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《扬州大学》 2005年
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鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达及其重组马立克氏病毒的构建

刘红梅  
【摘要】:鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病。该病主要侵害3~12周龄的雏鸡与青年鸡,破坏法氏囊中的B淋巴细胞,导致不同程度的免疫抑制,从而使病鸡增加对并发和继发性病毒和细菌感染的易感性。近年来,由于IBDV超强毒株和变异株的流行,导致病毒致病力的改变及宿主对疫苗应答的改变,使得传统的疫苗已不能控制其流行,因此,发展更为有效、安全的新型疫苗已成为迫切需要。以MDV疫苗作载体构建活病毒载体疫苗是近年来禽病毒基因工程研究中比较活跃的领域。多年的生产实践证实了MDV CV1988疫苗的安全性、有效性。因此,本研究选用CVI988疫苗作载体,插入IBDV VP2保护性抗原基因,筛选重组病毒,并对其免疫特性进行了研究。 1 IBDV JS株VP2基因真核表达载体的构建及其免疫特性 应用RT-PCR方法从IBDV JS株中扩增出VP2基因,并克隆入pGEM-T easy载体。序列测定分析结果表明,IBDV JS株的VP2基因与国际标准强毒株编码的氨基酸序列具有极高的同源性(96.2-99.2%)。系统进化树分析表明,JS株和香港HK46、日本OKYM、英国UK661等毒株的关系最近。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo(+),构建成功真核表达质粒pcDNA3.1-VP2,用pcDNA3.1-VP2体外转染COS-1细胞,结果证明VP2基因能在COS-1细胞中表达。利用pcDNA3.1-VP2质粒进行基因免疫,结果发现雏鸡二免后14天可在体内检测到特异性抗VP2抗体,对100LD_(50)的IBDV JS超强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有良好的免疫原性,可以作为研制IBDV基因工程疫苗的目的基因。 2 MDV CVI988转移载体的构建 根据Ⅰ型MDV强毒GA株基因序列,设计三对引物,用PCR方法扩增出CVI988/Rispens株的TK区、US10区及其侧翼序列,分别克隆入pGEM-T easy载体中,测序表明所克隆的基因片段与Ⅰ型MDV强毒GA株基因序列完全一致。然
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S852.65

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