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《仲恺农业工程学院》 2016年
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广州四种花卉细菌性新病害病原鉴定

许俊宽  
【摘要】:我国花卉市场发展迅速,尤其是在近十年来种植面积逐年扩大,花卉品种也逐年增多。随着花卉产业的不断发展,一些病虫害相继发生,尤其是花卉病害发生较为严重。广州是我国生产和销售花卉的重要地区,但每年花卉病害给花卉产业造成较大影响,一些花卉病害种类并不清楚,因此了解其病原种类及其发生动态对于今后花卉病害的防治具有重要的指导作用。本研究通过对病原菌的致病力测定、生理生化性状测定以及分子生物学鉴定,初步鉴定了以下四种花卉病害病原:1、金钻蔓绿绒叶斑病病原菌鉴定。根据柯赫法则,通过分离纯化和致病力测定获得病原菌株JZMLR(登陆号:KU758911),利用引物27F/1492R扩增病原菌16S rRNA基因,扩增产物在GenBank上进行对比,结果显示,病原菌株JZMLR与Dickeya dadantii SR1、Erwinia chrysanthemi CY-1和Erwinia chrysanthemi strain CF-1相似性高达99%,通过构建其系统发育树,菌株JZMLR在独立一个分支上;再利用引物CM13/CM7扩增病原菌的RNA聚合酶基因(rpoB),扩增产物在GenBank对比序列,结果表明,与病原菌株JZMLR相似性在98%以上只有D.dadantii。再根据D.dadantii及相近种的生理生化性状差异,参考伯杰氏系统鉴定手册(第二版),选取19项生理生化性状进行测试,结果显示,病原菌株JZMLR与D.dadantii的生理生化性状相似性为68.42%,因此,初步将金钻蔓绿绒叶斑病病原菌鉴定为Dickeya dadantii。2、福禄桐叶斑病病原菌鉴定。根据柯赫法则,通过分离纯化和致病力测定获得病原菌株FLT,利用引物27F/1492R扩增病原菌16S rRNA基因并构建系统发育树,结果显示,相似性在99%以上的有野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)、地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis)和柑橘黄单胞菌(Xanthomonas citri)。通过构建系统发育树,病原菌株FLT与Xanthomonas axonopodis在同一分支上。再参考伯杰氏系统鉴定手册,选取18项生理生化性状进行测试,FLT与X.axonopodis的生理生化性状相似性为55.56%,据此初步将福禄桐叶斑病鉴定为Xanthomonas axonopodis。3、百合竹叶斑病病原鉴定。通过分离纯化和致病力测定获得病原菌株BHZ(登陆号:KU758912),利用引物27F/1492R和gyrb1f/gyrb2f分别扩增病原菌的16S rRNA基因和DNA促旋酶基因(gyrB基因),扩增产物在GenBank上进行序列对比并构建系统发育树,结果显示,基于16S rRNA基因构建的系统发育树中,病原菌BHZ与其他菌株在同一群组内,而在基于gyrB基因构建的系统发育树中,BHZ与Bacillus megaterium strain Q3在同一分支,自展支持率为74%,再参考伯杰氏系统鉴定手册,选取26项生理生化性状进行分析,结果显示,BHZ与B.megaterium的生理生化性状相似性为92.3%,因此,初步将百合竹叶斑病鉴定为Bacillus megaterium。4、印度橡胶榕叶枯病病原菌鉴定。通过分离纯化和致病力测定获得病原菌株YDXJR,利用引物27F/1492R扩增病原菌株16S rRNA基因,扩增产物在GenBank上进行对比,与病原菌株相似性高于99%的细菌有蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、Marinobacter arcticus和变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida),并对其构建系统发育树,结果显示,YDXJR在独立的分支上;再利用引物CM7/CM31扩增病原菌株的rpoB基因,扩增产物在GenBank上比对,与病原菌株相似性高于99%的细菌有Pseudomonas putida、Pseudomonas monteilii、食油假单胞菌(Pseudomonas oleovorans strain)和Pseudomonas plecoglossicida,并对其构建系统发育树,结果表明,YDXJR与Pseudomonas.plecoglossicida在同一分支上;参考伯杰氏系统鉴定手册,选取10项生理生化性状测试,病原菌株YDXJR与P.plecoglossicida的生理生化性状相似性达70%,因此,初步将印度橡胶榕叶枯病病原菌鉴定为Pseudomonas plecoglossicida。
【学位授予单位】:仲恺农业工程学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S436.8

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