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检测SMD残留的免疫传感器的研制

陈彦涌  
【摘要】: 磺胺类药物是兽医临床上使用最广的一类化学合成抗菌药,主要用于细菌感染性疾病和某些原虫病的预防和治疗。但使用不合理很容易造成组织中的残留和蓄积。许多国家和组织规定了其最高残留限量(MRLs)为0.1μg/g ,甚至不得检出。高效液相色谱、气-质联用等是磺胺类药物残留检测的法定方法,但成本较高,方法繁琐,不适于大量样本的测定。 本课题旨在研制用于检测磺胺类药物SMD的免疫传感器,主要工作包括:葡萄糖氧化酶标记SMD的反应、标记前后葡萄糖氧化酶(GOD)活力的检测、GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体的特异结合与检测、GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体特异结合后的活性测定、单克隆抗体在尼龙膜上的固定、信号传感器的装配等。 葡萄糖氧化酶标记SMD反应:本研究采用EDC为催化剂,合成GOD-SMD,通过质谱检测,标记后的葡萄糖氧化酶的分子量明显增加,可以确定SMD与GOD偶联成功;通过分子量计算可知,平均每个葡萄糖氧化酶上连接6个SMD。并且通过傅立叶变换红外吸收光谱、紫外吸收光谱和圆二色光谱检测,发现GOD-SMD与GOD在空间结构上有所差异。 标记后葡萄糖氧化酶(GOD-SMD)活力的测定:用改良Amano法测定了偶联在SMD上的GOD活性,发现其活性很高。 GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体的特异结合与检测,由于合成单克隆抗体时所用的的抗原载体蛋白质是牛血清白蛋白,只有半抗原与GOD-SMD相同。有报道认为,载体蛋白的不同会影响到抗原抗体的特异性结合。本实验通过CD,UV光谱扫描方法证实了GOD-SMD与抗BSA-SMD单克隆抗体的特异性结合,即两者发生了免疫反应。GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体能够发生反应。GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体特异结合后的活性测定:用改良的Amano法测定了与抗BSA-SMD单克隆抗体特异结合后的GOD-SMD活性,实验证明其活性良好。 信号转换器的装配:验证了能够使用离子分析仪(电极)把GOD-SMD和GOD的酶催化的化学信号转变为容易定量化测定的电信号。用离子分析仪(电极)实际测定了GOD-SMD和GOD的酶活力,都取得了成功并且绘制了曲线图。


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