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《扬州大学》 2005年
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外源基因插入不同复制非必需区影响重组鸡痘病毒抵抗母源抗体干扰的能力

孙蕾  
【摘要】:重组鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)活载体疫苗的研究在近十几年来取得了很大进展,已有多种病原的保护性抗原在FPV中得以成功表达。但迄今为止,国内外重组FPV疫苗仍未在市场上得到大规模的推广应用,其主要原因是受到商品鸡所携带的母源抗体的干扰。因此,克服母源抗体干扰是重组FPV疫苗研究领域亟待解决的一个难题。本研究从筛选更合适的FPV复制非必需区作为外源基因插入位点的角度来探索解决这一问题的方法。我们首先采用定向克隆法筛选并鉴定了FPV的4个新复制非必需区,然后分别以这4个非必需区为外源基因插入位点构建载体以获得表达外源基因的重组病毒,并对重组病毒在SPF鸡和带有不同水平母源抗体的商品鸡上的免疫效力进行了比较,以期得到能够较好地抵抗母源抗体干扰的重组FPV。 1.定向克隆法筛选鸡痘病毒的复制非必需区 根据已发表的美国致病株FPV的基因组全序列设计8对引物,用PCR方法分别扩增4个假定复制非必需区各自的两个侧翼区。利用分子克隆技术将假定复制非必需区的侧翼区、标记基因表达框P11-LacZ先后克隆入载体pBluescript SK(-),所得4个载体(pP12L、pP34L、pP56L、pP78L)与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经数轮蓝斑筛选得到纯化的重组病毒,表明这4个区域(FPV1-2、FPV3-4、FPV5-6、FPV7-8)均为FPV的复制非必需区。重组FPV在CEF上连续传10代,经蓝斑检测和PCR检测,表明所得复制非必需区均具有良好的稳定性。 2.表达新城疫病毒F或HN基因的系列重组鸡痘病毒的构建 对FPV表达载体p11S进行优化,将通过PCR方法获得的多克隆位点(MCS)插入载体p11S中启动子Ps的下游,得到更便于外源基因插入的载体pY11S。将外源基因的启动子Ps分别插入载体pP12L、pP34L、pP56L和pP78L,获得4个FPV表达载体p12LS、p34LS、p56LS和p78LS。用RT-PCR方法获得ZJ1株新城疫病毒(NDV)的F和HN基因。将F基因分别插入pN11S及上述4个表达载体,获得表达NDV F基因的5个重组FPV转移载体pY11SF、p12LSF、p34LSF、p56LSF
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S852.65

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【引证文献】
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2 甘军纪;陶鸽;张胜文;吴永启;彭大新;刘秀梵;;鸡新城疫重组鸡痘病毒活疫苗的免疫持续期和加强免疫研究[J];中国兽医学报;2011年12期
3 甘军纪;彭大新;刘秀梵;;重组禽痘病毒活疫苗研究进展[J];畜牧与兽医;2012年10期
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【参考文献】
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【共引文献】
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10 韦平,韦天超,杨宗维,李莉萍,王林果,韦正吉,韦信贤,李康然,刘禄;禽Ⅰ型副粘病毒各种禽源分离株毒力及其相关基因的研究[J];病毒学报;2005年01期
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2 陈立功;万洪全;郝延刚;王宝安;李三星;袁万哲;;不同基因型新城疫病毒强毒株对鸡的致病性[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
3 刘雅婷;李正跃;郑元仙;徐小刚;李永忠;;Tospovirus属病毒的ssRNA-S链的比对分析[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
4 吴艳涛;彭大新;刘秀梵;刘伟忠;张如宽;;表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
5 陈立功;万洪全;吴力力;王宝安;;不同基因型新城疫病毒强毒株对鹅的致病性[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
6 刘武杰;孙蕾;陈素娟;徐忠林;刘金彪;刘秀梵;;表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
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8 宋翠萍;陈晓兰;丁铲;;新城疫病毒致病力演变研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
9 秦卓明;徐怀英;王友令;欧阳文军;袁小远;张玉霞;黄兵;金维江;;新城疫病毒抗原性及其核心基因分子变异相关性的研究进展[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
10 徐怀英;秦卓明;王友令;欧阳文军;袁小远;;中国水禽新城疫病毒F和HN基因的变异趋势[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
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2 周才祥;鄂州市沼山蛋鸡养殖小区新城疫病的调查和防控[D];华中农业大学;2010年
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9 刘霞;鸭源新城疫油乳剂灭活疫苗制备的研究[D];山东农业大学;2011年
10 朱雯迎;H9N2亚型禽流感山东分离株的抗原变异及其对小白鼠致病性研究[D];山东农业大学;2011年
【同被引文献】
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4 刘文军,杨芙蓉,阮力,任贵方,朱既明;三种病毒启动子在中国地鼠卵巢(CHO)细胞中表达活性的比较[J];病毒学报;1997年02期
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8 颜晔,夏彩虹,曹新民,景乃禾;过量表达Stat3诱导COS7细胞显著的形态变化[J];生物化学与生物物理学报;2003年08期
9 吴艳涛,彭大新,刘秀梵,刘伟忠,张如宽;表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[J];生物工程学报;2000年05期
10 邵卫星,彭大新,卢建红,韦栋平,刘玉良,刘秀梵;表达鸡白细胞介素2重组鸡痘病毒的构建及其体外表达产物生物活性的检测[J];生物工程学报;2004年01期
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1 吴艳涛;新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2000年
2 彭大新;表达鸡马立克氏病病毒糖蛋白B基因及共表达糖蛋白B和鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护作用[D];扬州大学;2001年
3 陈素娟;用不同鸡痘病毒载体构建单表达或双表达抗H5和H9亚型禽流感的重组疫苗及其免疫效力[D];扬州大学;2005年
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1 丁炜东;表达新城疫病毒F、HN基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性和免疫效力试验[D];扬州大学;2003年
2 陈平;高效表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒的构建及免疫效力试验[D];扬州大学;2003年
3 徐忠林;共表达NDV F 基因与H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[D];扬州大学;2005年
4 徐利军;共表达AIV HA(H5)和NDV HN或NDV F和HN的两种重组鸡痘病毒的构建与免疫效力[D];扬州大学;2008年
【二级引证文献】
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2 甘军纪;刘武杰;彭大新;吴艳涛;刘秀梵;;表达NDVHN基因的重组鸡痘病毒的部分生物学特性研究[J];畜牧与兽医;2011年06期
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1 甘军纪;表达鸡新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的临床前研究[D];扬州大学;2010年
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1 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
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4 曲鲁江;新城疫病毒单克隆抗体的建立及其遗传变异分析研究[D];新疆农业大学;2001年
5 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
6 孙委委;两株新城疫病毒分离株全基因组序列的测定及在CEF和鸡胚传代的含量变化分析[D];中国农业科学院;2010年
7 许凌峰;新城疫病毒F基因和传染性法氏囊病毒VP0基因在重组鸡痘病毒中的共同表达及其免疫原性[D];中国人民解放军军需大学;2002年
8 梅双双;新城疫病毒野毒株的分离鉴定及其融合蛋白部分序列同源性分析[D];河北农业大学;2002年
9 王海燕;新城疫病毒F_48E_9株接种鸡胚的病理学观察及其P蛋白基因的克隆与表达[D];内蒙古农业大学;2001年
10 米志强;新城疫病毒昌黎株F基因的序列分析、表达及重组病毒免疫原性的研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
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