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《宁波大学》 2017年
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活性RhoA在紫杉醇诱导肾癌周期阻滞中的作用及机制研究

樊晓骁  
【摘要】:研究背景:肾细胞癌是肾实质来源的恶性肿瘤中最常见的类型,在成年人癌症疾患中约占2%~3%。目前肾癌的治疗以手术为主,其术后辅助治疗尚无统一标准。紫杉醇(Taxol)是一种新型的抗微管剂,能够促进微管(MT)蛋白聚集而稳定MT,从而抑制微管网络的动态重组,抑制肿瘤细胞增值,被用于进展性肾癌根治性手术后的辅助化疗,可使部分患者受益。研究发现,RhoA表达在多种肿瘤中明显增强,对肿瘤生长、增值、侵袭及转移等发生发展的多个方面具有调节作用。但在肾癌中,活性RhoA(GTP-RhoA)与细胞骨架结构的关系以及对细胞周期(cell cycle)的调控过程尚无相关报道。目的:探讨Taxol诱导MT改变对cell cycle和活性RhoA表达的影响。进一步探究MT改变,RhoA蛋白的分布及位置变化。通过破坏MT解聚,观察活性RhoA表达和细胞周期的变化;通过抑制活性RhoA,观察MT及cell cycle的变化。从而探究活性RhoA在Taxol诱导肾癌细胞骨架改变阻滞cell cycle过程中的意义。方法:以Taxol处理的肾癌细胞OS-RC-2细胞株为研究对象,用免疫荧光染色MT及RhoA蛋白,共聚焦显微镜观察MT变化及RhoA蛋白分布及位置变化。用Western-blot半定量测定RhoA蛋白及GTP-RhoA蛋白表达情况,用流式法对细胞的周期改变进行测定。实验所得数据以`X±SD表示,用SPSS 13.0版本分析数据,多组间比较采用one-way ANOVA,组间两两比较采用LSD和SNK检验。P0.05具有统计学意义结果:1.Taxol诱导OS-RC-2细胞周期阻滞在G2/M期,GTP-RhoA表达显著上调,且表现为时间正相关。2.Taxol处理诱导OS-RC-2细胞MT聚合,形成特异性的束状结构,包绕在核周。3.活性RhoA伴随着MT聚合、解聚而重新分布,但始终与MT位置保持相对一致,具有“同位效应”。4.MT解聚剂Col破坏Taxol诱导的MT特异性结构,逆转了细胞G2/M期阻滞,使活性RhoA表达下调。5.C3转移酶抑制RhoA活性后,部分逆转了Taxol诱导的细胞周期阻滞,但对聚合的MT结构无明显影响。结论:Taxol诱导MT聚合形成特异性的束状环,引起OS-RC-2细胞内RhoA的活性增强。这一过程对Taxol治疗肾癌中引起细胞周期阻滞,抑制肿瘤增值有重要作用。但反之活性RhoA对已聚合的MT无明显调节作用。意义:通过研究OS-RC-2细胞内MT、活性RhoA以及细胞周期三者间的关系,阐明了活性RhoA在MT调控肾癌细胞周期中的相关机制及重要作用。在未来临床应用中,Rho A对调节Taxol治疗肾癌疗效具有潜在价值。
【学位授予单位】:宁波大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R737.11

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