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《南昌大学》 2008年
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RNA干扰技术对A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因抑制作用的实验研究

周建英  
【摘要】: 目的: 利用RNA干扰技术,观察携带表皮生长因子受体(EGFR)同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549细胞后对细胞表皮生长因子受体mRNA和蛋白质表达水平变化的影响;同时筛选出干扰效果较好的重组质粒,为进一步研究稳定转染后的单克隆细胞生物学特性做好准备。 方法: 根据RNA干扰原理,体外设计并合成4条靶向EGFR特异性干扰片段,即h-EGFR1、h-EGFR2、h-EGFR3、h-EGFR4,以pGensil-1为载体,分别构建重组质粒pGensil-1-EGFR-1、pGensil-1-EGFR-2、pGensil-1-EGFR-3、pGensil-1-EGFR-4。分别以Lipofectamine 2000介导转染肺腺癌细胞株A549细胞,经G418筛选后挑选出稳定转染的单克隆细胞。将所挑选出的单克隆细胞大量培养后采用RT-PCR和Western blot技术分别检测EGFR基因mRNA的转录及EGFR基因蛋白质翻译水平,并计算抑制率。 结果: 在挑选出稳定表达的单克隆细胞后,实验组pGensil-1-EGFR-1与未转染组相比EGFR表达水平无明显降低(P0.05),实验组pGensil-1-EGFR-2、pGensil-1-EGFR-3、pGensil-1-EGFR-4与未转染组相比EGFR基因mRNA和蛋白质的表达水平均有明显降低(P0.05),mRNA水平干扰效率分别为27.6%,45.8%,51.7%,pGensil-1-EGFR-2组与pGensil-1-EGFR-4组相比有统计学意义(P0.05), pGensil-1-EGFR-3组与pGensil-1-EGFR-4组间比较二者无统计学意义(P0.05)。蛋白质水平干扰效率分别为34.25%,50.86%,47.07%,且这三组间比较无统计学意义(P0.05)。空白对照组及阴性对照组与未转染组相比EGFR基因mRNA和蛋白质的表达水平无明显差异(P0.05)。 结论: 利用RNA干扰技术,将4个携带表皮生长因子受体同源mRNA的重组质粒稳定转染至肺腺癌细胞A549后,其中3个能有效抑制A549细胞EGFR mRNA及EGFR蛋白质的表达,提示RNA干扰技术能影响A549细胞中EGFR基因的功能;同时本实验也筛选干扰效果较好pGensil-1-EGFR-3组与pGensil-1-EGFR-4组两个实验组,为进一步研究携带表皮生长因子受体同源mRNA的重组质粒稳定转染至肺腺癌细胞A549细胞后对A549细胞生物学影响做好准备。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R734.2

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