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《扬州大学》 2007年
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新城疫病毒融合蛋白高效表达及其特异性单克隆抗体的研制和初步应用

崔平福  
【摘要】: 用RT-PCR方法从新城疫病毒(NDV)标准强毒株F48E8扩增出融合蛋白(F)基因,并将其克隆到pGEM-T载体,命名为pGEM-NDF。经测序正确后,以BamHI和XbaI双酶切将F基因从pGEM-NDF中切下并插入到杆状病毒转移载体pFast Bac1中,得到重组转移载体pFastBac1-NDF;将该载体转座含有杆状病毒穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,筛选出重组穿梭质粒rBacmid-NDF,并转染Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒reBac-NDF;间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western-blot)结果表明,新城疫病毒F48E8株F蛋白在昆虫细胞中获得高效表达。 以重组杆状病毒reBac-NDF感染昆虫细胞72-96hr,收获细胞,腹腔免疫BalB/c小鼠。取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,用感染了NDV F48E8株的CEF进行IFA检测杂交瘤细胞上清,筛选出5株分泌抗NDV F蛋白的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为NDV-F1D10、NDV-F2F12、NDV-F4D9、NDV-F6C4、NDV-F5C6;经过亚克隆后,所有杂交瘤细胞均保持了分泌抗体的能力;效价测定结果表明,单抗腹水IFA效价分别为1:1600、1:1600、1:1600、1:3200、1:800; IFA显示五株单克隆抗体能与野鸭源NDV和Lasota株感染的CEF反应,均不与MDV、REV、IBDV感染的CEF反应,证明所得的五株单抗是针对NDV F蛋白的特异性单抗,抗NDV F蛋白单抗的获得为NDV F蛋白的相关研究提供了良好的材料。 用五株抗NDV F蛋白的单抗检测两种重组MDV CVI988转移载体质粒pucUS10-NDF和pucUS10-eGFP-IRES-F转染COS-1细胞,结果5株单抗中有两株单抗NDV-F1D10和NDV-F2F12 IFA在IFA中呈现亮绿色荧光,表明单抗NDV-F1D10和NDV-F2F12能识别COS-1上暂态表达的F蛋白,可以用于表达F蛋白基因工程苗的检测。
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S852.65

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 蔡丽娅;临床新城疫病毒分离鉴定及F蛋白单克隆抗体的研制与应用[D];扬州大学;2009年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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3 刘华雷;陈云霞;管峰;郑东霞;赵云玲;王志亮;;Class I新城疫病毒反向遗传操作系统建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 刘梅;程旭;沈欣悦;周生;韦玉勇;徐玲霞;刘加圣;戴亚斌;;鸭源新城疫病毒JSD0812株对鸭的致病性研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
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6 陈宗艳;朱英奇;李传峰;李露;付玉志;王超;刘光清;;新发鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
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9 赵东升;盖新娜;孙栋;郭鑫;杨汉春;;猪脑心肌炎灭活疫苗的制备及小鼠免疫研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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8 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
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10 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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7 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
8 史平玲;猪FcγRⅢ介导PRRSV抗体依赖增强作用研究[D];郑州大学;2010年
9 吴焕荣;鸭副粘病毒的致病性研究[D];山东农业大学;2010年
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李慧姣;我国新城疫病毒分离株生物学特性的研究[J];病毒学报;1985年04期
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中国重要会议论文全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 万洪全;鹅源新城疫病毒部分生物学特性鉴定及其囊膜糖蛋白基因序列分析[D];扬州大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 胡北侠;新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制[D];扬州大学;2001年
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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1 魏荣;两种重组火鸡疱疹病毒rHVT-gB1/EGFP和rHVT-EGFP的构建[D];南京农业大学;2001年
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5 智海东;王云峰;王玫;仇华吉;童光志;;表达新城疫病毒F_(48)E_9株融合蛋白重组鸡痘病毒的构建[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
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4 吴红梅;我省首批融合蛋白试剂出口美国[N];新华日报;2010年
5 本报记者 王耀翠;单抗药物增长强劲 中国企业奋起直追[N];中国高新技术产业导报;2011年
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7 柏亚铎;犬瘟热病毒、犬冠状病毒入侵宿主细胞机制研究[D];中国农业大学;2005年
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9 周洁;鸡新城疫病毒单克隆抗体的制备与鉴定[D];河南农业大学;2009年
10 范娅涵;EPO调节人CD34~+造血干细胞CD26的表达及CD26单克隆抗体的制备和鉴定[D];第三军医大学;2009年
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