期种蛋品质及带毒情况检测分析[D];山东农业大学;2010年
3 林彬彬;禽流感病毒H9亚型福建分离株的全基因组测定及遗传演化分析[D];福建农林大学;2011年
4 叶玉秀;生长抑素原核真核双表达质粒的构建与鉴定及作用机理研究[D];华中农业大学;2011年
5 卢艳;疫苗接种对我国新城疫病毒进化的影响及新城疫LaSota疫苗株全长cDNA克隆[D];山东师范大学;2012年
6 韩剑峰;经口感染弓形虫诱导的小鼠肠道黏膜免疫应答中IgA抗体含量与T细胞亚群的变化[D];山西医科大学;2003年
7 郭闯;水禽禽流感H5N1亚型超微病理研究及其基质蛋白单克隆抗体的制备与初步应用[D];扬州大学;2004年
8 陈光明;NDV HN基因核酸疫苗的制备及其免疫效果的观察[D];安徽农业大学;2004年
9 沈嬿琼;致敏IEL过继转移诱导的小鼠肠道粘膜免疫应答及抗弓形虫感染作用[D];山西医科大学;2004年
10 刘丽平;减毒沙门氏菌运送的H9亚型禽流感病毒DNA疫苗及其免疫效力[D];扬州大学;2005年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 倪振亚,焦新安,吴艳涛,潘志明,刘文博,文其乙,张如宽,刘秀梵;表达新城疫病毒融合蛋白F基因的重组减毒沙门氏菌的构建和鉴定[J];江苏农业研究;1999年03期
2 吴艳涛,陈丽君,刘秀梵,张如宽;新城疫病毒F_(48)E_8株cDNA文库的构建[J];江苏农学院学报;1996年04期
3 方维焕,梁雪芽;减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达新城疫病毒融合蛋白[J];生物化学与生物物理学报;2002年04期
4 倪振亚,焦新安,高崧,张如宽,刘秀梵;大肠杆菌SLT-IIvB基因的克隆和表达[J];微生物学报;2000年06期
5 邵红霞,秦爱建,钱琨,刘岳龙,金文杰;抗禽流感病毒H_5亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制[J];中国动物检疫;2002年08期
6 唐秀英,田国斌,赵传删,周金法,于康震;中国禽流感流行株的分离鉴定[J];中国畜禽传染病;1998年01期
7 邓国华,马文军,于康震;禽流感病毒核蛋白基因在重组杆状病毒中的表达[J];中国预防兽医学报;1999年02期
8 王新江,李燕,谷淑燕;特异性细胞毒性T细胞检测方法的建立及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用[J];中华实验和临床病毒学杂志;1994年04期
9 叶萍,李燕,谷淑燕;MTS和MTT法检测小鼠NK及特异性细胞毒性T细胞活性的比较[J];中华实验和临床病毒学杂志;1998年01期
10 黄建文,刘桂枝,刘代仁,宋孚维,张黎明,焦宇明;狂犬病疫苗的血清学效果观察[J];中华预防医学杂志;1995年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈化兰,于康震,田国斌,唐秀英,卢景良;禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性[J];中国兽医学报;1997年06期
2 张小荣,焦新安,潘志明,张晓明,刘秀梵,黄金林 ,张如宽;以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性[J];微生物学报;2004年02期
3 姜永萍;张洪波;李呈军;步志高;邓国华;于康震;陈化兰;;HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果比较[J];农业生物技术学报;2006年03期
4 潘志明;唐丽华;程宁宁;黄金林;胡青海;焦新安;刘秀梵;;携带禽流感病毒DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门菌的免疫效力[J];中国兽医科学;2007年02期
5 潘志明,焦新安,张小荣,张晓明,黄金林,万洪全,刘秀梵;运送鹅源新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌及其免疫原性[J];农业生物技术学报;2004年04期
6 唐丽华;潘志明;程宁宁;焦新安;张晓明;黄金林;;稳定携带H5亚型禽流感病毒候选DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性[J];微生物学报;2007年04期
7 孙金福;禽流感病毒与疫苗研究[J];黑龙江畜牧兽医;2004年02期
8 石军,陈安国,洪奇华;DNA疫苗在禽病防治中的应用研究进展[J];畜禽业;2002年10期
9 陈伟;杨恒;;减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的研究进展[J];生物技术通报;2010年04期
10 刘文,李明峰,胡巍;新型免疫疫苗——DNA疫苗[J];淄博学院学报(自然科学与工程版);2000年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 唐丽华;潘志明;程宁宁;张晓明;黄金林;胡青海;焦新安;;运送禽流感病毒DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌的实验室免疫效力研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
2 彭金美;童光志;王云峰;仇华吉;;抗禽流感病毒多表位DNA疫苗的构建及其免疫效力研究[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
3 姜永萍;张洪波;张平静;王全英;于康震;田国斌;陈化兰;;H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
4 潘志明;焦新安;黄金林;唐丽华;张晓明;张小荣;刘秀梵;;携带新城疫病毒DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
5 张洪军;;禽流感后养禽业如何走出低谷[A];“科技进步推进畜牧业现代化”科技论文集[C];2011年
6 单芬;郑煦灿;韦良孟;徐成刚;罗开健;任涛;辛朝安;焦培荣;廖明;;一株H5N2亚型鹦鹉源禽流感病毒分子进化分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
7 李艳华;佟恒敏;于康震;;抗禽流感病毒中草药的研究[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年
8 潘志明;焦新安;黄金林;唐丽华;张辉;张成全;刘秀梵;;携带新城疫病毒DNA疫苗鼠伤寒沙门氏菌的安全性和免疫效力试验[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
9 杜爱芳;王素华;胡松华;;鸡柔嫩艾美耳球虫DNA疫苗的免疫原性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
10 高雪丽;;抗禽流感病毒免疫的研究进展[A];2008年中国病理生理学会第十一届肿瘤和第十二届免疫专业委员会学术会议论文集[C];2008年
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1 本报记者 王均珠;贵阳制定三项措施防范“人禽流感”[N];贵阳日报;2005年
2 新华社记者  卢苏燕;人类如何赢得与禽流感的赛跑[N];光明日报;2006年
3 颜亮;新年禽流感在全球卷土重来[N];经济参考报;2007年
4 本报记者 叶芳 通讯员 邹钦;多休息勤洗手 远离禽流感[N];广东科技报;2008年
5 黄显斌;对付禽流感:三十六计“走”为上[N];大众科技报;2005年
6 朱玉;禽流感还要“飞”多远?[N];科技日报;2005年
7 见习记者 杨茜;我市防控禽流感进入[N];嘉兴日报;2005年
8 张孟军;禽流感病毒H5N1正在突变[N];科技日报;2004年
9 李学梅;此次流感病毒并未发生大变异[N];北京日报;2007年
10 肖玮;首款抗禽流感中药面临难产[N];北京商报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 万家余;甲、乙型肝炎口服二价DNA疫苗的研究[D];吉林大学;2005年
2 孟庆玲;减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的斯氏艾美耳球虫DNA疫苗研究[D];甘肃农业大学;2008年
3 张洪英;口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性和安全性研究[D];第二军医大学;2003年
4 张静;轮状病毒分子流行病学调查及脂质体DNA疫苗研究[D];重庆医科大学;2002年
5 王涛;嗜肺军团菌mip基因DNA疫苗初步研究[D];四川大学;2004年
6 宋立强;异种同源钙激活Cl~-通道DNA疫苗对小鼠哮喘模型的防治作用[D];第四军医大学;2004年
7 时阳;MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗的构建及体内外功能验证[D];吉林大学;2004年
8 郭瀛军;猪带绦虫囊虫病DNA疫苗的中试及免疫效力研究[D];第二军医大学;2004年
9 张梦寒;汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段核酸疫苗pEGFP-M-S的构建及基因免疫研究[D];苏州大学;2005年
10 焦解歌;猪Endoglin DNA疫苗诱导抗肿瘤血管生成机理研究[D];中南大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 焦凤超;减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒口服DNA疫苗的免疫效力研究[D];扬州大学;2005年
2 张小荣;以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗及其免疫生物学特性[D];扬州大学;2003年
3 张强哲;H5亚型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究[D];西北农林科技大学;2003年
4 刘丽平;减毒沙门氏菌运送的H9亚型禽流感病毒DNA疫苗及其免疫效力[D];扬州大学;2005年
5 蒋文明;以减毒沙门氏菌为载体传递猪繁殖与呼吸综合征病毒DNA疫苗的口服免疫应答[D];南京农业大学;2004年
6 周丽丽;布鲁氏菌BLS-L7/L12重组亚单位疫苗的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
7 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
8 赵会连;不同处理和不同保存时间对重组(H5N1亚型,Re-5株)禽流感病毒效力的影响[D];河南农业大学;2010年
9 刘红彦;H9N2 AIV的NS1基因原核与真核表达及NS1蛋白对几种细胞凋亡的影响[D];西北农林科技大学;2010年
10 孙宇;禽流感病毒血凝素的分离纯化以及快速评估其宿主特异性方法的研究[D];西北大学;2010年
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