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《南昌大学》 2007年
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慢性粒细胞白血病总RNA转染树突状细胞介导的抗慢性粒细胞白血病作用的体外研究

邹湉  
【摘要】: 目的:探讨人慢性粒细胞白血病(CML)总RNA体外转染自体慢性粒细胞白血病-树突状细胞(CML-DC),并诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)免疫反应,为CML疫苗的临床研究提供理论依据。方法:利用10例CML患者骨髓单个核细胞(BMMNC),加入重组白介素-4(rhIL-4)、重组粒单细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组肿瘤坏死因子(rhTNF-α)等细胞因子联合培养诱导CML-DC。用Trizol法提取CML-BMMNC的总RNA,用CML-BMMNC制备肿瘤冻融抗原。于CML-DC培养第5天,将CML-DC分成4组,比较总RNA经脂质体转染的CML-DC,总RNA不经脂质体转染的CML-DC,CML肿瘤冻融抗原负载的CML-DC,未负载抗原的CML-DC共4组分别致敏T淋巴细胞产生的CTL杀伤活性,另设以IL-2培养的T淋巴细胞为空白对照组。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测不同方法产生的CTL杀伤CML细胞的作用;用倒置显微镜观察CML-DC诱导前后形态学变化;用流式细胞仪器检测CML-DC诱导前后CD1α、CD83表型变化;用染色体G显带技术及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其染色体核型及Bcr-abl融合基因的表达。结果:CML BMMNC诱导成CML-DC, CD1α、CD83表型诱导前均在5%以下,诱导培养成熟的CML-DC细胞CD1a、CD83阳性细胞分别占(20.15±3.36)%、(25.37±2.72)%较前均明显增高(P均0.01)。诱导的CML-DC均存在Bcr-abl基因带和Ph1染色体,提示CML-DC为白血病源性。总RNA经脂质体转染CML-DC、总RNA不经脂质体转染CML-DC、CML肿瘤冻融抗原负载CML-DC、未负载抗原CML-DC分别致敏的CTL及IL-2培养的T淋巴细胞在效:靶比为20:1时的杀伤效率分别为74.67±3.54%、36.45±3.02%、51.07±3.67%、31.52±1.82%、10.62±3.17%。总RNA经脂质体转染的DC所诱导的CTL杀伤活性最强,与后四者杀伤活性有显著性差异(P0.001)。未负载抗原的CML-DC所诱导的CTL与经IL-2培养的T细胞组相比,杀伤率明显增高(P0.001)。结论:CML BMMNC经rhIL-4、rhGM-CSF、TNF-α联合培养诱导的CML-DC,CD1a、CD83均明显增高,此类DC既具有CML白血病源性,又具有DC细胞的特性,能诱导特异性CTL杀伤作用。此外,总RNA经脂质体转染的CML-DC诱导的CTL杀伤性对CML细胞的杀伤作用最强。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R733.7

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