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《南昌大学》 2007年
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采用SELEX技术筛选脱氧雪腐镰刀菌烯醇适配子的初步研究

冯香玲  
【摘要】: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物——单端孢霉烯族化合物中的一种,主要污染小麦、玉米等谷物及其制品,温带地区的谷物污染严重,在收割季节如雨量偏多则DON的污染更为严重。脱氧雪腐镰刀菌烯醇不仅可以导致动物产生急性毒性、生殖毒性、免疫毒性,而且与人的癌症相关。及时对食品及其,原料中的DON进行检测,防止其污染的食品进入食物链,是预防真菌毒素对人和动物带来危害的主要手段。 SELEX技术即配体指数富集的系统进化技术(Systematic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment,SELEX),是一种新型的体外筛选技术。适配子(aptamer)是运用SELEX技术从体外人工合成的随机寡核苷酸库中反复筛选得到的、能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的一段或者几段寡核苷酸序列。 适配子的功能类似于抗体但明显优于抗体,具有靶分子范围广、亲和力和特异性高、制备方便、稳定性好等优点,在临床治疗和诊断方法等方面都具有广阔的应用前景。本研究旨在运用SELEX技术从人工体外合成的随机ssDNA文库中筛选到针对DON的特异性适配子,为建立检测DON的快速而简便的方法奠定基础。 本研究先将毒素DON连接到蛋白质上合成全抗原。体外合成一个全长87个核苷酸中间含45个随机序列的随机ssDNA文库,以偶联有DON的全抗原为靶分子,通过SELEX技术筛选DON特异性适配子,利用生物素—链亲和素—辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA文库与DON的亲和力,将最后一轮筛选产物克隆测序并运用相关软件进行适配子序列一级结构和二级结构分析。 经过10轮的筛选和扩增,得到了DON特异性的适配子,每轮ssDNA文库与DON的亲和力呈上升趋势。21个适配子序列全长87 bp,根据一级结构序列的同源性确定,一共有12种不同的核苷酸序列。其中7号适配子结构稳定,亲和力高,其序列将是我们今后研究的重点。二级结构预测以茎环(发夹)结构为主,这可能是适配子与靶分子作用的结构基础。DON特异性适配子的筛选为今后建立相关的酶联寡核苷酸试验(enzyme-linked oligonucleatide, ELOSA)等检测方法提供了前提条件。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S432.4

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【参考文献】
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