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《南昌大学》 2006年
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DON无毒phage-ELISA检测方法的建立及展青霉素免疫学检测初探

邓舜洲  
【摘要】:脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)和展青霉素(Patulin,PAT)都属于真菌毒素。脱氧雪腐镰刀菌烯醇是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物—单端孢霉烯族化合物中的一种,主要污染小麦、玉米等谷物及其制品,温带地区的谷物污染严重,在收割季节如雨量偏多则DON的污染更为严重。脱氧雪腐镰刀菌烯醇不仅具有致动物呕吐等急性毒素性、生殖毒性、免疫毒性,而且与人的癌症相关。展青霉素是由某些真菌(扩张青霉、展青霉、棒型青霉等)产生的一种次级代谢产物,主要污染苹果和山楂及其制品,具有肾脏和消化系统毒性、致癌性、致畸、致突变作用和免疫毒性。因此,及时对食品及其原料中的真菌毒素进行检测,防止真菌毒素(如DON、PAT)污染的食品进入食物链,是预防真菌毒素对人和动物带来危害的主要手段。虽然薄层层析法(TLC)、高效液相法(HPLC)、气相色谱法(GC)已应用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇和展青霉素的定量检测,但这些检测方法比较昂贵和耗时,因为检测过程中需要使用大量的有机溶剂、贵重的设备和繁杂的样品净化。免疫学检测方法具有高选择性、灵敏、快速、一次可检测多个样品、对样品的纯度要求不高、操作简单等特点,特别适合于大批量样本的检测。为建立DON的免疫学检测方法,本研究在制备DON人工抗原的基础上,研制抗DON单克隆抗体;利用抗DON单克隆抗体建立DON酶联免疫检测方法(ELISA);制备DON单克隆抗体免疫亲和层析柱,应用于HPLC等检测中样品的净化处理;从噬菌体随机七肽库中淘选DON的模拟表位,并以之替代DON人工抗原建立间接竞争ELISA方法。本研究还进行了抗展青霉素多(单)克隆抗体的初步研究,并合成了一种展青霉素的结构类似物。结果如下。 1.采用N,N’-羰基二咪唑(CDI)法将脱氧雪腐镰刀菌烯醇分子与载体蛋白MBSA偶联制备人工抗原,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到一株能稳定分泌抗DON单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为12D1),小鼠单抗腹水的效价达1∶5.12×10~5,抗体亚类为IgG2a。单克隆抗体12D1与15-AC-DON、3-AC-DON、雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和桔霉素的交叉反应率分别为400%、1.6%、4.3%、<1%和<0.3%。应用单克隆抗体12D1建立的DON间接竞争ELISA
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:TS207

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