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《南昌大学》 2009年
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人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为角膜缘干细胞的研究

刘晶  
【摘要】: 目的:探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(HBMSCs,human bone mesenchymal stem cells)分化为角膜缘干细胞(LSCs,limbal stem cells)的可行性。 方法:用密度梯度离心法体外分离HBMSCs,在含10%胎牛血清(FBS,fetal bovine serum)的LG-DMEM/F12培养基中扩增培养,流式细胞仪检测细胞的表面抗原;用消化后组织块培养法分离培养LSCs,在含20%FBS的HG-DMEM/F12培养基中扩增培养,流式细胞仪检测细胞的核心抗原P63。将第四次传代的HBMSCs按5 X 104/ml的细胞密度接种于六孔Transwell培养板底层,分成两组:实验组将第二次传代的LSCs按5 X 104/ml接种于Transwell培养板上层,用一种特殊的培养基(含90% LG-DMEM/F12,10%FBS,10μg/ml EGF, 10ng/ml bFGF,1μg/mLPS)共同培养10天。对照组不加任何诱导剂,以原LG-DMEM/F12培养基培养。在相差显微镜下进行形态学观察。 结果:密度梯度离心法能分离出纯度较高的HBMSCs。典型的HBMSCs贴壁生长,呈长梭形,漩涡状盘旋排列。流式细胞分析结果显示第四代HBMSCs表达相关的抗原标记CD29(96.78%), CD44(96.23%), CD105(91.45%), CD166(81.70%),不表达造血细胞系的表面标志CD34(2.34%), CD45(3.92%)及主要组织相容性抗原HLA-DR(1.11%)。在体外成功培养出LSCs,细胞呈圆形、椭圆形、多角形,胞体透亮,约2周后细胞融合呈镶嵌状排列。第二代LSCs表达P63(83.35%)。实验组共同培养72小时后,贴壁HBMSCs部分呈椭圆形、圆形改变,在体外微环境中诱导10天后大部分细胞呈多边形、圆形、椭圆形,少量细胞呈梭形。对照组细胞呈典型HBMSCs贴壁生长,以长梭形为主。试验组P63弱阳性(7.16±0.56%),对照组P63阴性(0.74±0.49%)。 结论:与受炎性刺激的LSCs共培养后,HBMSCs有横向分化为类LSCs细胞的能力。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R329

【参考文献】
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