收藏本站
《仲恺农业工程学院》 2019年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

塞内卡病毒广东株分离鉴定及全基因组序列分析与VP1蛋白原核表达

林秀银  
【摘要】:塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种猪的新的外来的病毒,是小核糖核酸病毒科塞内卡病毒属的典型代表。临床症状与猪口蹄疫(FMD)、猪水疱病(SVD)、猪水疱疹(VES)、猪水疱性口炎(VS)等水泡性疾病非常相似,容易与这些水疱性疾病相混淆、以及误诊,严重危害养猪健康,可以导致很大的经济损失。然而,SVA在致病机理、流行情况、诊断和防控技术等方面研究不多,鉴别技术较少,另外用于研究SVA病原的材料较少。SVA是如何传入中国境内、发生流行、如何遗传进化变异情况等需要深入的研究。因此,本研究开展SVA广东毒株的分离鉴定及其VP1基因的原核表达,具有现实意义。SVA广东毒株的分离鉴定试验。本研究采用三重荧光定量PCR方法,对本实验室于2016-2018年从广东地区多个猪场收集及保存的108份临床样品进行初筛,检测出2份疑似SVA的阳性样品。将2份疑似SVA阳性样品经无菌过滤处理后,接种猪睾丸细胞(ST),仓鼠肾细胞(BHK-21)进行病毒分离,在第6代传代培养后,48h内能出现典型的细胞病变;连续传代培养后,取细胞培养上清液进行蔗糖密度梯度离心纯化,进行RT-PCR扩增及测序,将测序结提交到NCBI Blastn比对,结果表明两株病毒均为塞内卡病毒,分别命名为SVA CH-GDBL1-2016和SVA CH-GDBL2-2016。将细胞培养上清液作电镜检查,观察到直径约25nm大小的病毒粒子。经TCID_(50)检测,其滴度分别为10~(6.8)、10~(6.7)。全基因组序列测定与分析比对试验。根据NCBI已登录的SVA序列,设计3对特异性引物,对2株SVA病毒进行全基因组扩增与分析,并利用NCBI Blastn网站、分析软件DNAStar,对病毒的全基因组序列作分析比对。结果表明:两株病毒与国内外分离毒株全基因的同源性在93.8%-99.3%之间。其中与美国分离株ATCC PTA-5343全基因组同源性最低,分别为93.9%、93.8%,与中国分离株CH/GXI09/2016的同源性最高,高达99.3%。而且,分离株SVA CH-GDBL1-2016与分离株SVA CH-GDBL2-2016之间的同源性为99.8%。在系统进化树中,本研究的2病毒株与美国分离株ATCC PTA-5343、SVV-001的亲缘性最远,变异较大,其中,SVV-001为SVA的经典原型;与中国华南地区2016年分离的毒株CH/GXI09/2016亲缘关系最接近。由此可见,本研究所分离鉴定的2株毒株属于Senecavirus病毒属。VP1基因的原核表达试验。为了建立SVA的间接ELISA检测试剂盒,本研究将分离株SVA CH-GDBL1-2016的VP1基因进行原核表达,并成功表达,获得大小约为48KDa的融合蛋白,经SDS-PAGE染色证实该蛋白为VP1蛋白;经Western Blot检测,VP1蛋白具有良好的抗原性。在多方条件的优化下,表达出效果较好的融合蛋白。为后续建立间接ELISA试剂盒,提供原材料。综上所述,本研究分离到Senecavirus病毒属SVA广东毒株2株,同源性分析表明,较美国、哥伦比亚、巴西、泰国的流行株,更接近中国流行株CH/GXI09/2016;成功获得SVA的VP1重组蛋白,有较好抗原性,拟用于建立ELISA诊断方法。为外来新病SVA的诊断、防控研究提供关键材料和奠定了基础。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 孟含;马晓迪;Daniel Linhares;;塞内卡病毒A对新生仔猪死亡率的影响[J];国外畜牧学(猪与禽);2019年12期
2 张文华;Matthew Sturos;Fabio Vannucci;;提高猪的免疫力有助于净化塞内卡病毒A[J];国外畜牧学(猪与禽);2019年12期
3 韩浩月;陈权;Russ Daly;Steve Lawson;;更好的塞内卡病毒检测手段将提供更好的监测工具[J];国外畜牧学(猪与禽);2019年12期
4 孟霞;Guilherme Preis;;掌握塞内卡病毒A的流行病学[J];国外畜牧学(猪与禽);2019年12期
5 穆国冬;卢松岩;张忠湛;林翰;;吉林省塞内卡病毒流行情况监测预警分析[J];吉林畜牧兽医;2019年12期
6 刘存;刘畅;刘琪;王静;李秀博;崔尚金;梁琳;;A型猪塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断研究进展[J];养猪;2020年01期
7 熊杰;张昕彤;胡生富;陈富忠;魏春梅;;实时荧光RT-PCR检测塞内卡病毒[J];江西畜牧兽医杂志;2020年01期
8 李正宏;李乙江;;塞内卡病毒研究与防控[J];畜牧兽医科学(电子版);2020年06期
9 方静;赵明;;塞内卡病毒病的特征及防控概述[J];贵州畜牧兽医;2018年06期
10 唐彩琰;张配配;Raquel A.Leme;Alice F.Alfieri;Amauri A.Alfieri;;猪塞内卡病毒感染的最新研究进展[J];国外畜牧学(猪与禽);2019年02期
11 李天芝;于新友;;猪塞内卡病毒病的流行和防控[J];猪业科学;2019年02期
12 唐彩琰;张配配;Raquel A.Leme;Alice F.Alfieri;Amauri A.Alfieri;;猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续1)[J];国外畜牧学(猪与禽);2019年03期
13 唐彩琰;Raquel A.Leme;Alice F.Alfieri;Amauri A.Alfieri;;猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续2)[J];国外畜牧学(猪与禽);2019年04期
14 唐彩琰;张配配;Raquel A.Leme;Alice F.;Alfieri;Amauri A.Alfieri;;猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续3)[J];国外畜牧学(猪与禽);2019年05期
15 汤慧连;罗元华;郑四清;周根龙;罗鹏;蒋才智;;不可小觑的猪塞内卡病毒病[J];中国动物保健;2019年06期
16 李娇;祖立闯;李峰;沈志强;;警惕A型塞内卡病毒的流行[J];养猪;2019年03期
17 张传亮;;A型塞内卡病毒的流行、诊断与防控[J];中国畜牧兽医文摘;2018年06期
18 耿浩川;田津津;董壮丽;任灵肖;刘英群;;猪塞内卡病防制措施[J];北方牧业;2018年18期
19 高前;;猪A型塞内卡病毒的临床与流行特点[J];新农业;2018年23期
20 黄元;刘涛;陈锦良;王晓虎;陈晶;梁培新;黄武;向华;;阳江地区某猪场塞内卡病毒抗原和抗体的检测与分析[J];广东农业科学;2018年12期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 王会宝;董金杰;王超英;吕宏亮;;塞内卡病毒研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第六次学术研讨会论文集[C];2018年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 尚德君 中国人民政治协商会议长春市朝阳区委员会;西班牙行省时期罗马教育发展考察[N];中国社会科学报;2017年
2 梁捷;幸福与收入不相关[N];21世纪经济报道;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 钱苏红;塞内卡谷病毒分离鉴定及其3C蛋白酶拮抗干扰素产生的分子机制[D];华中农业大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 林秀银;塞内卡病毒广东株分离鉴定及全基因组序列分析与VP1蛋白原核表达[D];仲恺农业工程学院;2019年
2 王咏;塞内卡病毒A(SVA)VP1与宿主BAD互作激活线粒体凋亡通路的分子机制研究[D];中国农业科学院;2019年
3 李秀博;猪A型塞内卡病毒分离鉴定及ICR小鼠感染试验研究[D];黑龙江八一农垦大学;2019年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978