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《南昌大学》 2006年
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应用表皮干细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤及其移植实验研究

陈刚泉  
【摘要】:创(烧)伤等多种原因造成的皮肤大面积缺损可导致严重的机体功能障碍甚至危及生命。目前修复皮肤缺损的方法主要是用自体皮肤移植。但在治疗大面积深度烧伤等皮肤缺损时,由于缺乏供皮区,皮源不足,往往给创面覆盖造成困难。为反复供皮的需要,目前临床应用的植皮术,诸如邮票状植皮术、网状皮肤植皮术、异体皮嵌植自体小皮片混合移植术、微粒皮移植术以及自体表皮细胞培养移植术等方法,均不同程度地缺乏真皮成分,因而不能满意解决愈后外观和功能问题。然而如果增加供皮的厚度,势必会影响供皮区的正常愈合。为解决这一难题,目前用组织工程学方法研制了许多皮肤代用品,但临床效果尚不稳定。因此,构建一种功能理想的永久性皮肤替代品具有很重要的临床意义和应用价值。 目的 利用组织工程学原理,我们期望通过体外分离扩增人表皮干细胞作为种子细胞,自行制备异种(猪)脱细胞真皮支架作为基质材料,探讨体外构建组织工程皮肤的可行性。并将该组织工程皮肤移植于动物创面,探讨该组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的可行性。 方法 通过酶消化法,分离小儿包皮的表皮与真皮层,表皮制成单细胞悬液,调整细胞浓度为1×10~6/ml,接种于包被好Ⅳ型胶原的培养皿中快速粘附10~15min(37℃),弃去未粘附细胞,保留快速粘附细胞继续培养。以高糖低钙的DMEM培养基,补充100g/L的干细胞培养专用胎牛血清(FBS),0.05mmol/L CaCl_2,10ng/ml表皮生长因子,10~(-6)mol/L氢化可的松进行培养。对传代后拟接种的种子细胞进行流式细胞仪α_6、CD_(71)表型鉴定,角蛋白19免疫细胞化学染色鉴定以及形态学观察等。我们以NaCl-SDS-胰蛋白酶法制备脱细胞真皮,并进行组织学观察。将分离培养传代的表皮干细胞接种于铺好Ⅳ
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R318.0;R622

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