收藏本站
《扬州大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

钙、磷对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化影响的研究

卓丽玲  
【摘要】: 随着人们对骨代谢疾病的重视,研究不同因子对成骨细胞(osteoblast,OB)的影响已成为当今热点。OB有形成骨骼、调节细胞外骨基质成分的构成以及骨基质矿化的功能。因此,OB功能状态与骨骼生长塑造、再造及骨质疏松的发展有着极其密切的联系。有些疾病可以通过增加OB的数量或增强OB的活性而引起骨量的增加。钙和磷是骨骼的重要物质成分,骨代谢过程必然涉及动物机体对钙、磷的吸收和代谢。摄入充足的钙、磷对保持动物的骨骼完好至关重要。体内钙、磷代谢的平衡和钙磷在细胞内、外液中浓度的稳定对维持正常骨代谢有重要作用。因此,建立一种快速获得OB的培养方法,研究钙、磷对OB体外增殖、分化及矿化的影响,对骨质疏松症的研究有重要的理论和指导意义。 本试验选用5 d SD大鼠头盖骨作为试验用OB的来源,通过胰蛋白酶预消化后,剪碎,经Ⅱ型胶原酶消化获得细胞,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、钙化结节染色鉴定,经台盼蓝染色、“反复贴壁法”纯化后,进行了成活率和纯度分析,用MTT法检测了一个生长周期内OB的活性分布,成功建立了SD大鼠头盖骨OB体外培养模型;在体外培养的基础上,在培养液中添加不同浓度的钙、磷及其比例,共分9组,分别为不添加任何成分的对照组、添加1、2、4 mmol/L钙组、添加1、2、4 mmol/L磷组、钙磷比1∶2(添加1 mmol/L钙+2 mmol/L磷)组和钙磷比2∶1(添加2 mmol/L钙+1 mmol/L磷)组。分别从OB的形态学、OB分泌ALP活性、OB分泌蛋白、Ⅰ型胶原(collagen type I,Col-I))、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的含量、OB表达ALP、Col-I、OPN、骨钙素(bone glaprotein,BGP)mRNA的含量及OB内Ca2+沉积及体外钙化等指标进行了分析,详细的研究了钙、磷及其比例对乳鼠头盖骨OB增殖、分化及矿化的影响。结果表明,①本试验培养的头盖骨OB,经ALP染色鉴定,并计数,OB纯度高达98.06%,台盼蓝染色计数分析,原代OB成活率为88.69%,传代的OB成活率高达94.12%,且在一个生长周期内,在第3、4 d进入对数生长期,细胞融合并开始重叠生长,在第7 d达到峰值,并进入钙化期,随后细胞进入衰减期。因此,本试验将选择在细胞融合时定为钙、磷处理OB的时间点,检测处理后第2、5、8 d的各种指标;②与对照组比较,添加钙各组均促进OB增殖,且有剂量效应,钙4 mmol/L从第2 d开始差异显著(P0.05),钙1、2 mmol/L从第5 d开始差异显著(P0.05),而钙磷比(2:1、1:2)只在第8 d差异显著(P0.05)。而添加磷对OB增殖作用影响不明显。③与对照组比较,添加钙使OB胞体饱满,表面针状突起增多,形态结构无破损,细胞膜、核膜完整,线粒体轻度肿胀,添加磷及不同钙磷比使OB胞体扁平,针状突起减少,但形态结构无破损,细胞膜、核膜完整。④与对照组比较,添加钙、磷及其比例在第2、5、8 d均抑制细胞内ALP活性(P0.05),在第5 d抑制其mRNA的表达(P0.01),但在第2、8 d却促进其mRNA的表达(P0.05)。⑤与对照组比较,添加钙、磷及其比例各试验组除1 mmol/L钙外,在第2 d均促进Col-I分泌(P0.01),钙各组和1 mmol/L磷在第5 d和钙各组和1、2 mmol/L磷和钙磷比(2:1)在第8 d均抑制其分泌(P0.05或P0.01),在第2、8 d均促进其mRNA表达(P0.01),在第5 d除钙磷比(1:2)外均抑制其mRNA表达(P0.01)。⑥与对照组比较,添加钙、磷及其比例作用后,各试验组均促进OPN mRNA的表达(P0.01),除第2 d钙1、2 mmol/L组外,均促进其分泌(P0.05)。⑦与对照组比较,添加钙、磷及其比例作用后,各试验组均促进BGP mRNA的表达(P0.01)。⑧与对照组比较,添加钙、磷及其比例作用后,各试验组均能促进OB内Ca2+的沉积及体外钙化。表明,钙(1、2、4 mmol/L)及钙磷比(1∶2 ,2∶1 )能促进OB增殖、分化及体外钙化,利于新骨的形成。磷(1、2、4 mmol/L)能促进OB的分化及体外钙化,但对增殖作用不明显。
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S816

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王凌;王玉东;李大金;王文君;朱影;;补肾宁心方药物血清对鼠成骨细胞的增殖周期与凋亡的影响[J];中华中医药杂志;2006年01期
2 傅德皓;杨述华;马德彰;李鲲;郜勇;;鼠胚成骨细胞的原代培养与鉴定[J];创伤外科杂志;2006年02期
3 吴军正,司徒镇强,刘斌,陈建元;四唑盐比色试验中有关条件的探讨[J];第四军医大学学报;1991年04期
4 王卫华;成骨细胞体外培养方法研究进展[J];国外医学.口腔医学分册;1996年05期
5 刘宏;矿化相关蛋白及其与牙周组织的关系[J];国外医学.口腔医学分册;2000年02期
6 崔燎,陈槐卿;骨细胞间隙连接与物理—生物信号传导研究进展[J];国外医学.生物医学工程分册;2003年03期
7 丁焕文,何锡煌,苏增贵;新生小鼠成骨细胞体外培养及其形态结构变化[J];解放军医学杂志;1998年06期
8 徐青,田秀巧,张会丰;成骨细胞分化产物及其生化标志研究进展[J];临床荟萃;2003年01期
9 陈凤花,王琳,胡丽华;实时荧光定量RT-PCR内参基因的选择[J];临床检验杂志;2005年05期
10 阳成波,印遇龙,黄瑞林,李铁军,单计光,唐志如;实时定量RT-PCR的原理及方法[J];免疫学杂志;2003年S1期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蒋东霞,杨胜利,何琳;恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr-1基因表达在原发耐药与继发耐药中的作用研究[J];癌变.畸变.突变;2002年04期
2 何琳,张巧,胡杰英;抗肿瘤药物体外诱导新鲜癌组织及其外周血淋巴细胞mdr-1基因表达的相关性研究[J];癌变.畸变.突变;2002年04期
3 何志颖,江千里,姚玉成,温丽敏,李建秀,王新民,胡以平,王健民;RFP标记的YCD基因在HeLa细胞中的表达及其介导的细胞毒性[J];癌变.畸变.突变;2004年05期
4 单保恩,李俊新,张静,梁文杰,李宏芬;中药香加皮与其易混品体外抑瘤效果研究[J];癌变.畸变.突变;2005年05期
5 朱京童;白玉;司文秀;刘洪喜;任曲辉;;中药白头翁提取物抗肿瘤活性的体外实验研究[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
6 刘俊康;吴小兰;章荣华;徐启旺;;小鼠EP瘤细胞株建立的初步研究[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
7 赵文红;庄颖;赵红;张鼎;;胆固醇诱导内皮细胞凋亡及抑制细胞增殖的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2007年06期
8 杜牡丹;宋旭红;刘戈飞;梁斌;张巧霞;李蕊;谢健平;甘雪琼;黄东阳;;抗兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶单克隆抗体的制备和鉴定[J];癌变.畸变.突变;2008年03期
9 张铭清;;中华补血草黄酮抑制白血病细胞增殖的初探[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年01期
10 徐晓辉;刘延吉;王淼;田晓艳;;干旱胁迫对杨树幼苗叶片内ABA和CaM含量的影响[J];安徽农业科学;2006年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曾思遥;张淑琼;余绍华;唐志玲;陈瑞爱;罗满林;;TaqMan实时荧光定量PCR检测PCV2方法的建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 郝冬海;曹珂;刘检;张予阳;;细胞损伤模型在化合物抗脑缺血活性筛选中的应用[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
3 王涛;申光茂;豆威;王进军;;橘小实蝇核糖体蛋白RpL26基因的克隆及序列分析[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
4 洪胜辉;张军;张蕊;王来娣;邵丹;张宜辉;董飚;段修军;龚道清;;鹅原代肝细胞的简易、高纯分离及培养[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
5 申文;冯西桥;;细胞粘附的有限元模拟[A];损伤、断裂与微纳米力学进展:损伤、断裂与微纳米力学研讨会论文集[C];2009年
6 薛传华;何林;赵志模;;朱砂叶螨β-actin基因cDNA片段的克隆及实时荧光定量PCR方法的建立[A];庆祝重庆市植物保护学会成立10周年暨植保科技论坛论文集[C];2007年
7 王德文;王炜;左红艳;姚华;常公民;王瑞娟;高亚兵;王水明;董波;张志毅;彭瑞云;;不同波段电磁辐射对淋巴细胞的损伤效应[A];第十二届中国体视学与图像分析学术会议论文集[C];2008年
8 钱永强;孙振元;韩蕾;巨关升;;野牛草相连分株对异质水分环境的生理响应及其调控[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
9 丁宗一;林以勤;杜丽蓉;;儿科营养学与儿童食品进展[A];第二届中国营养产业高层论坛文集[C];2005年
10 施阳;许东芳;吴四华;沈智慧;周先安;何其庄;;镧-噻吩甲酰三氟丙酮-联咪唑三元配合物的合成、表征及其生物活性研究[A];上海市化学化工学会2009年度学术年会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李坤寅;橘荔散结丸有效部位对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及相关因子表达的影响[D];湖南中医药大学;2010年
2 王嘉;皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino.)L-古洛糖酸-1,4-内酯氧化酶(GLO)的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 曹秀明;壳寡糖及衍生物抗肿瘤作用、免疫调节作用及其机制的研究[D];中国海洋大学;2010年
4 王丹;融合肽minTBP-1-PRGDN涂层影响钛表面成骨细胞粘附、增殖及分化功能的体外研究[D];华中科技大学;2010年
5 钟兴;hNIS转染鼻咽癌介导放射性核素显像和治疗的实验研究[D];暨南大学;2010年
6 屈啸声;姜荆提取物抑菌活性的热动力学研究[D];浙江大学;2009年
7 刘岩;开窍药对血脑屏障与脑细胞功能及其机制的影响[D];成都中医药大学;2010年
8 郑敏;急性白血病儿童维生素D受体基因多态性和表达及维生素D对白血病细胞的影响[D];广西医科大学;2011年
9 王瑾;抗β1-肾上腺素受体自身抗体对T淋巴细胞增殖和分泌功能的影响[D];山西医科大学;2011年
10 杨朝晖;钠离子通道阻断剂利多卡因体内外干预关节软骨的生物学效应[D];山西医科大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王艳伟;PRRSV感染激活RANTES产生的信号通路研究[D];华中农业大学;2010年
2 舒磊;钙敏感受体介导甲状旁腺素和钙在促进骨形成中的作用及其机制研究[D];南京医科大学;2009年
3 施六霞;富血小板血浆对不同条件下人牙周膜成纤维细胞功能的影响[D];南京医科大学;2010年
4 沈锦玉;丝素蛋白/β-硅酸钙复合多孔支架的结构及其性能研究[D];浙江理工大学;2010年
5 刘媛媛;番茄农杆菌介导基因转化技术体系的优化与番茄LeJA2基因的功能研究[D];山东农业大学;2009年
6 曹祖兵;猪克隆胚胎生产技术及组蛋白乙酰化免疫荧光染色技术优化[D];安徽农业大学;2010年
7 季彦林;马铃薯块茎糖苷生物碱积累的光诱导效应研究[D];甘肃农业大学;2010年
8 陈文;复骨健步片对大鼠模型骨折愈合早期成骨细胞增殖和VEGF表达的影响[D];湖南中医药大学;2010年
9 谢鹏;脂多糖、多巴胺对凡纳滨对虾血细胞作用机制的研究[D];中国海洋大学;2010年
10 王建立;猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞模式识别受体转录水平的影响[D];中国农业科学院;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 常连胜,冯陶,姜长林,姜学军,窦长琪,黄有媛,郭应禄;维生素D和维生素K对结石大鼠肾脏骨桥蛋白mRNA表达的影响[J];北京医科大学学报;1999年05期
2 王立平,党耕町;骨桥蛋白在骨愈合过程中的基因表达[J];北京医科大学学报;1998年04期
3 闫爱民,刘力,陈秉礼,王智彪;兔胚成骨细胞的原代培养与鉴定[J];创伤外科杂志;2002年S1期
4 闫爱民,刘力,陈秉礼,王智彪;兔胚成骨细胞移植修复异体兔骨缺损的实验研究[J];创伤外科杂志;2003年02期
5 任立群,李广生;钙营养对氟的骨骼毒性的影响[J];中国地方病防治杂志;1999年01期
6 林榕,王时书,周淑芸,徐晓兰,易正山,陈善文,林刚,罗美云;238例恶性淋巴瘤患者中性粒细胞碱性磷酸酶染色结果分析[J];第一军医大学学报;2003年10期
7 高飞,霍建忠;不同龄小鼠成骨细胞OPG和RANKL表达的变化[J];中华风湿病学杂志;2005年04期
8 马华梅;小儿生长和骨生化标志的改变[J];国外医学(儿科学分册);1999年02期
9 李梅,孟迅吾,周学瀛;Ⅰ型胶原蛋白与骨质疏松症研究进展[J];国外医学(内分泌学分册);2000年01期
10 高建军;破骨细胞成熟和活化以及骨吸收机制[J];国外医学.内分泌学分册;1998年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张靠稳;马爱瑛;叶东平;杨婧;;DFRKN-1碱性磷酸酶的提取纯化和主要理化性质研究[J];安徽农业科学;2008年26期
2 卓丽玲;张春岭;顾建红;刘宗平;;钙对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化及细胞周期的影响[J];中国兽医学报;2009年06期
3 龚飞飞;胡登林;赵正剑;李艳丽;朱飞飞;余雄;;补饲营养调控剂对暖季放牧羔羊生长发育及生化指标的影响[J];中国草食动物;2011年04期
4 欧阳红生,汪玉松;鸡骨、肝和肠硷性磷酸酶的提纯和性质[J];中国兽医学报;1988年02期
5 陈定福,唐云明;长吻鮠碱性磷酸酶的分子量及氨基酸组成[J];水产学报;1995年01期
6 赵赣,钱芳,孙永学,黄亮,曾莹,赵均良,夏继星,李晓渝;鸡肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质的研究[J];上海交通大学学报(农业科学版);2003年03期
7 国锦琳,刘克武,陶科,秦岭,刘鑫,黄新河,陈祁磊;瘦肉型猪(PIC344)精液碱性磷酸酶功能基团的化学修饰[J];西南农业学报;2003年03期
8 陈巧;洪燕飞;廖金花;庄总来;陈清西;;杂色鲍碱性磷酸酶在醇、醛和酮溶液中的失活作用[J];台湾海峡;2005年04期
9 吴珍红;樊少华;张其康;付中民;缪晓青;;金属离子及脲对中华蜜蜂工蜂碱性磷酸酶的影响[J];福建农林大学学报(自然科学版);2006年02期
10 陈静;刘显军;边连全;石娇;付丽;;谷氨酰胺对早期断奶仔猪血清GPT、AKP活性的影响[J];中国饲料;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘天舒;崔越宏;陈世耀;王吉耀;;不同的胃癌细胞株中骨桥蛋白的表达比较[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
2 王燕燕;马欣然;柳融皎;朱巍;姜晓华;宁光;王曙;;初发Graves病患者血清中骨桥蛋白的表达和意义[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
3 薛裕华;张晓飞;董琼珠;付丽云;孙健贾;户亮;钦伦秀;;HCC凝血酶的表达与骨桥蛋白阳性患者的总体生存和复发相关[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年
4 孙婕;尹国友;陈兰英;;牛乳中功能性蛋白质对大鼠成骨细胞的影响[A];河南省细胞生物学学会第二届会员代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2009年
5 胡涛;贾国良;贾林涛;张荣庆;王海昌;李寰;王晓燕;;内皮素对大鼠主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
6 王莹;;骨桥蛋白及其受体在结石动物模型及细胞模型中的表达[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
7 俞文华;车志豪;张祖勇;许培源;陆镛民;傅林;朱强;陈锋;杜权;;骨桥蛋白在胶质瘤细胞中的表达及其信号传导途径[A];2005年浙江省神经外科学术会议论文汇编[C];2005年
8 刘虹彬;温进坤;韩梅;;丹参对氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2、9和骨桥蛋白表达的影响[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
9 孙威;魏锐利;;骨桥蛋白与眼部疾病的研究进展[A];第六届全国中医中西医结合眼科学术交流会论文汇编[C];2007年
10 杜权;俞文华;许培源;陆镛民;傅林;朱强;张祖勇;车志豪;陈锋;江林涌;董晓巧;;胶质瘤患者外周血骨桥蛋白检测及其临床意义[A];2007浙江省神经外科学学术年会论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王世焕;利用SD大鼠培育人用皮肤[N];医药经济报;2001年
2 胡德荣;“骨桥蛋白”是导致类风湿性关节炎顽凶[N];健康报;2005年
3 记者 谢军;类风湿性关节炎研究获重大突破[N];光明日报;2005年
4 胡德荣;类风湿性关节炎研究获重大突破[N];中国医药报;2005年
5 孔璐;王继峰;牛建昭;北京揭示中药治疗肺纤维化机制[N];中国医药报;2005年
6 龙岩;新技术让你的皮肤“刀过不留痕”[N];北京科技报;2008年
7 黎彬;肝癌研究重要进展——预测肝癌转移成为可能[N];中国医药报;2004年
8 丁;影响肾功能的一些因素[N];健康报;2005年
9 王雪飞;肝癌乳癌复发转移基因被“捕获”[N];健康报;2004年
10 ;前景诱人的治疗性超声[N];中国中医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 卓丽玲;钙、磷对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化影响的研究[D];扬州大学;2009年
2 韩志岩;人甲状旁腺激素(1-34)治疗骨质疏松的细胞学机制研究[D];中国协和医科大学;1999年
3 范哲;过量氟对几种非胶原蛋白和转化生长因子β表达的影响[D];吉林大学;2006年
4 王鹏程;周期性牵拉应力下三维培养的成骨样细胞的生物力学效应及其机制的研究[D];河北医科大学;2005年
5 张纲;bFGF、rhBMP-2聚乳酸纳米微球促进下颌骨骨折愈合的实验研究[D];第三军医大学;2007年
6 冯志远;寡核苷酸(ODN)促成骨细胞增殖活化的作用及机制研究[D];吉林大学;2011年
7 庞向华;骨质疏松患者成骨细胞相关细胞因子蛋白表达与证型的相关性研究[D];广州中医药大学;2008年
8 李菲菲;机械牵张应力对成骨细胞生物特性的影响及蛋白组学研究[D];第四军医大学;2009年
9 薛裕华;凝血酶是治疗转移性骨桥蛋白阳性肝细胞肝癌的靶点[D];复旦大学;2010年
10 刘希胜;骨桥蛋白及其反义基因对肝癌细胞浸润的生物学行为实验研究[D];苏州大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李冰;甲状旁腺素相关蛋白对小鼠颌骨来源成骨细胞增殖分化的影响[D];南京医科大学;2006年
2 易东升;联合应用BMP-2和BMP-7对大鼠乳鼠成骨细胞生物学活性的影响[D];大连医科大学;2009年
3 钟代彬;氟对体外培养山羊成骨细胞增殖分化及凋亡的调控[D];中国农业大学;2005年
4 晋容珍;压电陶瓷与成骨细胞生物相容性的实验研究[D];四川大学;2007年
5 吴俊平;5-氮胞苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究[D];浙江大学;2007年
6 陆磊;甲状腺乳头状癌与钙化的关系及其组织中表达骨桥蛋白的临床和实验研究[D];复旦大学;2010年
7 王冬梅;骨桥蛋白在子宫内膜异位症发病机制中的研究[D];山东大学;2005年
8 孟琳;成骨生长肽对成骨细胞在种植体表面相关生物学特性的研究[D];重庆医科大学;2008年
9 王鸿涵;骨桥蛋白在鼻咽癌组织中的表达及临床意义[D];中南大学;2010年
10 杨松;骨桥蛋白与高血压血管重构的关系及他汀的干预影响[D];重庆医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026