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《南昌大学》 2005年
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利用酿酒酵母生物合成谷胱甘肽及其分离纯化的初步研究

谢雷波  
【摘要】:谷胱甘肽是一种重要的生物活性物质,不仅广泛应用于医药、生物等领域,而且作为食品添加剂具有广泛的应用前景。利用微生物细胞进行生物合成是其主要生产方式。 为进一步提高酵母细胞生物合成谷胱甘肽的能力,选用一株具有较高谷胱甘肽合成活性的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae TB6,结合酵母细胞酶促合成GSH的活性测试,通过单因素试验和正交试验研究培养基组成对细胞生长及谷胱甘肽合成酶系活性的影响。在优化培养基组成条件下,酵母细胞生物量及谷胱甘肽合成酶系活性均得到提高,摇瓶试验中酶活力稳定在9.02mg(GSH)/克湿细胞,30L发酵罐中酶活力亦高达8.56 mg(GSH)/克湿细胞。 应用卡拉胶与魔芋粉混合载体固定高活力的酵母细胞,催化合成谷胱甘肽。并对固定化细胞条件和固定化细胞生物合成的反应条件进行初步探索。实验结果表明:反应液pH值7,反应温度37℃,磷酸盐缓冲液0.15mol/L的条件下,固定化细胞具有较高的GSH合成酶活力。 对生物合成反应液中谷胱甘肽的分离作了初步研究,考察了不同pH溶液中还原型谷胱甘肽的氧化情况。并对离子交换法提取谷胱甘肽的提取条件进行了初步研究,确定了提取工艺条件:上柱最适pH为3.0,洗脱用HCl浓度为1mol/L,洗脱速度为30ml/min。 在论文的实验研究过程中,为满足普通实验室的需要,工作中探索建立了一种快速简便的分光光度分析法,适用于生物酶催化合成反应溶液中与半胱氨酸共存的还原型谷胱甘肽含量测定。样品在室温,碱性条件下与3%甲醛反应3min后,产生干扰作用的半胱氨酸可被遮蔽,再利用铜(Ⅱ)-新铜试剂对GSH进行显色定量,在GSH0-30ug/L浓度范围内回收率和准确性均符合一般分析的要求。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:TQ464.7

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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2 许超群;四溴联苯醚(BDE-47)对菲律宾蛤仔解毒代谢酶基因表达与毒性效应的研究[D];中国海洋大学;2010年
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【同被引文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【二级引证文献】
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【相似文献】
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9 冮洁;卜红宇;;氧应力和前体氨基酸对酿酒酵母合成谷胱甘肽的影响[J];食品科学;2009年09期
10 郑丽雪;王立梅;梅艳珍;齐斌;;响应面法优化酿酒酵母谷胱甘肽的提取条件[J];食品科学;2010年10期
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7 顾雪冬;大脑喜欢“吃”什么[N];中国医药报;2002年
8 景文;国产还原型谷胱甘肽滴眼液“天亿”登场[N];医药经济报;2005年
9 瓮晓梅;玉米是金[N];大众科技报;2001年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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8 蔡德雷;用多项生物标志物评价家用洗涤剂对小鼠肝脏解毒系统和抗氧化系统的早期影响[D];浙江大学;2003年
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