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《南昌大学》 2011年
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池蝶蚌亲环蛋白A(CyPA)基因特异性表达及多克隆抗体制备

徐灵  
【摘要】:池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)原产于日本滋贺县琵琶湖,是日本特有的淡水贝类养殖品种。它隶属于软体动物门、瓣鳃纲、蚌科、与三角帆蚌一样为帆蚌属。与其他淡水珍珠贝类相较,池蝶蚌拥有更好的抗病能力和育珠性能。 亲环蛋白(Cyclophilins CyPs)是一种广泛存在于各种生物中的组成型蛋白,具有多种生物学功能。其最重要的两个生物学功能:一是具有肽基脯氨酸顺/反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerases, PPIase)活性能催化蛋白质折叠和转运过程并起着分子伴侣作用;二是具有免疫抑制功能,在体内能介导T细胞进行免疫抑制。CyPA是第一个被发现的CyP家族蛋白。最新研究表明CyPA可能在某些生物中具有免疫应激功能。本研究依据从嗜水气单胞杆菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库里获得了池蝶蚌CyPA基因(以下简称HsCypA) cDNA全长,对CypA基因在池蝶蚌中的表达特征和是否存在免疫应激功能进行初步的探索,为研究CyPA基因在淡水贝类中的功能打下基础,为研究无脊椎动物的免疫机制提供一个新的方向。主要研究内容如下: 1、利用Real-Time PCR分析了池蝶蚌CyPA基因mRNA在池蝶蚌血液、心、鳃、肠、肝、肾、斧足、性腺等组织及各年龄血淋巴细胞中的表达情况,结果显示HsCyPA基因在各组织中均有表达,其中在肝脏和性腺中表达量最高,在肠和血淋巴中最低;在各年龄中仅在幼龄中的表达量略高于成年蚌,这可能是幼龄蚌血淋巴细胞中的蛋白质合成更加丰富的缘故。 2、利用Real-Time PCR技术对嗜水气单胞杆菌诱导刺激后池蝶蚌肝脏、性腺和血液中CyPA基因mRNA的表达量进行了分析,发现在肝脏和性腺中CyPA在诱导4h出现一个表达峰,8h后开始下降,这表明了HsCyPA基因参与了池蝶蚌的免疫系统的应激反应。 3、利用PET-32a(+)表达载体,依据HsCyPA基因cDNA的序列,构建了含有完整开放阅读框(ORF)的表达载体并进行原核表达。经优化诱导条件后,亲和层析获得了含量较高的上清可溶性蛋白。糜蛋白偶联法显示HsCyPA蛋白具有PPLase酶活性。ELISA间接效价测定显示免疫大白兔所获得的多克隆抗体的效价为1:640000。这为进一步研究HsCyPA蛋白的功能提供了实验基础。本研究对CyPA基因在池蝶蚌免疫系统中承担的功能做了初步的研究,丰富了贝类免疫系统中的防御机制,为无脊椎动物免疫学的研究提供了一定的理论依据。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S917.4

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 何书豪;池蝶蚌铁蛋白基因的特征与表达分析[D];南昌大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 余颖;洪一江;邱齐骏;王军花;徐毛喜;李云娟;;池蝶蚌胚胎发育与繁殖季节性腺的观察[J];动物学杂志;2008年03期
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10 李芳秋,赵权,武建国,单祥年;重组人亲环素A的表达、纯化及活性测定[J];微生物学报;1998年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 余颖;池蝶蚌性腺、生殖细胞发生及胚胎发育观察[D];南昌大学;2008年
2 郭红军;池蝶蚌与三角帆蚌抗菌酶活性及免疫相关基因表达特性的研究[D];南昌大学;2008年
3 汪勇飞;池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli)F1代家系选育与生长性状的遗传分析[D];南昌大学;2010年
4 谢凯;嗜水气单胞菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库的构建及亲环蛋白基因的序列分析[D];南昌大学;2010年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 韩庆;杨品红;黎伟;王文彬;罗玉双;;洞庭湖区引种条件下池蝶蚌胚胎发育的研究[J];安徽农业科学;2011年28期
2 徐钢春;顾若波;闻海波;华丹;聂川;;环境胁迫对河蚬溶菌酶和超氧化物歧化酶活性的影响[J];安徽农业大学学报;2007年01期
3 张根芳;许式见;方爱萍;;背瘤丽蚌胚胎发育的初步研究[J];动物学杂志;2009年04期
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8 张爱菊;朱俊杰;原居林;叶金云;;泼洒石灰水对鱼蚌混养水体中浮游生物群落结构的影响[J];淡水渔业;2011年05期
9 刘晓云;谭金山;包振民;谢嘉琳;;刺参体腔细胞的超微结构观察[J];电子显微学报;2005年06期
10 郭芳;李艳军;张新宇;吴莉;孙杰;;棉花亲环素基因(GhCYP1)克隆及在干旱胁迫下的表达分析[J];分子植物育种;2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 沈文英;李卫芬;徐正海;;益生菌对三角帆蚌生长和免疫酶活性的影响[A];全国畜禽和水产养殖污染监测与控制治理技术交流研讨会论文集[C];2008年
2 黄立志;张纯颖;张艳;李志坤;吴立强;王省芬;张桂寅;马峙英;;棉花亲环素GhCyP蛋白纯化及黄萎病菌抑制活性分析[A];中国棉花学会2012年年会暨第八次代表大会论文汇编[C];2012年
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1 王猛;马尾松抑制消减文库的构建及抗病性相关基因的克隆[D];中南林业科技大学;2010年
2 王臻;拟南芥与盐芥TOR的功能研究[D];山东师范大学;2010年
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7 孙洪波;低温胁迫对‘粗枝’大叶黄杨生理特性的影响及冷诱导基因的分离[D];中国农业大学;2004年
8 刘志鸿;海洋双壳贝类的免疫特性及调节[D];中国海洋大学;2004年
9 苏建国;栉孔扇贝两种模式识别受体基因的克隆与表达的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
10 邱丽梅;栉孔扇贝(Chlamys farreri)Toll样受体及其信号传递相关基因的克隆与表达[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
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1 林巧惠;池碟蚌线粒体全基因组序列分析[D];南昌大学;2010年
2 王保明;油茶亲环素、钙调素基因的cDNA克隆及亲环素基因的原核表达[D];中南林业科技大学;2008年
3 孙文婷;蜡梅亲环素基因的克隆与功能初步分析[D];西南大学;2011年
4 张志榜;猪流行性腹泻病毒膜蛋白和核蛋白抗原表位的鉴定[D];中国农业科学院;2011年
5 姜顺日;孔雀草试管开花及蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2011年
6 杨细兰;褶纹冠蚌过氧化氢酶基因克隆、原核表达及酶活性分析[D];南昌大学;2011年
7 徐欢欢;褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表达及蛋白性质研究[D];南昌大学;2011年
8 陆慧贤;水环境镉对缢蛏毒理学效应的研究[D];宁波大学;2011年
9 崔立娇;星斑川鲽(Platichthys Stellatus)幼鱼对锌的营养需求研究[D];上海海洋大学;2011年
10 郝莹莹;三种环境因子对三角帆蚌外套膜Ca~(2+)代谢和ALP基因表达的影响[D];上海海洋大学;2011年
【同被引文献】
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1 南京柱;李娟;李秀娟;田亚平;;血清铁蛋白检测在心脑血管疾病与代谢性疾病中的临床意义[J];标记免疫分析与临床;2011年03期
2 宋伟;钟小兰;;血清铁蛋白在早期糖尿病肾病人群的诊断价值[J];吉林医学;2011年18期
3 徐毛喜;邱齐骏;孙小兵;罗洁;胡火庚;洪一江;;池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)与三角帆蚌(H.cumingii)育珠生产对比研究[J];江西水产科技;2005年04期
4 王静,洪一江,王军花,徐毛喜;不同年龄池蝶蚌(贝)与三角帆蚌同工酶的比较[J];科学技术与工程;2005年04期
5 洪一江;余颖;郭红军;汪勇飞;邱齐骏;徐毛喜;戴银根;;池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli)血淋巴的抗菌力、溶菌酶和酚氧化酶活力[J];南昌大学学报(理科版);2008年01期
6 李云娟;盛军庆;王军花;王芳;戴银根;洪一江;;池蝶蚌外套膜的组织学观察[J];南昌大学学报(理科版);2009年03期
7 王滨花;吴娣;洪一江;辜清;;池蝶蚌鳃的显微结构观察[J];南昌大学学报(理科版);2010年06期
8 罗洁;盛军庆;邱齐峻;王军花;徐毛喜;戴银根;洪一江;;人工选育池蝶蚌的EST和MDH同工酶分析[J];水生态学杂志;2008年06期
9 周永灿,潘金培;贝类细胞和体液的防御机制研究进展[J];水产学报;1997年04期
10 郭红军;罗洁;洪一江;邱齐骏;余颖;徐毛喜;王军花;;人工选育池蝶蚌的生长及不同世代遗传分析[J];水生生物学报;2008年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 汪勇飞;池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli)F1代家系选育与生长性状的遗传分析[D];南昌大学;2010年
2 邹青青;池蝶蚌性腺相关蛋白及其理化性质研究[D];南昌大学;2010年
【二级参考文献】
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10 余颖;洪一江;邱齐骏;王军花;徐毛喜;李云娟;;池蝶蚌胚胎发育与繁殖季节性腺的观察[J];动物学杂志;2008年03期
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1 马洪明;栉孔扇贝血细胞形态学研究和抗病功能基因的克隆[D];中国海洋大学;2004年
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3 郭磊;池蝶蚌血细胞类型及吞噬活性的研究[D];南昌大学;2008年
4 余颖;池蝶蚌性腺、生殖细胞发生及胚胎发育观察[D];南昌大学;2008年
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8 罗长发;;池蝶蚌手术蚌速生培育养殖技术初报[J];江西水产科技;2008年04期
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10 雷善辉;农业部推广品种——池蝶蚌的人工繁育[J];北京水产;2005年04期
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1 林巧惠;曾柳根;盛军庆;王军花;洪一江;;池蝶蚌线粒体基因组全序列分析[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
2 盛军庆;郭磊;王军花;洪一江;;池蝶蚌血细胞吞噬活性的研究[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
3 徐灵;曾柳根;王军花;盛军庆;洪一江;;池蝶蚌亲环蛋白A(cyclophilinA)的表达分析[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
4 李希;汪勇飞;邱齐骏;盛军庆;王军花;徐毛喜;洪一江;;池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli) F1代家系的初步选育[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
5 刘芳兰;林巧惠;曾柳根;洪一江;;池蝶蚌线粒体DNA-COⅢ基因的克隆与分析[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
6 王丽娜;张磊;倪迎冬;杨晓静;陈杰;赵茹茜;;断奶前后仔猪小肠Proglucagon mRNA的时空特异性表达[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
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8 赵卓;东北四平地区蝗虫配子发生及原癌基因c-kit特异性表达的生殖生态学研究[D];陕西师范大学;2005年
9 Hubdar Ali Kaler;鸡输卵管特异性表达tPA和leptin的研究[D];南京农业大学;2011年
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6 汪勇飞;池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli)F1代家系选育与生长性状的遗传分析[D];南昌大学;2010年
7 李希;池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)家系生长与育珠性状分析[D];南昌大学;2012年
8 罗颖;池蝶蚌精子活力及秋冬季节育儿囊胚胎生成的研究[D];南昌大学;2013年
9 余颖;池蝶蚌性腺、生殖细胞发生及胚胎发育观察[D];南昌大学;2008年
10 袁晓泉;池蝶蚌与三角帆蚌育珠性能比较研究[D];华中农业大学;2008年
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