收藏本站
《南昌大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鸡蛋蛋清溶菌酶分离纯化及其抗原性评估

张新宝  
【摘要】: 鸡蛋溶菌酶是一种天然存在的具有杀菌抑菌作用的碱性蛋白酶,在食品行业中得到了广泛的应用,然而作为鸡蛋中的一种主要过敏原,约有35%的鸡蛋过敏患者对溶菌酶过敏。另外,食物过敏是一种复杂的网络免疫失调症,多种抗原抗体之间相互作用,探明各种过敏原在食物过敏反应中的相互关系,对于低过敏或无过敏食品的开发具有重要的指导意义。因此,本论文分离纯化高纯度鸡蛋溶菌酶,并对其抗原性进行初步评估,这不仅为溶菌酶的工业化生产提供一定的技术支持,还能够为低过敏性或无过敏性蛋制品的开发提供一些基本的实验参数。 本研究的主要内容包括鸡蛋溶菌酶的分离纯化、溶菌酶酶活性质研究、兔抗溶菌酶多克隆抗体的制备以及溶菌酶抗原性评估。 在鸡蛋溶菌酶分离纯化过程中,建立了CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析分离溶菌酶的方法。分离得到的样品经5%-15%SDS-PAGE电泳进行鉴定,结果表明,溶菌酶纯度在90%以上,回收率在31.1%左右。 在溶菌酶酶活性质研究过程中,以枯草芽孢杆菌及其细胞壁作为研究对象,研究了鸡蛋溶菌酶的部分酶活性质。研究结果表明,鸡蛋溶菌酶对枯草芽孢杆菌的生长具有明显的抑制作用,在50℃环境中,溶菌酶对枯草芽孢杆菌细胞壁具有明显的降解作用,但是在25℃时的作用并不明显,这说明温度对溶菌酶酶活有很大影响。 在兔抗溶菌酶多克隆抗体制备过程中,通过弗氏佐剂来加强免疫,采用皮下多点免疫的方法免疫日本大白兔,分离血清,然后用间接ELISA检测了兔抗溶菌酶血清效价的变化。在测定效价之前,先通过方正滴定建立了间接ELISA法的工作条件:抗原最佳包被浓度0.5μg/ml,二抗稀释倍数1:10000。免疫结果显示,不同个体对溶菌酶的敏感不同,兔B2、C1对溶菌酶较为敏感,效价达到了1:150000,相反,兔B1、C2的反应较为迟钝。 在溶菌酶抗原性评估试验中,采用间接ELISA、间接竞争ELISA、Western Blotting等方法检测了兔抗溶菌酶血清与溶菌酶、卵运铁蛋白、卵白蛋白、卵类粘蛋白和α-乳白蛋白之间的免疫反应。试验结果说明,兔抗溶菌酶血清与卵运铁蛋白、卵类粘蛋白之间有非特异性免疫反应,与α-乳白蛋白无任何反应,只与溶菌酶发生特异性反应,具有高度专一选择性。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R392

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 陈寅;牛奶、鸡蛋过敏原的鉴定、纯化及应用研究[D];天津医科大学;2011年
2 代彩霞;人溶菌酶蛋白的原核表达、纯化及生物活性检测[D];暨南大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 史小利;李宗谦;徐淑霞;张世敏;;蛋清溶菌酶提取工艺研究[J];现代农业科技;2008年06期
2 柴向华;万彬;黄应球;;溶菌酶辅助治疗小儿急性鼻窦炎效果观察[J];包头医学院学报;2007年03期
3 张茉;何锡文;秦磊;李文友;陈朗星;张玉奎;;蛋白质溶胶-凝胶包埋法分子印迹复合膜的制备及渗透机理研究[J];高等学校化学学报;2008年03期
4 刘秋叶;盖青青;何锡文;李文友;陈朗星;张玉奎;;复合分子印迹聚合物体系选择性富集蛋白质样品中的溶菌酶[J];高等学校化学学报;2008年03期
5 蓝程;食物过敏疾病的免疫发病机制研究进展[J];国外医学(内科学分册);2001年10期
6 刘杨,史清洪,赵黎明,孙彦;新型混合反胶团萃取溶菌酶的平衡行为[J];过程工程学报;2005年03期
7 王炜军,方颖,黄国林;蛋壳残留溶菌酶的磁性亲和分离[J];华南农业大学学报;2005年04期
8 王炜军,徐凤彩;脱氨再生几丁质凝胶亲和柱层析法纯化溶菌酶[J];华南农业大学学报;1996年03期
9 刘树青,江晓路,牟海津,王慧谧,管华诗;免疫多糖对中国对虾血清溶菌酶、磷酸酶和过氧化物酶的作用[J];海洋与湖沼;1999年03期
10 杨向科,邹艳丽,孙谧,郑家声;海洋微生物溶菌酶的抑菌作用及抑菌机理初步研究[J];海洋水产研究;2005年05期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 闫长领;蛋白质分子印迹核—壳微球的研究[D];兰州大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 林琳;红肠的综合保鲜技术和真空包装红肠菌系的研究[D];东北农业大学;2003年
2 姜馗;蛋清溶菌酶提取技术的研究[D];中国农业大学;2005年
3 李欣;鸡蛋清溶菌酶的精制[D];吉林大学;2006年
4 赵宁;鹌鹑蛋清溶菌酶的分离纯化及其性质研究[D];福建农林大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张远;酶制剂及其在食品保鲜中的应用[J];安徽农业科学;2005年03期
2 刘占才;牛俊英;孔祥会;郭彦玲;郭春丽;;汞离子对草鱼血清和肾脏溶菌酶活性的影响[J];安徽农业科学;2007年09期
3 何颖;陈忠伟;高建峰;胡庭俊;刘伟;赵武;胡帅;赵武;关忠谊;李斌;梁家幸;;马尾藻多糖对南美白对虾免疫调节作用[J];安徽农业科学;2008年31期
4 丁存宝;刘海燕;李明;贾长虹;张秀军;;海洋产几丁质酶微生物选育及组合发酵优化[J];安徽农业科学;2008年35期
5 关建义;刘占才;郭延玲;孔祥会;;高效氯氰菊酯对草鱼血清溶菌酶活性的影响[J];安徽农业科学;2009年09期
6 常凯;马亮;;溶菌酶提取工艺及其在山核桃乳中的应用研究[J];安徽农业科学;2009年30期
7 赵明军;张洪玉;周状;;中草药对水产动物疾病防治的药效学研究综述[J];安徽农业科学;2009年36期
8 张潭;边六交;王世祥;郑晓晖;;荧光相图法研究变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程[J];安徽农业科学;2010年19期
9 李向荣;晁淑军;;荧光相图法研究溶菌酶在盐酸胍溶液中的变性[J];安徽农业科学;2010年22期
10 王斌;;食品中的免疫调节功能因子研究进展[J];氨基酸和生物资源;2009年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄曼曼;邓颖妍;黄娟娟;曹环;曹庸;;抑菌肽的抑菌特性及其在食品中的防腐研究[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
2 哈益明;;辐照技术在保障食品安全中的作用和应用领域[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第8册)[C];2009年
3 郝林华;陈靠山;曲江波;杨志;;一种新型的免疫促长剂对大菱鲆生长和免疫力的影响[A];中国海洋学会海洋生物工程2005年学术年会论文集[C];2005年
4 蒋伟明;韩耀全;吴伟军;;优质对虾饲料的研制与推广应用[A];广西水产研究所论文集(2001—2005)[C];2006年
5 郭志勋;李卓佳;林黑着;叶乐;冯娟;杨莺莺;陈永青;;芽孢杆菌对凡纳对虾生长及免疫的影响[A];可持续水产养殖——资源、环境、质量——2003水产科技论坛论文集[C];2003年
6 孙昌魁;张正红;崔富昌;陈明;夏蕊蕊;张玉臻;;β-1,4-N,6-O-二乙酰胞壁质酶R2酶促反应动力学研究[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
7 程时军;马立保;张伟;;溶菌酶应用及研究进展[A];饲料酶制剂的研究与应用[C];2009年
8 赵超莉;谢卫国;宛仕勇;温丰平;;低强度微波照射对烫伤大鼠感染创面的影响[A];急慢性创面治疗新技术专题系列研讨会之感染创面综合治疗论坛论文汇编[C];2011年
9 李莉;黄丹丹;戴娇娇;殷勇冠;朱全红;;分子印迹技术在蛋白质分离中的应用[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
10 李莉;黄丹丹;戴娇娇;殷勇冠;朱全红;;分子印迹技术在蛋白质分离中的应用[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 帅学宏;山豆根多糖提取工艺及免疫学活性研究[D];甘肃农业大学;2010年
2 张琴;刺参(Apostichopus japonicus Selenka)高效免疫增强剂的筛选与应用[D];中国海洋大学;2010年
3 丁森;海水和淡水条件下不同蜕壳时期凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生理生态学的比较研究[D];中国海洋大学;2010年
4 常杰;对虾和刺参敏感免疫学指标的筛选和评价[D];中国海洋大学;2010年
5 王丽燕;面包酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)对中国卤虫(Artemia sinica)抗弧菌感染的影响与酚氧化酶原在卤虫早期发育过程中表达时相的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 严芳;甲壳动物血蓝蛋白免疫学活性及其作用机制研究[D];汕头大学;2011年
7 刘问;白斑综合征病毒对锯缘青蟹的致病性及致病机理研究[D];宁波大学;2010年
8 刘晓华;谷胱甘肽对凡纳滨对虾抗氧化防御的调控机理[D];华中农业大学;2010年
9 马秀玲;柚皮苷分子印迹聚合物的制备及其水相识别[D];福建师范大学;2011年
10 郑善军;邻苯二甲酸二丁酯和苯并(a)芘对睾丸巨噬细胞功能影响及机制研究[D];第三军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 程时军;溶菌酶在肉鸡中的应用及作用机制研究[D];华中农业大学;2010年
2 余海芬;蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究[D];华中农业大学;2010年
3 于艳梅;魔芋甘露寡糖对黄颡鱼的益生功能研究[D];华中农业大学;2010年
4 郭慧芝;中华绒鳌蟹cDNA文库的构建及免疫相关基因的克隆与表达[D];华中农业大学;2010年
5 张红双;不同养殖环境生物应激因素对肉鸡免疫功能的影响[D];山东农业大学;2010年
6 谷珉;仿刺参(Apostichopus japonicus)免疫增强剂的体外筛选与养殖试验的评估[D];中国海洋大学;2010年
7 白楠;凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei、仿刺参Apostichopus japonicus免疫增强剂使用频率和免疫疲劳的研究[D];中国海洋大学;2010年
8 刘君;对虾抗白斑综合征病毒益生菌的筛选及其作用效果[D];中国海洋大学;2010年
9 杜以帅;酶解海藻产物对刺参(Apostichopus japonicus)肠道菌群和免疫相关因子的影响[D];中国海洋大学;2010年
10 陈卫华;麻蝇全蛋白提取及凝集素的纯化鉴定[D];江西师范大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈晶晶;陈劲春;;巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人溶菌酶[J];北京化工大学学报(自然科学版);2006年06期
2 张芳;李红旭;;影响牛乳酪蛋白分离因素的研究[J];保鲜与加工;2006年03期
3 李启沅;李荔;刘志刚;;鱼虾贝类的主要过敏原分子免疫学特性研究进展[J];水产科学;2008年03期
4 谢磊,孙建波,张世清,黄俊生;大肠杆菌表达系统及其研究进展[J];华南热带农业大学学报;2004年02期
5 张云波,孙谧,蔡勤,王跃军,洪义国,郝建华;海洋低温溶菌酶抗肿瘤活性的初步研究[J];海洋水产研究;2001年03期
6 陈启凡;孙世安;王岩;张福辰;;金纳米探针瑞利共振散射法测定溶菌酶[J];激光生物学报;2008年05期
7 牛广财;朱丹;范兆军;魏文毅;王宪青;;沙棘果酒苹果酸—乳酸发酵工艺的研究[J];吉林农业大学学报;2010年05期
8 王利娟;李琳娜;何金花;李海城;刘誉;;溶菌酶与顺铂联合应用对肝癌SMMC-7721细胞的协同抑制效应[J];暨南大学学报(医学版);2008年02期
9 蒋红玲;向军俭;王宏;邓宁;刘婉莹;杨红宇;凌钦婕;;牛奶中过敏原组分的分离纯化及主要过敏原的鉴定[J];暨南大学学报(医学版);2008年04期
10 朱秋菊,孙怀昌,李国才,张泉,陈瑾;人溶菌酶活性两种检测方法的比较研究[J];扬州大学学报;2005年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 高永贵;溶菌酶和重组人干扰素-γ包涵体体外折叠复性的研究[D];浙江大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 曹涛;变溶菌素发酵生产及在口腔制品中的应用[D];山东轻工业学院;2011年
2 韩斌;溶菌酶-绿色荧光蛋白(Lyz-GFP)双元基因对苜蓿转化的研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 钱丽红;几种天然保鲜剂的抑菌机理[D];上海海洋大学;2010年
4 毛露甜;几种常见食物过敏原的纯化及免疫活性鉴定[D];暨南大学;2005年
5 顾玮彦;重组大肠杆菌生产肠激酶的研究[D];浙江大学;2006年
6 李欣;鸡蛋清溶菌酶的精制[D];吉林大学;2006年
7 高飞;重组人干扰素α-2b包涵体蛋白的柱层析复性研究[D];安徽大学;2007年
8 陈茜;新型牛溶菌酶基因的重组真核质粒构建及活性研究[D];四川大学;2007年
9 丁红梅;食物过敏原特异性IgE检测方法的建立及临床应用的研究[D];天津医科大学;2008年
10 吴凤;β-乳球蛋白的分离提纯及其酶源降胆固醇活性肽的研究[D];安徽农业大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 夏茹,章于川,易佑民,杨瀛海,尹守春,王嘎,董亮伟;悬浮聚合条件对高分子微球粒径及其光学性能的影响[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年01期
2 崔晓江,黄文晋,刘枝俏,彭学贤,莽克强;噬菌体T7溶菌酶及其融合蛋白在大肠杆菌中的表达[J];病毒学报;1994年02期
3 周遵春,孙建明,吴垠,刘亚杰;不同饲养条件对中国对虾血清蛋白、血脂、血糖含量变化的初步研究[J];水产科学;1994年05期
4 徐明芳,高孔荣,刘婉乔;海藻多糖及其生物活性[J];水产科学;1996年06期
5 王岳飞;茶多酚(TP)对细菌的抑制作用[J];茶叶;1994年03期
6 卫引茂,黄晓冬,陈强,耿信笃;连续棒状弱阳离子交换柱的合成及其对蛋白质保留行为[J];分析化学;2000年10期
7 郭洪声,何锡文;药物头孢氨苄分子模板聚合物水中结合性质的研究[J];分析化学;2000年10期
8 郭洪声,何锡文,周杰,梁宏;药物氟哌酸分子模板聚合物的分子识别特性[J];分析化学;2001年02期
9 张立永,成国祥,陆书来,傅聪,尹玉姬;悬浮聚合法制备西咪替丁印迹聚合物微球的分子选择性能[J];分析化学;2003年06期
10 朱庆枝,李顺华,许金钩;仿生荧光免疫分析卵清白蛋白[J];福州大学学报(自然科学版);1999年S1期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 顾强;乳液——悬浮原位聚合反应制备透明聚苯乙烯复合材料的研究[D];吉林大学;2005年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郑俊;骆利康;何晓燕;吕俊;;超声快速石蜡切片对免疫组化抗原检测的影响[J];临床与实验病理学杂志;2008年04期
2 高谦,汪美先,姜绍谆,马文煜,戴敦穗;单克隆抗体分析单纯疱疹病毒的抗原性[J];第四军医大学学报;1988年04期
3 熊正文,王伯云,丁华野;影响免疫组化抗原性的因素分析与对策[J];诊断病理学杂志;1997年03期
4 蒋玉文,文希喆;败毒梭菌免疫原性的研究 Ⅱ、败毒梭菌毒素的抗原性[J];中国人兽共患病杂志;1988年03期
5 内科,陈香美,冯修普;肾小球和肾小管基底膜抗原性的实验研究[J];吉林大学学报(医学版);1982年05期
6 史久华;超抗原性疫苗[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1996年03期
7 熊正文,檀战山,王伯法,李春光,阮仕荣,苏红;微波-表面活性剂恢复陈旧性石蜡切片抗原性的定量研究[J];中国组织化学与细胞化学杂志;1998年02期
8 潘华珍;;蛋白质抗原的结构与抗原性的关系[J];生理科学进展;1964年01期
9 朱明华;抗原性关节炎钛植入的组织反应[J];国外医学.生物医学工程分册;1994年04期
10 朱瑾,俞树荣;肺炎衣原体抗原性研究进展[J];中华检验医学杂志;1997年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 智海东;杨志;解生亮;王云峰;朱庆虎;王牟平;刘霓红;;鸡包涵体肝炎病毒CELOV株的鉴定研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
2 李金花;林星;陈爽;张庆镐;;五种结核分枝杆菌分泌性蛋白的纯化及其血清学特性的研究[A];东北三省及内蒙古地区遗传学研究进展学术研讨会论文汇编[C];2009年
3 姜笃银;陈璧;贾赤宇;陶克;;异种/同种异体脱细胞真皮基质抗原性的实验研究[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
4 侯珏;胡国龄;刘双虎;;人金属基质蛋白酶-1的克隆、表达及其产物抗原性的分析[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
5 杨玉菊;王君伟;杨志;何海娟;高宏丽;于天飞;;鹅副粘病毒NP基因的原核表达及表达产物抗原性检测[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
6 程相朝;李银聚;张春杰;吴庭才;刘一尘;余祖华;;IBDV-VP2基因同义密码子的使用与其毒力和抗原性的关系[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十五次、中国病理生理学会动物病生专业委员会第十四次学术讨论会论文集[C];2007年
7 李德发;马曦;孙鹏;;大豆抗原蛋白研究进展[A];动物营养研究进展——中国畜牧兽医学会动物营养学分会第八届全国代表大学暨第十届学术研讨会论文集[C];2008年
8 苟钟勇;王劼;罗何峰;刘冬妍;蒋思文;彭健;;猪胆囊收缩素-33九串联体重组蛋白的抗原性研究[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
9 肖异珠;王华;李咏梅;欧阳莹;罗晓燕;谭琦;向娟;;金黄色葡萄球菌重组表皮剥脱毒素A的克隆、表达及纯化[A];中华医学会第16次全国皮肤性病学术年会摘要集[C];2010年
10 唐忠义;兴陆安;许期年;余嘉丽;;辐照消毒与常规消毒猪皮抗原性,细胞免疫和环核苷酸的比较观察[A];全国第三届烧伤外科学术交流会议论文摘要[C];1991年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 马飞 实习生 杨俊坚;抗原性设计或成攻坚突破口[N];医药经济报;2009年
2 湖南省人民医院 黄艾平;少见的胰岛素不良反应[N];大众卫生报;2001年
3 广文;人发角蛋白人工腱[N];医药经济报;2002年
4 山东济南医院糖尿病诊疗中心 王建华;药物失效找对策[N];健康时报;2008年
5 本报记者 徐文智;流感预防须重视[N];中国消费者报;2003年
6 记者 朱玉;不会闹大流感[N];新华每日电讯;2002年
7 葛素红;同种异体肌腱移植在沈阳获成功[N];民族医药报;2000年
8 戴廷荣;初春为啥咳不停?[N];医药经济报;2001年
9 山东省农科院家禽研究所 秦卓明 何叶峰 成武县畜牧局 宋宪军;强化生物安全体系建设[N];中国畜牧报;2002年
10 郝一;提高免疫力要注意几个事项[N];北京科技报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜政;H.pylori外膜蛋白编码基因的克隆、表达、抗原性研究及其临床应用[D];重庆医科大学;2003年
2 牛廷献;旋毛虫新生幼虫期特性基因的克隆、表达及抗原性研究[D];中国人民解放军军需大学;2003年
3 牛东升;立氏立克次体外膜蛋白B基因的应用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
4 王蕾;禽呼肠孤病毒野毒株σC基因、抗原性及致病性比较研究[D];山东农业大学;2007年
5 邵圣文;丙型肝炎病毒F蛋白抗原性、抗凋亡作用及细胞内磷酸化研究[D];第二军医大学;2007年
6 王凯慧;膜联蛋白家族新成员的结构,功能和进化[D];第二军医大学;2005年
7 朱诗应;丙型肝炎病毒结构基因的表达及其病毒样颗粒研究[D];第二军医大学;2005年
8 文明;DEV基因文库构建、核衣壳蛋白基因的发现及克隆与表达[D];四川农业大学;2005年
9 钱炳俊;乙型肝炎新型植物口服疫苗的研究[D];复旦大学;2007年
10 郑山根;LPS多表位模拟肽及抗原性的研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 毕井辉;不同处理方法对鸡蛋清中卵白蛋白抗原性的影响[D];江南大学;2013年
2 赵冰;猪囊尾蚴发育过程中可溶性蛋白的变化及其抗原性的分析[D];东北农业大学;2001年
3 李玉华;(一)实验动物支原体感染双抗体夹心ELISA方法的建立 (二)人工培养环境对肺支原体致病性和抗原性的影响[D];中国协和医科大学;2007年
4 吴艳丽;肺炎链球菌表面粘附素A的原核表达和免疫保护性的初步研究[D];大连医科大学;2009年
5 盖文燕;旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆、表达及抗原性研究[D];中国农业科学院;2010年
6 钱超;SARS冠状病毒M蛋白基因片段的克隆表达与表达产物单克隆抗体的制备和鉴定[D];南京医科大学;2005年
7 祝丙华;人细小病毒B19VP2蛋白的优势表达与抗原活性检测[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
8 任珊;糖基化法降低牛乳β-乳球蛋白免疫原性的研究[D];北京林业大学;2009年
9 张新宝;鸡蛋蛋清溶菌酶分离纯化及其抗原性评估[D];南昌大学;2010年
10 刘昌文;肥大细胞靶向毒素的抗原性弱化重组构建研究[D];广州医学院;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026