收藏本站
《仲恺农业工程学院》 2019年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

J亚群禽白血病病毒的分离及p27嵌合蛋白的构建及表达

曾依翎  
【摘要】:J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus,ALV-J)在世界各地广泛流行,能引起禽类多种具有传染性的良性和恶性肿瘤疾病,造成巨大的经济损失。ALV-J在我国宿主范围已由商品种鸡扩大至本地品种鸡,且没有有效防治的疫苗或药物,净化种鸡场是唯一的防控方式。因此对祖代种鸡场进行禽白血病病毒的检测监控以及禽白血病病毒快速、准确、有效的检测方法的建立具有重要的意义。本研究从华东某地方品种祖代种鸡场采集998份公鸡精液样品,经ALV ELISA抗原检测试剂盒检测,DF-1细胞分离,最终分离出一株ALV命名为G4-4。检出率为5.51%(55/998),分离率为1.82%(1/55)。经ALV亚群特异性引物鉴定,分离株G4-4为ALV-J。G4-4的p27基因序列与A、B、C、D、E、J、K亚群毒株的p27基因相似在91.8%~98.4%,其中,G4-4与J亚群的JS09GY3相似性高达98.4%。遗传进化分析发现G4-4与JS09GY3划分为同一分支,说明两者亲缘性较近。G4-4的gp85基因序列与A、B、C、D、K、E亚群毒株的gp85基因相似在46.7%~85.6%,与J亚群的毒株JS09GY3的gp85基因相似性高达99.4%。遗传进化分析发现,分离株G4-4与J亚群和E亚群禽白血病病毒处于同一大分支,而A、B、C、D、K亚群的毒株处于另一大分支。此外,分离株与JS09GY3和JS09GY6毒株处于同一小分支,说明亲缘关系较近。为了制备抗禽白血病病毒p27蛋白高免血清,本研究利用生物学软件筛选出多个ALV-J的p27抗原表位,并用丝氨酸与甘氨酸串联,克隆至P-particle表达载体,命名为pp354。经过蛋白表达验证,重组蛋白pp354大小约为73 kD。重组蛋白pp354在温度为25℃、IPTG浓度为0.4 mM、恒温振荡培养8 h时表达量最高,此表达条件下重组蛋白可溶性约为50%。ELISAALV抗原检测试剂盒结果表明重组蛋白可有效与p27抗体结合,具有p27蛋白抗原性,且用ALV-J阳性血清进行Western blot鉴定,在73 kD处有明显条带。ALV-J的不断流行和扩散要求我们要建立ALV-J阴性祖代种鸡群,而ALV-J抗原检测试剂盒的开发是实现这一目标的基础。针对目前商品化ALV-J检测试剂盒和检测方法存在的诸如昂贵、假阳性率高等缺陷和不足,建立一种能表达出识别ALV-J特异抗原片段的蛋白表达平台对于ALV-J商品化检测方法的建立以及ALV-J的净化有着很大的帮助。本研究对华东某地方品种祖代种鸡场采集的样品进行ALV-J分离分析,并利用P-particle表达载体构建具有p27抗原性的重组蛋白pp354,为ALV-J p27特异性抗体的产生以及国产商品化ALV p27抗原ELISA检测试剂盒的研发奠定基础。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 宁雪松;;禽白血病病毒流行情况与净化措施[J];新农业;2018年11期
2 杨守锋;邢红方;彭远义;;J亚型禽白血病病毒病原学及诊断方法研究进展[J];畜禽业;2009年04期
3 ;应该在更大范围根除禽白血病病毒(ALV)[J];中国家禽;2000年11期
4 ;哈兽研破解禽白血病病毒感染机制[J];家禽科学;2018年01期
5 柴家前;王贵强;孙淑红;郭慧君;崔治中;;J亚群禽白血病病毒分子流行病学研究进展[J];山东畜牧兽医;2009年01期
6 冯小宇;徐镔蕊;Lucy F.Lee;Maoxiang Li;;蛋鸡J亚群禽白血病病毒的分离与初步鉴定[J];中国兽医杂志;2008年01期
7 杨玉莹,叶建强,赵振华,秦爱建,顾玉芳;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[J];中国病毒学;2003年05期
8 刘丹;;禽白血病病毒特点及净化[J];畜牧兽医科学(电子版);2020年06期
9 杜燕;;禽白血病病毒的综合诊断[J];中国畜牧兽医文摘;2016年12期
10 尹念春;;J亚群禽白血病病毒的分子生物学研究进展[J];中国动物检疫;2012年04期
11 王超;缪华先;谢宝婵;张伟伟;吴润;刘光清;;J亚型禽白血病病毒的拯救与鉴定[J];中国预防兽医学报;2011年11期
12 张在平;田进;孟庆文;马学恩;;Real-time RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2010年05期
13 王林山;尹燕博;徐守振;郭妍妍;吴珊珊;胡永新;张本清;;鸡J亚群禽白血病病毒与七种常见病毒混合感染的调查[J];动物医学进展;2010年11期
14 祝丽;张玲娟;孙磊;;禽白血病病毒与免疫抑制[J];中国动物检疫;2009年04期
15 祝丽;张玲娟;;禽白血病病毒与免疫抑制[J];山东畜牧兽医;2008年12期
16 DrkongSonchiu,周剑峰;禽白血病病毒J亚群[J];山东家禽;1999年05期
17 朱其太;禽白血病病毒的一个新亚型[J];动物检疫;1992年03期
18 屈素洁;邹联斌;陈芳芳;张步娴;胡杰;莫胜兰;施开创;李军;尹彦文;;应用荧光定量RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒[J];中国动物检疫;2015年06期
19 谢青梅;;miRNA在J亚群禽白血病病毒致瘤调控机制中的作用[J];中国家禽;2014年12期
20 杭柏林;尹丽萍;孙薇薇;梁有志;钱琨;金文杰;邵红霞;秦爱建;;J亚群禽白血病病毒感染鸡的抗原和血清抗体变化规律[J];中国家禽;2013年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨玉莹;叶建强;赵振华;秦爱建;顾玉芳;;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
2 商营利;刘思当;丁宝君;肖一红;成子强;孙先明;褚艳丽;;鸡感染J亚群禽白血病病毒的免疫抑制机理[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
3 王真真;蔡黎明;徐晴晴;王桂花;成子强;;外源体在禽白血病病毒诱导免疫抑制中的作用[A];2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会论文集[C];2012年
4 张太翔;凌宗帅;史玉颖;高小博;田国宁;张金玲;韩亮;张丽萍;;实时荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立与应用[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
5 廖亚琳;廖明;曹伟胜;;禽白血病病毒受体研究进展[A];第三届(2012)中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2012年
6 刘超;董静;艾仕云;;基于纳米纤维素-金复合物检测禽白血病病毒[A];第十三届全国电分析化学学术会议会议论文摘要集[C];2017年
7 孙淼;吴艳;郭振华;曾凡桂;曹红;郑世军;陈福勇;;J亚型禽白血病病毒分子流行病学调查及进化分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
8 顾小雪;韩雪;蔡林;张硕;李晓霞;汪葆玥;遇秀玲;翟新验;;血管瘤型J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
9 王彦军;孙淼;曹红;陈福勇;;禽白血病病毒自然感染及抗体变化动态规律[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
10 窦新红;沈海玉;;地方特色蛋鸡配套系亲本中禽白血病病毒的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会家禽学分会第九次代表会议暨第十六次全国家禽学术讨论会论文集[C];2013年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 高玉龙 张晓鹏 记者 姜雪松;哈兽研破解禽白血病病毒感染机制[N];哈尔滨日报;2017年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周德方;J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮组织增殖病病毒协同致瘤机制研究[D];山东农业大学;2018年
2 兰茜;热应激和J亚型禽白血病病毒对鸡肝脏和脾脏转录组的影响及其作用机制研究[D];四川农业大学;2017年
3 付朝阳;J亚群禽白血病病毒分离株变异分析及重组抗原ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2004年
4 叶建强;J亚群禽白血病病毒Env蛋白分子生物学特性研究[D];扬州大学;2005年
5 杨玉莹;J亚群禽白血病病毒内蒙株的分离鉴定及其部分分子生物学特性的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
6 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
7 邱玉玉;A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D];山东农业大学;2011年
8 吴晓平;商品蛋鸡源J亚群禽白血病病毒分离株生物学特性研究[D];扬州大学;2010年
9 王琦;J亚群禽白血病病毒致病性增强的分子机制[D];中国农业科学院;2014年
10 董宣;我国鸡群禽白血病病毒的多样性、致病性及其在免疫选择压下准种演变[D];山东农业大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 曾依翎;J亚群禽白血病病毒的分离及p27嵌合蛋白的构建及表达[D];仲恺农业工程学院;2019年
2 庞宇;J亚群禽白血病病毒(ALV-J)劫持胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)促进其复制[D];山东农业大学;2019年
3 沈习;抗A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的研制与不同试剂盒临床检测差异性分析[D];扬州大学;2019年
4 张明珠;禽白血病病毒A/B/J亚群多重PCR检测方法的建立及应用[D];吉林大学;2019年
5 姜旭;禽白血病病毒p27基因在毕赤酵母中表达及间接ELISA检测方法的建立与应用[D];延边大学;2018年
6 林汉卿;贵州禽白血病病毒序列分析与抗禽白血病中药筛选[D];贵州大学;2018年
7 赵海燕;K亚群禽白血病病毒快速检测方法研究[D];华南农业大学;2016年
8 刘兰;禽白血病病毒J亚群和K亚群囊膜蛋白单克隆抗体的制备[D];长江大学;2018年
9 赵金荣;福建河田鸡群重组禽白血病病毒FJ15HTO株分离鉴定及其生物学特性研究[D];福建农林大学;2017年
10 黄新;贵州省地方品种鸡禽白血病病毒流行毒株的亚型鉴定及其分子特征分析[D];山东农业大学;2017年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978