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《扬州大学》 2005年
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人乳头瘤病毒16E6/7转基因小鼠模型的建立及HPV16DNA疫苗的研究

高慧  
【摘要】:人乳头瘤病毒(HPV)是一组具有组织特异的双链DNA肿瘤病毒,能引起上皮和粘膜组织增生,主要通过直接或间接接触污染人的皮肤、粘膜组织,其中尖锐湿疣是HPV感染引起的常见性传播性疾病,感染率高、传染性强。目前研究认为,高危型HPV感染是宫颈癌发生发展的必要因素,特别HPV16在富颈癌组织中检出率最高,可达50%。HPV感染性疾病、宫颈癌在现今条件下仍无特效的预防和治疗方法,加之体外很难获得大量HPV病毒粒子,也无HPV自然感染的动物模型可以利用,限制了对HPV的深入研究及其防治性疫苗的研制开发。 为了建立HPV致病性和疫苗评价研究的动物模型,建立适合国内推广的防治HPV感染的疫苗株,我们从国人宫颈癌组织中提取DNA,分离HPV16E6E7、L1基因,建立E6E7转基因小鼠模型和L1抗原表达移植瘤模型,构建真核表达重组质粒pcDNA-L1、pcDNA-E7,免疫小鼠测定其免疫效力。观从以下四个方面概述: 一、HPV16型E6/7、L1基因的克隆和序列分析 从感染HPV16型的宫颈癌组织中提取组织DNA,根据已发表的HPV16标准株DNA全序列设计跨HPV16 E6/7、L1整个阅读框,包含起始密码子和终止密码子的两对特异性引物,以提取的DNA为模板,PCR法扩增HPV16E6/7、L1基因,并以pGgM-Teasy为克隆载体,按常规方法构建重组质粒pGEM-T-E6/7、pGEM-T-L1,经蓝白斑筛选和限制性核酸内切酶及核苷酸序列分析。结果显示我们分离、克隆的HPV16分离株E6/7、L1基因与已报道的标准株(德国)序列存在高度同源性。其中E6基因在核苷酸、氨基酸序列上都与标准株完全一致:E7基因与标准株仅在核苷酸序列上有一处突变,即199位的T→C,密码子由TTG变为CTG,而氨基酸序列未发生改变;L1基因与标准株在核苷酸序列上有7处不同,其中4处由于核苷酸的改变,其编码氨基酸也相应发生变化,即标准株序列6,240处的C→G,核苷酸三联密码TCA变为TGA,编码氨基酸由组氨酸(H)变为天门冬氨酸(D):6,432
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R392

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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