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《扬州大学》 2008年
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含五元杂环磺胺类药物单克隆抗体的制备及初步应用

吕芳  
【摘要】: 磺胺药是兽医临床上使用最广的一类化学合成抗菌药。动物性食品中磺胺类药物残留是国际国内食品卫生标准检测的重要项目。酶联免疫法(ELISA)具有特异性强、灵敏度高且适合大批样本快速测定的特点,在兽药残留检测中的应用日益广泛。 目前针对单一磺胺药物残留的免疫检测已经取得了较多进展,而实现磺胺类药物的多残留免疫检测更具有实用价值。磺胺类药物种类繁多,结构复杂,要实现该类药物多残留酶免疫检测,首先需要获得识别谱广的族特异性抗体,其中最关键的步骤是合成具有磺胺母核结构的半抗原。 根据磺胺共同结构中N1端R取代基的不同,可将其分为含五元杂环和六元杂环等不同类型。目前,尚未有人对磺胺五元杂环或六元杂环类药物多残留免疫分析进行过研究。本研究通过化学法合成了具有磺胺五元杂环类药物母核结构的人工抗原,制备了针对磺胺五元杂环类药物具有敏感性的单克隆抗体,建立了ELISA方法,并模拟检测了鸡肌肉中的多种混合磺胺药物残留,对磺胺药物多残留免疫分析的一些基本规律进行了探讨。 用对乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)和2-氨基-4-噻唑乙酸(ATAA)为反应原料,经过亲核取代、水解等反应,合成了具有磺胺噻唑衍生物结构的半抗原化合物TS,经质谱鉴定为预期产物。用EDC法将半抗原偶联到载体蛋白上,制备了人工抗原TS-HSA和TS-BSA。紫外扫描初步判定偶联成功,两种完全抗原H1-HSA、H1-BSA的结合比分别为44:1和21:1。 采用常规免疫和脾内免疫两种方式,以TS-HSA免疫BALB/c小鼠,经比较发现,脾内免疫虽然可以节约免疫时间,但产生的抗血清无论在效价及与药物的特异性反应方面都不及常规免疫效果好,最终用常规免疫的小鼠进行细胞融合。经单克隆抗体技术筛选,获得1株可持续分泌针对磺胺五元杂环类药物抗体的杂交瘤细胞株,命名为3D3。制备了抗磺胺五元杂环类药物单抗的腹水,其效价达1:2,560,000,工作浓度达1:160,000;与青霉素、卡那霉素、阿米卡星、新霉素的交叉反应均在0.5%以下,与TS相似物对氨基苯甲酸、2-氨基-4-噻唑乙酸、对氨基苯磺酸、邻氯苯磺酰胺的交叉反应均小于1%。 间接竞争ELISA(CiELISA)表明,4种磺胺五元杂环类药物ST、PST、SST、SMZ的IC50分别为268、176、340和2202ng/mL,检测限分别为14.4、6.3、18.2和33.88 ng/mL。将4中磺胺药物等浓度混合后,当混合药物浓度在5~1000ng/mL范围内,标准曲线方程为Y=0.3523x-0.1433,IC50为66.98 ng/mL,检测限达4.63ng/mL,均低于最高残留限量0.1μg/mL。 用建立的CiELISA法,对鸡肌肉样品中添加的混合磺胺药物进行测定。当鸡肌肉样品处理液作8倍以上稀释时,样品基质干扰基本消失,且在5~5000ng/mL范围内,标准曲线方程为:Y=0.3229x-0.15,IC50为102.34ng/g,LOD为11.3ng/g。用100,1000,5000ng/mL的4种磺胺药物等浓度混合标准液做添加回收试验,经检测药物回收率在72.9%~100%之间,批内差异在2.56%~6.63%之间,批间差异在5.31%~9.72%之间。
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S859.84

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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9 魏新军;颜振敏;南海娟;张永生;王伟华;;光谱匹配技术用于磺胺类抗生素HPLC检测的研究[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
10 王伟华;魏新军;南海娟;张永生;颜振敏;;人工合成磺胺间甲嘧啶免疫抗原不同方法的研究[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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10 陈瑞清;肉鸡组织中癸氧喹酯检测方法及残留消除规律的研究[D];福建农林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周艳华;可溶性鸡蛋壳膜蛋白与多肽的制备及其抗氧化活性的研究[D];华中农业大学;2010年
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【同被引文献】
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10 符芳;姜北宇;潘裕华;高轩;;鸡新城疫抗原抗体复合物疫苗的初步研究[J];当代畜牧;2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
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中国博士学位论文全文数据库 前4条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【二级引证文献】
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2 于平;磺胺类药物的过敏存在差别[N];中国医药报;2004年
3 ;合理使用磺胺类药物[N];中国畜牧兽医报;2009年
4 赵成林;磺胺类药物不能与干酵母同用[N];医药经济报;2009年
5 郑延平;正确用磺胺类药物给家畜治病[N];中国畜牧报;2004年
6 石培普;有些药怕饮料[N];医药养生保健报;2009年
7 熊英;鸭为啥产畸形蛋[N];河南科技报;2009年
8 王道坤;孕蓄禁用哪些药[N];山西科技报;2009年
9 盐城市盐都区动物检疫站 侍亚 卞红春;一起肉鸡磺胺类药物中毒的诊治[N];江苏农业科技报;2010年
10 河北远征药业股份有限公司 魏占永;磺胺类药的应用[N];中国畜牧报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 梁晓;基于二氢叶酸合成酶的磺胺类药物多残留快速检测分析研究[D];中国农业大学;2014年
2 Muhammad Umar Farooq;[D];北京化工大学;2010年
3 陈蕾;非动物源性新型载体的研制及其对磺胺类药残检测特性的影响[D];华南理工大学;2011年
4 张从良;磺胺类药物环境行为及相关热力学基础研究[D];郑州大学;2007年
5 曹鹏;山东省出口水产品药物残留分析及代谢动力学研究[D];山东农业大学;2012年
6 洪小平;基于碳纳米管材料的磺胺电化学传感器研究[D];浙江大学;2012年
7 余欢;动物可食性组织中兽药多残留检测关键技术研究[D];华中农业大学;2010年
8 张小军;水产品中三类药物多残留的HPLC和UPLC-MS/MS分析方法研究[D];浙江工商大学;2012年
9 李在建;米诺环素在鲤、氧阿苯达唑在鲫体内的代谢研究暨鲤CYP450的初步研究[D];华中农业大学;2013年
10 张代辉;液相色谱—串联质谱技术对食品中主要兽药残留的研究[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 秦国建;磺胺类药物在海南砂质土壤中迁移降解与累积研究[D];湖南农业大学;2012年
2 何金华;堆肥对畜禽养殖废物中磺胺类药物的降解研究[D];湖南农业大学;2012年
3 张闻娟;鸡肉中磺胺药物残留风险评估[D];华中农业大学;2013年
4 唐慧楠;动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法研究[D];昆明理工大学;2012年
5 王奇;珠江三角洲典型养殖区磺胺类抗生素的监测分析及其生物标记物研究[D];暨南大学;2010年
6 李明亮;环境中磺胺类药物的降解行为及影响因素的研究[D];河南师范大学;2012年
7 许珊珊;SAs在蔬菜中的残留及土壤—蔬菜系统中的环境行为[D];安徽农业大学;2011年
8 赵笑天;免疫亲和净化—液质联用法在食品有害物质残留分析中的应用[D];山西大学;2012年
9 沈清;水产品中尼泊金酯、磺胺和孔雀石绿残留检测的方法学研究[D];浙江工商大学;2012年
10 李金宝;三种磺胺类药物在中国对虾体内的药物代谢动力学特征[D];大连海洋大学;2014年
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