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《扬州大学》 2005年
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鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达及其重组马立克氏病毒的构建

刘红梅  
【摘要】:鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病。该病主要侵害3~12周龄的雏鸡与青年鸡,破坏法氏囊中的B淋巴细胞,导致不同程度的免疫抑制,从而使病鸡增加对并发和继发性病毒和细菌感染的易感性。近年来,由于IBDV超强毒株和变异株的流行,导致病毒致病力的改变及宿主对疫苗应答的改变,使得传统的疫苗已不能控制其流行,因此,发展更为有效、安全的新型疫苗已成为迫切需要。以MDV疫苗作载体构建活病毒载体疫苗是近年来禽病毒基因工程研究中比较活跃的领域。多年的生产实践证实了MDV CV1988疫苗的安全性、有效性。因此,本研究选用CVI988疫苗作载体,插入IBDV VP2保护性抗原基因,筛选重组病毒,并对其免疫特性进行了研究。 1 IBDV JS株VP2基因真核表达载体的构建及其免疫特性 应用RT-PCR方法从IBDV JS株中扩增出VP2基因,并克隆入pGEM-T easy载体。序列测定分析结果表明,IBDV JS株的VP2基因与国际标准强毒株编码的氨基酸序列具有极高的同源性(96.2-99.2%)。系统进化树分析表明,JS株和香港HK46、日本OKYM、英国UK661等毒株的关系最近。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo(+),构建成功真核表达质粒pcDNA3.1-VP2,用pcDNA3.1-VP2体外转染COS-1细胞,结果证明VP2基因能在COS-1细胞中表达。利用pcDNA3.1-VP2质粒进行基因免疫,结果发现雏鸡二免后14天可在体内检测到特异性抗VP2抗体,对100LD_(50)的IBDV JS超强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有良好的免疫原性,可以作为研制IBDV基因工程疫苗的目的基因。 2 MDV CVI988转移载体的构建 根据Ⅰ型MDV强毒GA株基因序列,设计三对引物,用PCR方法扩增出CVI988/Rispens株的TK区、US10区及其侧翼序列,分别克隆入pGEM-T easy载体中,测序表明所克隆的基因片段与Ⅰ型MDV强毒GA株基因序列完全一致。然
【关键词】:重组马立克氏病毒 传染性法氏囊病毒 CVI988/Rispens VP2蛋白 转移载体 免疫特性
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S852.65
【DOI】:CNKI:CDMD:1.2005.086243
【目录】:
  • 中文摘要5-7
  • 英文摘要7-10
  • 符号说明10-11
  • 综述一 马立克氏病毒表达载体的研究进展11-25
  • 一、马立克氏病毒的分子生物学特性11-12
  • 二、马立克氏病毒表达载体的优越性12-13
  • 三、重组马立克氏病毒构建的一般方法13-19
  • 四、重组马立克氏病毒疫苗的保护作用19-21
  • 五、重组马立克氏病毒疫苗的应用前景及其存在的问题21-25
  • 综述二 鸡传染性法氏囊病新型疫苗研究现状及发展趋势25-39
  • 一、研究现状26-32
  • 二、发展趋势32-39
  • 第一章 传染性法氏囊病病毒JS株VP2基因真核表达载体的构建及其免疫特性39-55
  • 1 材料40-41
  • 2 方法41-45
  • 3 结果45-51
  • 4 讨论51-53
  • 5 参考文献53-55
  • 第二章 马立克氏病毒CVI988转移载体的构建55-71
  • 1 材料56
  • 2 方法56-60
  • 3 结果60-66
  • 4 讨论66-68
  • 5 参考文献68-71
  • 第三章 表达IBDV VP2融合蛋白的重组MDV的构建及其免疫特性71-87
  • 1 材料72
  • 2 方法72-76
  • 3 结果76-83
  • 4 讨论83-85
  • 5 参考文献85-87
  • 第四章 表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组MDV的构建87-97
  • 1 材料88
  • 2 方法88-90
  • 3 结果90-93
  • 4 讨论93-94
  • 5 参考文献94-97
  • 攻读博士学位期间发表的学术论文97-98
  • 致谢98
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴小兵,董小岩,伍志坚,颜子颖,侯云德;以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1-lacZ的研究[J];病毒学报;1998年04期
2 崔治中,Le.LF;表达强毒pp38决定簇的马立克病病毒疫苗毒CVI988点突变株的构建和特性[J];病毒学报;1999年02期
3 乔传玲,袁远,于康震;应用禽痘病毒表达载体研制重组疫苗的研究进展[J];动物医学进展;2002年01期
4 张超范,曾祥伟,魏萍;鸡传染性法氏囊病的防制及疫苗研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2003年08期
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10 刘爵,刘有昌,曹永长,周蛟,毕英佐;鸡传染性法氏囊病病毒变异的分子生物学研究进展[J];中国兽医学报;2000年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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3 曹晖,吴小兵,伍志坚,侯云德;一种可切除包装信号的重组1型单纯疱疹病毒的产生[J];病毒学报;2000年04期
4 程坚,刘秀梵,彭大新,刘红旗,吴艳涛,张如宽;共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[J];病毒学报;2003年01期
5 马鑫,袁振华,张辉,王宏,吴小兵;一种携带人α1bIFN的单纯疱疹病毒载体的构建[J];病毒学报;2003年03期
6 崔治中;马立克氏病病毒38kD磷蛋白表达产物的细胞质亲和性[J];病毒学报;2004年01期
7 张国中;宋宇;陈月莲;汪明;赵继勋;;禽副粘病毒2型(APMV-2)血凝素单克隆抗体的制备与初步应用[J];病毒学报;2008年02期
8 李家瑞 ,陈旭春;朊病毒与牛海绵状脑病[J];承德民族职业技术学院学报;2001年04期
9 章松柏;吴祖建;段永平;谢联辉;林奇英;;一种实用的双链RNA病毒基因组克隆方法[J];长江大学学报(自科版)农学卷;2005年01期
10 刘惠莉 ,陆承平;冠状病毒基因组及其编码蛋白[J];动物医学进展;2004年02期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
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2 何庆兰;;新城疫病毒的P基因[A];中国家禽业——机遇与挑战——第十三次全国家禽学术讨论会论文集[C];2007年
3 刘雅婷;李正跃;郑元仙;徐小刚;李永忠;;Tospovirus属病毒的ssRNA-S链的比对分析[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
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1 于莉娜;Tiam1转基因小鼠的建立及其功能研究[D];南方医科大学;2009年
2 袁伟;腺病毒介导的A20基因对耳蜗毛细胞保护作用的实验研究[D];第三军医大学;2008年
3 杨明凡;表达鸡传染性喉气管炎病毒gD基因与鸡IL-2基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力研究[D];南京农业大学;2008年
4 门静涛;日本血吸虫复合表位基因疫苗免疫研究[D];吉林大学;2009年
5 常灵竹;猪血凝性脑脊髓炎诊断方法及其免疫病理学研究[D];吉林大学;2009年
6 李凤新;虎杖提取物抗病毒物质基础、药理作用及代谢研究[D];吉林大学;2009年
7 张晓东;新城疫病毒La Sota克隆株的筛选与全长cDNA克隆的构建[D];中国农业科学院;2009年
8 梁冬莹;ADV分离株全基因序列测定及VP2抗原表位区的表达与应用[D];东北林业大学;2007年
9 刘珠果;表达SARS冠状病毒受体hACE2的SARS易感小鼠模型的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
10 陆慧君;猪血凝性脑脊髓炎病毒的分离鉴定及其受体的筛选[D];吉林大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭强;中药复方制剂抗禽流感病毒的试验研究[D];东北农业大学;2009年
2 李丹;共表达GPMV F基因和GPV VP3基因重组禽痘病毒生物学特性研究[D];东北农业大学;2009年
3 黄志永;鸡传染性法氏囊病毒广西流行代表毒株免疫原性的研究[D];广西大学;2008年
4 周艳;小鼠肝炎病毒N基因的表达与间接ELISA检测方法的建立和应用[D];扬州大学;2008年
5 冷雪梅;呼肠孤病毒3型S1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[D];扬州大学;2008年
6 刘明亮;鸡马立克氏病病毒超强毒株RB1B pp38基因的真核表达及其特异性单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2008年
7 孙凤萍;不同品系小鼠感染小鼠肝炎病毒后IgG、IgM抗体变化及肝脏病毒检测[D];南京农业大学;2007年
8 招丽婵;鸭瘟强毒dUTPase基因的原核表达及在病毒感染宿主亚细胞定位研究[D];四川农业大学;2008年
9 邵二波;鸡痘病毒地方分离株的鉴定及致病性研究[D];山东农业大学;2008年
10 苏洁;猫泛白细胞减少症病毒XJ株的分离及生物学特性研究[D];东北农业大学;2008年
【同被引文献】
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1 李慧姣;我国新城疫病毒分离株生物学特性的研究[J];病毒学报;1985年04期
2 王志玉;任桂杰;温红玲;宋艳艳;王桂亭;姚苹;许洪芝;张文强;;新城疫病毒F蛋白细胞融合活性位点中保守氨基酸基因突变分析[J];病毒学报;2006年01期
3 吴小兵,董小岩,伍志坚,颜子颖,侯云德;以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1-lacZ的研究[J];病毒学报;1998年04期
4 崔治中,Le.LF;表达强毒pp38决定簇的马立克病病毒疫苗毒CVI988点突变株的构建和特性[J];病毒学报;1999年02期
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中国重要会议论文全文数据库 前3条
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中国博士学位论文全文数据库 前6条
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5 魏荣;两种重组火鸡疱疹病毒rHVT-gB1/EGFP和rHVT-EGFP的构建[D];南京农业大学;2001年
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2 胡顺林;基因Ⅶ型新城疫病毒单克隆抗体的研制、鉴定与初步应用[D];扬州大学;2004年
3 张丹;鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因在转基因烟草中的表达[D];中国农业大学;2003年
4 胡北侠;新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2001年
【二级参考文献】
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7 樊万朝 吴国华;国内首批转基因鸡在扬州诞生[N];中国高新技术产业导报;2002年
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10 本报记者 张春生;专家呼吁尽快恢复地震保险[N];中国保险报;2004年
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