收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

微藻、草莓和小麦的超低温保存条件的建立与DNA直接转化探究

卢杰  
【摘要】:超低温保存技术不论是在植物种质保存还是脱毒等方面,都具有广阔的应用前景;高效简单的遗传转化体系也一直是植物研究领域的一个重要方向。本研究用微藻、草莓和小麦为材料,在对它们超低温保存条件研究基础上,进行DNA直接转化的尝试。通过分析材料的预处理,高渗溶液组分和脱水保护等环节条件,找到了合适的超低温处理方法,然后对培养条件、DNA包裹、抗生素浓度筛选等一系列转化条件进行了研究,成功的筛选到了抗性材料。得到结果如下:1.本次实验所确定的小球藻的最佳超低温保存体系:藻群体密度OD_(680)在0.800-1.100时,用含有0.5mol/L甘油和0.4mo1/L蔗糖的预处理液在室温处理20min;装载液(30%蔗糖+15%乙二醇+5%二甲基亚砜+BG-11液体培养基)0℃处理1h;液氮中处理90min,40℃水浴快速解冻,0.4mol/L蔗糖溶液和1.2mol/L的蔗糖溶液各洗涤5min。成活率在55%以上。DNA直接转化微藻合适条件:微藻中加入最终浓度为25mM CaCl_2、15%PEG4000、50μl的质粒(30ng/μl)或线性PCR产物、0.198mol/L蔗糖所组成的混合液,在冰上放置30min,转化效率可达到13.63%。2.草莓茎尖超低温保存条件为:传代培养2周后,4℃暗培养16h,25℃光下8h,冷驯化两周;大小约1-2mm草莓茎尖接种到预培养基(MS+2mol/L甘油+0.3mol/L蔗糖+8g/L琼脂),4℃冷适应3d;室温下装载液(MS+2mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖)处理20min,冰上在PVS_2溶液中处理60min;液氮中过夜;40℃快速解冻;洗涤和恢复培养后,成活率可达到27.36%。转化草莓茎尖条件为:茎尖中加入40μl的100mM CaCl_2、60%PEG4000混合,再加入40μl质粒(30ng/μl)存液混合;使溶液浸过茎尖,用枪头拨动,冰中放置30min,摇动两次,室温放置10min。可以在筛选培养基上长出小植株。3.小麦茎尖超低温保存条件为:切取1.5-2.5mm茎尖,加入冷冻保护剂(6%蔗糖+16%DMSO),4℃冰箱存放3h;放入0℃,停留存放30min;-7℃,停留存放1h;-20℃,停留存放1h;-80℃冰箱,停留存放1h,液氮中过夜;从液氮中取出材料,40℃快速解冻。在第15d其成活率可达到62.83%。DNA直接转化小麦茎尖:小麦茎尖中按体积比1:1:1分别加入75μl100mM CaCl_2、60%PEG4000、质粒(30ng/μl)为混合液。第15d其转化后小麦茎尖的成活率可达到1.00%,通过定点插入进行转化成活率可达到1.33%。本论文的研究结果对于其它植物的超低温保存和遗传转化具有一定的借鉴意义。不过由于草莓和小麦只是获得了阳性植株而且效率很低,需要以后对影响因素进行更深入研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前14条
1 段玉佩;;轻松提取草莓DNA[J];知识就是力量;2018年04期
2 张璐璐;樊晨;樊哲;高庆玉;;改良CTAB法提取草莓基因组DNA[J];现代园艺;2014年11期
3 张莉;谷辉辉;贾峰;张广乐;王金水;;草莓解除休眠过程中DNA甲基化变化研究[J];河南农业科学;2012年12期
4 韩柏明;赵恺;李贺;高秀岩;张志宏;;组织培养导致的草莓DNA甲基化变异[J];植物生理学通讯;2010年08期
5 李慧;丛郁;王宏伟;常有宏;盛宝龙;蔺经;王中华;;镉对草莓幼苗根尖氧化系统和基因组DNA损伤的影响[J];园艺学报;2010年05期
6 潘远健;金刚;谢振华;代建国;王妍;栾崇林;于化泓;;一种快速提取微藻完整叶绿体及其DNA的方法[J];江苏农业科学;2016年02期
7 刘敏;;基于科学思维的“DNA是主要的遗传物质”教学设计[J];教育观察;2019年30期
8 吴松芳;陆宜隽;;通过调节蛋白酶K消化时长优化DNA提取方法[J];生物化工;2019年06期
9 胡小婕;秦超;林志鹏;高彦征;;有毒有机物影响DNA酶解和抗生素抗性基因横向迁移[J];农业环境科学学报;2020年01期
10 李伟;其其格;黄旭;岳阳;尹靖琨;王瑞俭;;蓝莓栽培品种的DNA条形码[J];林业科学;2019年12期
11 康勇;刘杨;杨云;冯剑;郑希龙;魏建和;;应用于多个沉香属物种鉴定的DNA条形码序列筛选[J];中国药学杂志;2019年23期
12 董葭;;抗核抗体和抗双链DNA检测在系统性红斑狼疮诊断中的意义[J];中国医疗器械信息;2019年23期
13 张逸;谢少洵;余钰琨;杨泽;陈超;;幽门螺旋杆菌诱导的胃腺癌DNA甲基化基因修饰研究进展[J];中国老年保健医学;2019年06期
14 曹婧;;DNA分析技术在法医物证鉴定中的应用[J];法制博览;2020年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;这名男婴带有3个人的DNA,引起了全世界科学家的热议[A];《科学与现代化》2020年第一季度[C];2020年
2 靖博彬;;臭虫基因组DNA提取方法研究[A];2019年铁路卫生防疫学术年会论文集[C];2019年
3 张茂;;心脏DNA损伤和心力衰竭的机制研究[A];2019中国生理学会学术年会暨张锡钧基金第十五届全国青年优秀生理学学术论文交流会及第十三届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2019年
4 张晓明;晋婷婷;邓丽萍;汪超;张煜华;陈向东;;DNA给体细胞对细菌自然遗传转化过程的促进作用[A];2018中国遗传学会第十次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2018年
5 韩晓静;林牧;陶雪;龚亚东;唐竹;陈云华;马庆庆;;联合检测痰液结核杆菌DNA及RNA在肺结核诊断中的应用[A];第二届中国临床分子诊断大会论文集[C];2019年
6 刘广三;汪枫;;刑事DNA采样和分析中的法理思考[A];刑事法治发展研究报告(2014——2015年卷)[C];2017年
7 张边江;杨一帆;陈家旭;骆娟;;核心素养视阈下的“DNA的粗提取和鉴定”实验创新与科学思维培养[A];2019年江苏省教育学会学术年会论文集[C];2019年
8 刘冰;王旭;赵梦真;晁洁;樊春海;;基于DNA折纸术的纳米金棒精密修饰[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第二十八分会:化学生物学[C];2016年
9 刘冬生;李闯;程恩隽;邢永政;金娟;;DNA超分子水凝胶及其应用[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第二十四分会:超分子组装与软物质材料[C];2016年
10 Kaiying Cheng;Hong Xu;Xuanyi Chen;Liangyan Wang;Bing Tian;Ye Zhao;Yuejin Hua;;Structural basis for DNA 5′-end resection by RecJ[A];第五届中国结构生物学学术讨论会摘要集[C];2016年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 马艳丽;功能化DNA修饰单体的设计合成及其在生物分析中的应用[D];厦门大学;2018年
2 王路;利用DNA条形码与形态相结合的方法对亚历山大塔玛复合种和夜光藻的内共生绿藻进行系统分类学研究[D];厦门大学;2017年
3 郑心如;DNA双链断裂修复调控蛋白筛选及调控机制研究[D];厦门大学;2017年
4 李根;转录因子与DNA特异性识别机制的分子动力学模拟研究[D];华中农业大学;2019年
5 别丽华;bZIP转录因子与DNA相互作用中甲基化调控机制的分子模拟[D];华中农业大学;2018年
6 刘雨双;基于DNA链置换反应动力学和GFET对DNA甲基化的检测[D];内蒙古农业大学;2019年
7 刘轲;基于DNA纳米技术与原子力显微镜高分辨成像的精准基因检测研究与应用[D];上海交通大学;2018年
8 张保柱;DNA适体基荧光金属纳米簇对金属离子及生物分子的turn-on检测[D];山西大学;2019年
9 李锦;基于螺吡喃分子开关的G—四链体DNA荧光探针的构建与应用研究[D];西北大学;2019年
10 郭斌;基于DNA自组装纳米结构的生物传感新方法研究[D];重庆医科大学;2019年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卢杰;微藻、草莓和小麦的超低温保存条件的建立与DNA直接转化探究[D];河北经贸大学;2020年
2 周玉洁;基于DNA纳米机器和纳米材料的生物传感新方法[D];湖南大学;2019年
3 刘雅思;广东省珍稀植物DNA条形码与分子鉴定[D];仲恺农业工程学院;2019年
4 汪改英;基于DNA和限制酶的逻辑计算模型的研究[D];厦门大学;2019年
5 闫晓珊;生物计算中病毒机模型和DNA逻辑电路的研究[D];厦门大学;2019年
6 肖代琴;以DNA origami为模板的氧化铪纳米粒子的制备[D];厦门大学;2019年
7 王静文;酶辅助构建DNA纳米结构及其在无机纳米材料合成中的应用研究[D];厦门大学;2019年
8 高铭暄;变构核酸适体探针在DNA激酶—磷酸酶高灵敏检测中的应用[D];厦门大学;2019年
9 郑宇钒;法医DNA的快速分型研究[D];厦门大学;2019年
10 杨珍琴;DNA计算模型在NP-完全问题中的应用[D];安徽理工大学;2019年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 叶青;提取草莓DNA! 到广州生物院体验当科学家[N];科技日报;2019年
2 本报见习记者 边慧;“垃圾DNA”或是编码DNA的“卫士”[N];中国科学报;2016年
3 黄辛;DNA骨架硫修饰研究又获新成果[N];科学时报;2011年
4 本报记者 辛明;邓亚军:灾难现场的DNA斗士[N];中国青年报;2011年
5 本报记者 欧阳晓红 韩宋辉;“可怕”的友邦DNA 267亿港元净利从何而来[N];经济观察报;2015年
6 本报记者 赵路;脉动的数字DNA[N];中国科学报;2016年
7 宗华;“垃圾DNA”决定蛇鼠长出多少肋骨[N];中国科学报;2016年
8 实习记者 于紫月;寻找治癌“灵丹妙药” 染色体外环状DNA或是关键所在[N];科技日报;2020年
9 记者 张家伟;英研究称可基于DNA评估预期寿命[N];新华每日电讯;2019年
10 通讯员 王彤 顾镔彬 融媒体记者 李都;江北新区:“数据DNA计划”发布[N];南京日报;2020年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978