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《宁波大学》 2011年
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胃癌患者外周血中微小RNA的分析及其临床意义

周辉  
【摘要】:目的 恶性肿瘤的复发和转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因,而血道转移是一种恶性肿瘤转移的重要方式。检测外周血中的肿瘤细胞对于监测癌症患者转移和指导治疗具有重要的参考价值,但是,缺乏理想的肿瘤标志物是影响其应用的一大难题。本课题组先期研究发现,微小RNA(microRNA,miRNA)异常表达于胃癌组织中,其中miR-421、miR-106a和miR-17等明显高表达于胃癌组织中。为此,本研究拟揭示这些miRNA的促癌机制,并探讨它们作为标志物用于检测循环胃癌细胞的可行性。 方法 1.采用脂质体把miRNA类似物导入正常胃黏膜上皮细胞和把miRNA抑制剂导入胃癌细胞中,以分别提高和降低细胞内相应miRNA的水平。 2. MTT方法和流式细胞术分别检测细胞生长情况和细胞周期。 3.蛋白质印迹技术检测miRNA抑制剂对周期相关蛋白表达的影响。 4.为建立裸鼠胃癌移植瘤模型,将转染了miR-106a和miR-421抑制剂的MGC-803胃癌细胞注射至裸鼠皮下,然后定期测量肿瘤的质量和体积。 5.收集90例胃癌患者和27正常人外周血标本,使用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测miR-106a和miR-17的水平,并构建受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线。 结果 1. miR-106a类似物促进正常胃黏膜上皮细胞GES-1的生长,而miR-106a抑制剂使MGC-803和SGC-7901胃癌细胞阻止在G_2/M期。 2.胃癌细胞转染miR-106a抑制剂后,周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent protein kinases,CDK)1和CDK2的表达都受到了抑制。 3.动物实验结果显示,降低胃癌细胞miR-106a和miR-421的表达显著地抑制肿瘤的生长。 4.胃癌患者外周血中miR-106a和miR-17的水平均显著高于正常对照。miR-106a、miR-17和二者联合应用的ROC曲线下面积(the area under the ROC curves,AUC)分别达到0.684(P = 0.0066)、0.743(P = 0.0001)和0.741(P = 0.0002),说明它们均有诊断价值;三者AUC的差异无统计学意义,则说明miR-106a和miR-17在检测循环胃癌细胞方面具有相似的价值。 结论 通过使用miRNA类似物和抑制剂分别增加正常胃黏膜上皮细胞和降低胃癌细胞中致癌miRNA的水平,经体内和体外机制研究,从正反两方面说明了miRNA在胃癌的发生和发展中发挥着重要的作用。进一步的临床标本分析,证明了检测外周血中的miRNA是一种发现胃癌患者循环癌细胞的有效方法。
【学位授予单位】:宁波大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R735.2

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