建立IAC-HPLC检测红曲米中的桔霉素
【摘要】：
桔霉素(Citrinin，CIT)是由青霉属、曲霉属和红曲霉的某些菌株产生的一种广泛污染玉米、大米、小麦等农作物的真菌毒素，在红曲米中的污染尤为普遍，对动物及人类具有肾毒性、致畸性、致癌性等。目前检测CIT的主要方法有薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附检测法等。
本研究建立了免疫亲和柱联高效液相色谱法(Immunoaffinity column-High Performance Liquid Chromatography，IAC-HPLC)检测红曲米中的CIT；并用此方法检测了41份市售及实验室自制的红曲米样品中的CIT含量。主要研究内容和结果如下：
1抗CIT单克隆抗体免疫亲和柱的制备
将纯化好的抗CIT单克隆抗体与溴化氰(CNBr)活化的琼脂糖凝胶(Sepharose)4FF偶联。采用紫外扫描鉴定偶联反应，间接竞争ELISA方法及HPLC方法检测制备好的免疫亲和柱的柱容量。每根抗CIT单克隆抗体免疫亲和柱，用0.5mL活化胶，0.50mg抗CIT单克隆抗体，柱容量为0.35μg。
2建立了分析红曲米中CIT IAC-HPLC
该方法线性范围100μg/kg～600μg/kg，信噪比为3：1时，最低检测限为100μg／kg，超过日本的限量标准(200μg／kg)；红曲米样品添加CIT标准品(100μg/kg～600μg／kg)，用70％甲醇水溶液提取样品中CIT，经免疫亲和柱净化、0.01mol／L的PBS淋洗、纯甲醇洗脱，HPLC荧光法检测，平均回收率分别为74.2％～87.14％，相对标准偏差分别为2.85％～13.12％。
3市售红曲米中CIT含量的测定
采用本研究建立的IAC—HPLC方法对41份红曲米样品中的CIT含量进行了检测。IAC—HPLC分析的结果显示，其中有25份红曲米样品中桔霉素含量超过日本的标准(200μg／kg)，超标率61.0％，红曲米中CIT含量为100μg/kg～986μg/kg。
【关键词】：桔霉素 红曲米 免疫亲和柱 高效液相色谱 【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：TS212.7
【目录】：
- 摘要3-4
- 缩略语4-6
- ABSTRACT6-9
- 第一章 综述9-23
- 1.1 桔霉素的研究进展9-12
- 1.1.1 桔霉素的物理化学特性9-10
- 1.1.2 桔霉素的产生及其自然分布10
- 1.1.3 桔霉素的抑菌性10-11
- 1.1.4 桔霉素的毒性11
- 1.1.5 红曲霉产桔霉素问题及控制措施11-12
- 1.2 桔霉素的检测方法12-21
- 1.2.1 薄层层析法12-13
- 1.2.2 酶联免疫吸附法13-15
- 1.2.3 高效液相色谱法15-21
- 1.3 主要研究内容、选题目的和意义21-23
- 第二章 建立免疫亲和柱联高效液相色谱法检测红曲米中的桔霉素23-53
- 2.1 仪器与试剂23-27
- 2.1.1 实验材料23
- 2.1.2 仪器与设备23-24
- 2.1.3 试剂和溶液配制24-27
- 2.2 实验方法与步骤27-36
- 2.2.1 建立酶联免疫吸附法检测桔霉素27-31
- 2.2.2 建立高效液相色谱方法检测桔霉素31
- 2.2.3.抗桔霉素单克隆抗体免疫亲和柱制备31-35
- 2.2.4 建立免疫亲和柱联高效液相色谱法检测红曲米中桔霉素含量35
- 2.2.5 免疫亲和柱联高效液相色谱法检测市售样品中的桔霉素含量35-36
- 2.3 结果36-53
- 2.3.1 建立酶联免疫吸附法检测桔霉素36-39
- 2.3.2 建立高效液相色谱法检测桔霉素39-42
- 2.3.3 抗桔霉素单克隆抗体免疫亲和柱的制备42-48
- 2.3.4 建立免疫亲和柱连高效液相色谱法检测红曲米中桔霉素含量48-51
- 2.3.5 红曲米中的桔霉素含量测定51-53
- 第三章 讨论53-61
- 3.1 色谱条件53-55
- 3.1.1 色谱柱53
- 3.1.2 检测波长53-54
- 3.1.4 流动相54-55
- 3.2 免疫亲和柱制备的研究55-58
- 3.2.1 抗体55-56
- 3.2.2 载体的选择56-57
- 3.2.3 偶联57-58
- 3.3 免疫亲和柱使用条件58-60
- 3.3.1 评价方法的选择58
- 3.3.2 样品提取方法58-59
- 3.3.3 上样条件59
- 3.3.4 洗涤59
- 3.3.5 洗脱59-60
- 本研究的创新之处60-61
- 第四章 小结61-63
- 4.1 研制了抗桔霉素单克隆抗体免疫亲和柱61
- 4.2 建立了分析红曲米中桔霉素含量的免疫亲和柱联高效液相色谱法61-62
- 4.3 红曲米样品中桔霉素含量的测定62-63
- 致谢63-64
- 参考文献64-69
- 个人简介69
|
|
|
|
| 1 |
邹宇,侯红漫,张笑,刘阳,陈莉;红曲霉0301产色素培养条件优化及其桔霉素含量检测[J];大连轻工业学院学报;2005年03期 |
| 2 |
黄志兵;李燕萍;王延华;许杨;;橙色红曲菌As3.4384及其诱变体发酵产物中的桔霉素和色素的高效液相色谱研究[J];分析化学;2007年04期 |
| 3 |
刘江;单克隆抗体在真菌毒素检测中的应用进展[J];国外医学.卫生学分册;1995年02期 |
| 4 |
周玉;李岩松;潘风光;谭建华;柳增善;王哲;;小鼠腹水IgG类单克隆抗体纯化方法的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2006年10期 |
| 5 |
杨长志,康庆贺,田丰,李淑琪,陈丽;免疫亲和柱法测定小麦中黄曲霉毒素[J];化学工程师;2002年06期 |
| 6 |
肖付刚;赵晓联;汤坚;顾小红;;免疫亲和层析及其在真菌毒素检测中应用[J];粮食与油脂;2007年08期 |
| 7 |
宫慧梅,赵树欣,邹海晏;用双向薄层层析检测红曲中的桔霉素[J];酿酒科技;2002年02期 |
| 8 |
朱孟丽,彭聪,吴淑君,洪振涛;利用高效液相色谱法测定饲料中的赭曲霉毒素[J];饲料广角;2005年07期 |
| 9 |
李云,阎雪秋,李枚秋,张茂良;红曲与桔霉素[J];食品与发酵工业;2000年03期 |
| 10 |
许赣荣,陈蕴,虞慧玲,王大友,朱华;高效液相色谱法测定红曲莫纳可林及桔霉素——如何防治色素的干扰[J];食品与发酵工业;2002年10期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期 |
| 2 |
王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期 |
| 3 |
康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期 |
| 4 |
安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期 |
| 5 |
朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期 |
| 6 |
毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期 |
| 7 |
单雷,毕玉平,王兴军,徐平丽,李广存;双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析[J];山东农业科学;1998年04期 |
| 8 |
葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期 |
| 9 |
王北艳;曹宁;汤晖;;苜蓿中华根瘤菌电转条件的优化[J];安徽农学通报;2008年11期 |
| 10 |
刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
王春娜;HPLC法检测功能红曲中的洛伐他汀[J];北京农学院学报;2000年02期 |
| 2 |
任清,黄建立;小麦粉中过氧化苯甲酰与苯甲酸总量的毛细管气相色谱法测定[J];分析化学;2004年02期 |
| 3 |
谢孟峡,刘媛,邱月明,韩杰,刘宜孜;固相萃取-气相色谱质谱测定动物组织中氯霉素的残留量[J];分析化学;2005年01期 |
| 4 |
楼蔓藤,商振华;固相萃取技术的发展与应用[J];分析仪器;1998年01期 |
| 5 |
王中民,李君文;免疫层析技术研究进展[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2001年02期 |
| 6 |
刘江;单克隆抗体在真菌毒素检测中的应用进展[J];国外医学.卫生学分册;1995年02期 |
| 7 |
高立勤,左文坚;免疫亲和色谱及其在生物样本分析中的应用[J];国外医学.药学分册;2000年02期 |
| 8 |
陈义光,彭德娇,张晓蓉,田宏现;pH对红曲霉产红曲色素的影响[J];湖北农学院学报;2002年02期 |
| 9 |
钟立人,毕丽君;高效液相色谱分离红曲色素组分的研究[J];化学世界;2001年01期 |
| 10 |
刘晓波,蔡美英,王霞,李喜荣;一种简单实用纯化腹水McAb方法——辛酸/硫酸铵法[J];华西医科大学学报;1999年04期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
王彩霞;肖杰;孙爱东;胡晓丹;;高效液相色谱法检测红曲米中的桔霉素[J];中国粮油学报;2010年07期 |
| 2 |
郭雪梅;许杨;刘仁荣;;免疫亲和柱-高效液相色谱法检测红曲米中的桔霉素[J];食品与发酵工业;2007年10期 |
| 3 |
丁兴;嘉晓勤;周立平;张菲菲;;根瘤农杆菌介导的紫色红曲菌遗传转化体系的研究[J];中国酿造;2009年08期 |
| 4 |
许赣荣,傅金泉;红曲产品的合法化,菌种分类及有害物质桔霉素─—当今欧洲红曲生产及应用的焦点[J];中国酿造;1998年05期 |
| 5 |
李云,阎雪秋,李枚秋,张茂良;红曲与桔霉素[J];食品与发酵工业;2000年03期 |
| 6 |
王雅芬,袁康培;低产桔霉素红曲霉菌种的选育研究[J];食品科学;2003年08期 |
| 7 |
赖晓英,贺稚非,郭月红,吴丽红,韩叙;红曲研究现状及发展前景[J];粮食与油脂;2004年10期 |
| 8 |
屠传忠,张树荣,方志强;酱油混合发酵工艺中桔霉素的测定[J];食品与发酵工业;1984年05期 |
| 9 |
赖卫华,许杨,李燕萍,熊勇华;关于红曲霉产桔霉素规律的初步探讨[J];中国酿造;2004年02期 |
| 10 |
赖卫华,许杨;红曲霉产桔霉素的研究动态[J];食品科学;2002年07期 |
|
快捷付款方式
订购知网充值卡
订购热线
帮助中心