同工酶技术在粉螨分类中的应用（蜱螨亚纲：粉螨总科）
【摘要】：本文以五种粉螨为实验材料,辅以普通肉食螨和桔全爪螨为对比,采用垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对常见同工酶EST、MDH、AMY、ADH、CAT等进行比较研究。实验探讨了粉螨不同样品匀浆液同工酶比较、不同样品浓度同工酶比较、不同饥饿状况下粉螨同工酶比较、不同种类粉螨同工酶比较、同种粉螨不同发育时期同工酶比较、不同地域粉螨同工酶比较。实验结果表明:使用pH7.4的0.01M的磷酸缓冲液制备样品实验效果最佳;粉螨取样时,通常采用样品与匀浆液体积比1:10浓度配比,低于此浓度则容易造成酶带缺失;粉螨制样时,饥饿对实验效果影响不明显,通常无须饥饿处理样品;不同种类间的粉螨酶带具有多样性,存在不同程度的相似相异性,为粉螨的分类鉴定提供了新的证据,EST-21,MDH-7,8,9,10,12,13,18是粉螨总科的特征谱带,控制着其特有的性状,粉螨科中的腐食酪螨与奥氏嗜木螨、椭圆食粉螨亲缘关系较奥氏嗜木螨与椭圆食粉螨间的更近,推测奥氏嗜木螨与椭圆食粉螨是由食酪螨属分化出来的,CAT酶谱反映了四种粉螨的耐药性的差异,AMY酶谱清晰度不够,分离不甚理想,科属种间的差异以及遗传距离与形态分类基本吻合;同种粉螨不同时期的同工酶酶带基本相同,为此种粉螨的特征谱带,但各酶带活性各有不同,同时也有部分酶带是各个时期所独有的,表明采用幼螨进行种类鉴定的可行性,为分析各发育阶段生理差异提供了依据;不同地域粉螨酶谱没有出现明显的差异。
【关键词】：粉螨 同工酶 分类 聚丙烯酰胺凝胶电泳 【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：Q969.91
【目录】：
- 摘要3-4
- ABSTRACT4-7
- 1、前言7-18
- 1.1 课题的提出7-8
- 1.2 同工酶技术在昆虫分类学上的应用8-12
- 1.3 同工酶技术在螨类分类学上的应用12-17
- 1.3.1 同工酶在螨类分类和物种鉴定中的研究12-13
- 1.3.2 同工酶在螨类亲缘关系鉴定和遗传进化中的研究13
- 1.3.3 同工酶在螨类个体发育和滞育中的研究13-14
- 1.3.4 同工酶在螨类抗性中的研究14-15
- 1.3.5 同工酶在螨类基因座位多态性中的研究15-16
- 1.3.6 同工酶在螨类区域性和生物指示中的研究16-17
- 1.4 课题研究的目的、意义和研究内容17-18
- 2、材料与方法18-26
- 2.1 实验材料18
- 2.2 实验方法18-26
- 2.2.1 PAGE的基本原理18-20
- 2.2.2 仪器和试剂20
- 2.2.3 实验步骤20-22
- 2.2.4 粉螨各种同工酶制胶及染色方法22-26
- 3、实验结果与分析26-47
- 3.1 不同匀浆缓冲液的同工酶比较研究26-27
- 3.2 样品浓度的确定27-28
- 3.3 材料饥饿的处理28
- 3.4 同工酶与粉螨种类的鉴定28-40
- 3.4.1 五种粉螨酯酶同工酶比较研究28-32
- 3.4.2 五种粉螨苹果酸脱氢酶同工酶比较研究32-35
- 3.4.3 四种粉螨过氧化氢酶(CAT)比较研究35-37
- 3.4.4 四种粉螨淀粉酶(AMY)比较研究37-38
- 3.4.5 四种粉螨乙醇脱氢酶(ADH)比较研究38-40
- 3.5 粉螨不同虫态同工酶比较40-45
- 3.5.1 椭圆食粉螨各虫态同工酶比较40-43
- 3.5.1.1 椭圆食粉螨各虫态EST电泳40-41
- 3.5.1.2 椭圆食粉螨各虫态MDH电泳41-43
- 3.5.2 腐食酪螨各虫态同工酶研究43-45
- 3.5.2.1 腐食酪螨各虫态EST电泳43-44
- 3.5.2.2 腐食酪螨各虫态MDH电泳44-45
- 3.6 不同地域粉螨同工酶比较研究45-47
- 4、小结与讨论47-52
- 5、参考文献52-55
- 6、致谢55
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