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《仲恺农业工程学院》 2019年
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hhdA对HPS外膜囊泡组分及主要生物学功能的影响

卞志标  
【摘要】:副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)能引起猪的革拉瑟氏病,临床表现为关节炎,脑膜炎和浆膜炎等症状,致死率较高,是目前国内外规模化猪场威胁最严重的细菌性传染病之一。抗生素是防治该菌的主要药物,由于近些年耐药菌株的不断增加,疫苗免疫成为防治该菌的主要方式,但是该菌血清型众多,且缺乏有效的交叉免疫保护,研发新型有效的副猪嗜血杆菌疫苗是解决问题的当务之急。外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMVs)是革兰氏阴性菌在生长阶段,由细菌向外周环境释放的微小囊泡,其中包括脂多糖、蛋白质、核酸、溶血素等。其成分不仅仅是引起病变的毒力因子,同时也具有良好的免疫原性,是极具潜力的新型疫苗抗原。我们前期的研究也证实OMVs具有良好免疫原性,同时也具有致炎作用。溶血素是副猪嗜血杆菌中潜在的毒素因子之一,它不仅存在于菌体上,也能够随OMVs分泌到菌体外,但是在溶血素对OMVs功能影响方面还未有报道。本试验选用血清型5型的强致病毒株H45菌株与其溶血素相关基因缺失株ΔhhdA(hemolysin of Haemophilus ducreyi)菌株为研究对象,然后分别将两者提取纯化得到OMVs,使用透射电镜对两者OMVs进行形态观察,并对OMVs的蛋白组分进行初步的比较分析。进一步使用OMVs作为免疫原对试验豚鼠进行滴鼻和注射接种,通过对试验豚鼠的组织切片观察和早期细胞因子的测定,分析hhdA基因缺失对OMVs致炎作用的影响。通过对豚鼠IgA抗体、IgG抗体以及IFN-γ和IL-8细胞因子的测定,分析hhdA基因缺失对OMVs免疫原性的影响。试验结果及结论:(1)hhdA基因缺失对OMVs的形态和蛋白组分无明显影响;(2)H45 OMVs能够诱导比ΔhhdAH45 OMVs更高水平的IL-1β和IFN-γ分泌,所以hhdA基因缺失能够降低OMVs的致炎反应;(3)H45 OMVs能够诱导比ΔhhdAH45 OMVs更高水平的IgG抗体反应,但是对IL-8、IFN-γ和IgA的分泌量无显著差异。所以hhdA基因缺失能够降低OMVs的体液免疫反应,但是在黏膜免疫和细胞免疫方面无明显影响。
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