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《宁波大学》 2017年
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miR-219a-5p在甲基苯丙胺成瘾中的作用

潘俭  
【摘要】:目的:目前甲基苯丙胺(METH)滥用依然是全球性的公共健康问题。长期使用甲基苯丙胺会导致多种精神疾病,但甲基苯丙胺成瘾神经生物学机制仍未明确。本文从甲基苯丙胺成瘾中的microRNA入手,筛选出靶向中枢血管紧张素系统的microRNAs,通过调节microRNA来探究中枢血管紧张素系统(RAS)在甲基苯丙胺成瘾中的潜在作用。方法:1、将甲基苯丙胺静脉自身主动给药组(甲基苯丙胺主动组)、甲基苯丙胺静脉被动给药组(甲基苯丙胺被动组)和生理盐水静脉主动给药组(生理盐水组)的大鼠伏隔核进行microRNA microarray,找出异常表达的microRNA;基于GO分析与KEGG分析,对中枢血管经张素系统有关的microRNA进行筛选;2、通过微注射慢病毒在大鼠脑区-伏隔核中过表达miR-219a-5p,分别通过固定频率(FR)和累进频率(PR)来检验miR-219a-5p过表达后对大鼠强迫给药和给药动机的调控作用;3、通过微注射慢病毒在大鼠脑区-伏隔核中过表达miR-219a-5p,探索miR-219a-5p在甲基苯丙胺复吸中的调控作用;4、通过酶联免疫吸附测定法来测定醛固酮合成和分泌通路中血管紧张素II受体1(AT1)、磷脂酰肌醇磷脂酶(PLCβ)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)等蛋白在甲基苯丙胺自身给药动物中是否有显著变化;5、根据实验四的验证,对实验二和实验三中的大鼠伏隔核脑区,在miR-219a-5p过表达后,检测主要蛋白的表达变化。结果:1、基于甲基苯丙胺主动组和甲基苯丙胺被动组以及甲基苯丙胺主动组和生理盐水组分别进行比较,筛选出显著变化的靶向中枢血管紧张素系统的microRNAs,最后,根据相对表达倍数筛选出研究目标miR-219a-5p;2、miR-219a-5p过表达后,对于固定频率给药,在0.025mg/kg的剂量中,LV1-miR-219a-5p组与LV1CN组之间没有差异,而在0.05mg/kg、0.075mg/kg和0.1mg/kg中,LV1-miR-219a-5p组相对于LV1CN组给药次数显著下降。对于累进频率给药,在0.025mg/kg的剂量中,LV1-miR-219a-5p组与LV1CN组之间没有差异,而在0.05mg/kg、0.075mg/kg和0.1mg/kg中,LV1-miR-219a-5p组相对于LV1CN组给药次数显著下降;3、miR-219a-5p过表达后,无论是线索诱导还是药物诱导,LV1-miR-219a-5p组相对于LV1CN组有效鼻触数显著下降;4、通过酶联免疫吸附测定法(ELISA),AT1、PLCβ和CREB等蛋白表达水平在甲基苯丙胺成瘾中显著上升;5、通过免疫印迹法测定实验二和实验三中的大鼠伏隔核脑区AT1、PLCβ和CREB表达情况,可以发现LV1-miR-219a-5p组相对于LV1CN组蛋白的表达量显著下降。结论:我们的研究结果表明,大鼠伏隔核中的miR-219a-5p在中枢肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的重要作用,揭示了调控甲基苯丙胺成瘾的分子机制。
【学位授予单位】:宁波大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R749.64

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1 潘俭;miR-219a-5p在甲基苯丙胺成瘾中的作用[D];宁波大学;2017年
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