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黄曲霉毒素B_1间接竞争ELISA检测方法的建立与单克隆抗体免疫亲和柱的初步研制

江湖  
【摘要】:黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)是由某些真菌菌株产生的次生代谢产物。由于其具有极强的毒性、致癌性以及在自然界存在的普遍性,许多国家规定了其在各类粮食、食品和饲料中的限量标准。在食物中要避免AFB_1含量超标,除了在农作物种植、储存、加工等各环节科学作业外,最有效的方法是加强对整个操作环节的检测监控,及时发现和剔除受污染的产品,防止AFB_1含量超标的产品进入人类食物链。因此研究准确、灵敏、快速的AFB_1检测方法具有重要意义。 本研究主要内容包括:AFB_1人工抗原的制备,AFB_1间接竞争ELISA检测方法的建立,以及AFB_1单克隆抗体免疫亲和柱的研制。 在AFB_1人工抗原制备的第一步肟化反应中,用室温肟化法代替传统的加热回流法,使肟化率达到95%;在第二步EDC法制备AFB_1肟化物与载体蛋白的偶联物时,采用修饰的牛血清白蛋白(M-BSA),避免了EDC引起的蛋白质自身交联问题。并在制备过程中通过TLC与ELISA方法对反应进行监控,确定了最佳的肟化反应时间与偶联反应时间,并就AFB_1与M-BSA的起始摩尔比对偶联产物中两物质摩尔比的影响进行了实验。结果确定了25℃肟化反应24h,偶联反应24h,AFB_1与M-BSA的起始摩尔比30:1的反应条件,得到偶联比为5:1的AFB_1人工抗原。 在AFB_1间接竞争ELISA检测方法的建立过程中,对包被条件、封闭条件、抗原抗体浓度、甲醇含量以及竞争反应模式等因素进行了


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