收藏本站
《南昌大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

脂肪酶产生菌的细胞融合选育及其产酶条件优化

高鹤  
【摘要】: 脂肪酶(Lipase)是一种特殊的酯键水解酶,它可作用于甘油三酯的酯键,使甘油三脂降解为甘油二酯、单甘油酯、甘油和脂肪酸。脂肪酶是最早被人们研究的酶类之一,也是一种重要的工业用酶,被广泛应用于轻工领域。微生物脂肪酶被发现以来,由于其种类多,高度的底物专一性,宽范围的作用pH和温度,容易工业化生产应用等优点,选育脂肪酶高产菌株成了国内外相关研究的热点。 本文利用化学PEG融合法使白地霉(Geotrichum candidum NS3)原生质体和假丝酵母(Candida valida T2)原生质体融合,结合抗药性标记筛选方法,成功筛选出一株产脂肪酶能力较高并且生长能力较强的融合菌株,并对融合株的固态发酵产脂肪酶条件进行初步研究。主要研究工作和结果如下: (1)脂肪酶双亲本菌株抗药性标记的选择。实验利用药物浓度梯度平板法和医学给药原则,选用12种药物分别对白地霉(Geotrichum candidum NS3)和假丝酵母(Candida valida T2)进行抗药性测定,成功筛选出白地霉和假丝酵母的抗药性标记。白地霉抗性而假丝酵母非抗性的药物标记为曲咪新乳膏浓度为2×103μg/ml,假丝酵母抗性而白地霉非抗性的药物标记则为硫酸铜浓度为2×103μg/ml。 (2)双亲本菌株原生质体制备和再生条件的研究。利用单因素实验探讨影响白地霉和假丝酵母原生质体形成率和再生率的各种因素,结果表明制备原生质体的优化条件为:双亲本菌龄为对数生长中期、1.5%的纤维素酶酶解1小时、酶解温度30℃、脱壁促进剂为0.05%的半胱氨酸、渗透压稳定剂为0.7MNaCl。 (3)双亲本原生质体融合及融合子的鉴定。利用化学PEG方法使双亲本原生质体融合,通过影印法筛选得到50株融合子。连续传代10次,获得8株性状稳定的融合子,再通过油脂同化平板法筛选得到一株融合菌株,命名为CG16。通过比较双亲本及融合子CG16的菌落表型、显微结构,以及对融合子CG16全细胞可溶性蛋白电泳分析,结果表明融合子CG16是由双亲本原生质体融合得到的新菌株。 (4)融合子CG16固态发酵生产脂肪酶条件初步优化研究。通过单因素比较实验,对融合子CG16进行了固态发酵培养基成分和发酵培养条件的初步优化。结果表明固态发酵的优化培养基为:12g固体物质(麦麸:大豆粉=3:2),8 ml营养盐溶液(g/L:KH2PO47.07, Na2HPO422.06, MgSO4·7H2O 2.0, Na2CO3 2.0, NaNO37.07);发酵条件为:接种量为2%,30℃,初始pH7.0,培养72 h,产酶酶活达到82.22 U/g干物质,比亲本假丝酵母和白地霉的产酶活力分别提高了32%和171%。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:TQ925

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 王金主;高产脂肪酶菌株的选育研究[D];济南大学;2011年
2 方春雷;植物纤维废渣生物法生产燃料乙醇中试技术研究[D];山东轻工业学院;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘亚男;冯娜;薛璟花;吴萍;魏孝义;;白地霉的化学成分研究[J];热带亚热带植物学报;2008年01期
2 余碧娥,方丽;复方醋酸曲安奈德治疗慢性瘙痒性皮肤病临床观察[J];上海医学;2001年11期
3 劳继红,叶圣于;碱性脂肪酶对重油滞头原料的除油研究[J];丝绸;2002年09期
4 刘晶;韩清波;张耀广;;乳脂酶及其对乳制品品质的影响[J];食品工业科技;2006年04期
5 谈重芳;王雁萍;陈林海;李宗伟;秦广雍;霍裕平;;微生物脂肪酶在工业中的应用及研究进展[J];食品工业科技;2006年07期
6 张庆庆;晋青波;危勤涛;;原生质体紫外诱变脂肪酶高产菌株[J];食品工业科技;2008年04期
7 李灿明;黄时海;张云开;黄珊;齐辉连;陈桂光;覃拥林;梁智群;;灭活原生质体融合技术提高豆鼓纤溶酶菌产酶量[J];食品工业科技;2009年08期
8 杜木英;陈娟;阚建全;BATA-VIDACS Ildiko;BECZNER Judit;陈宗道;;青稞酒曲中酿酒酵母与假丝酵母原生质体形成与再生条件的研究[J];食品科学;2007年09期
9 汪小锋;闫云君;;固态发酵生产微生物脂肪酶[J];中国生物工程杂志;2009年01期
10 夏葵;曾虹燕;姜和;蔡联辉;黄理;;诱变选育脂肪酶高产菌株及其脂肪酶固定化[J];中国生物工程杂志;2009年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 单志文;应用原生质体技术筛选高产耐碱性的脂肪酶菌株的试验[D];浙江工业大学;2001年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘彦,谢艳娟,张明辉;两种低毒防霉剂用于蓝湿皮的防霉研究[J];皮革科学与工程;2005年01期
2 司笑丁;;浅谈啤酒复合酶制剂的质量标准[J];啤酒科技;2008年12期
3 林建城;酶在食品工业、轻工业和环境保护上的应用分析[J];莆田学院学报;2005年02期
4 朱一松,赵光鳌;葡萄酒风味与风味酶的研究[J];中外葡萄与葡萄酒;2002年06期
5 李晶华;王志亮;刘波;;生物柴油的排放特性试验研究[J];汽车工程;2008年07期
6 张大力;两种绿藻—长石莼和袋礁膜原生质体的制备、培养和融合的研究[J];山东海洋学院学报;1983年01期
7 王海英,林洪,叶眉,薛长湖,赵雪;固定化木瓜蛋白酶的研究及其应用[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2001年05期
8 胡毅;潘鲁青;;三疣梭子蟹消化酶的初步研究[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2006年04期
9 江晓路;杜以帅;王鹏;刘瑞志;杨学宋;吕青;;褐藻寡糖对刺参体腔液和体壁免疫相关酶活性变化的影响[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2009年06期
10 张雁平;鸡小肠食糜淀粉酶活性测定条件的探讨[J];青海畜牧兽医杂志;2002年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 于宏伟;马宏颖;贾英民;;中性蛋白酶高产菌株的诱变[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
2 农向群;吴正铠;;丝状真菌原生质体的分离再生和融合[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
3 陈红连;张娟;王红叶;蔡焰值;;虾头壳废料综合性精深加工工艺的研究[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
4 代惠萍;冯佰利;高小丽;高金锋;王鹏科;柴岩;;糜子根系衰老与活性氧代谢研究[A];中国作物学会2007年学术年会论文集[C];2007年
5 田寿乐;周俊义;薛晓敏;;不同贮温下冬枣果实软化衰老特征研究[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
6 刘永翔;刘作易;;戴氏绿僵菌原生质体的形成及再生[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
7 张长铠;牛钟相;刘建军;宫志远;张利宁;王玲玲;;第六篇 生物技术[A];2007-2008山东省学科发展报告[C];2008年
8 张天澍;李恺;张丽莉;王斌;;人工饲料对龟纹瓢虫消化酶活性的影响[A];2008年上海市动物学会学术会议论文集(一)[C];2008年
9 蔡兴奎;柳俊;谢从华;;细胞工程育种在马铃薯抗病育种中的应用[A];全国作物细胞工程与分子技术育种学术研讨会论文集[C];2003年
10 贺春良;于文;;超强稳定型蛋白酶在洗衣液中的应用[A];2004中国洗涤用品行业年会论文集[C];2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈若雯;高产胞外多糖乳酸乳杆菌的选育及其发酵条件的优化[D];华中农业大学;2010年
2 刘香江;重金属铜和镉(Cu和Cd)及乙酰甲胺磷对矛尾复虾虎鱼毒性效应的研究[D];华中农业大学;2010年
3 谢宙;刺糖多孢菌对剪切力抗性的初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 唐敏;高碳煤矸石与采残煤矿井下生物转化可燃气研究[D];河南理工大学;2010年
5 汪小艳;几株蛹草拟青霉原生质体制备及染色体核型研究[D];安徽农业大学;2010年
6 项宜娟;纤维床固定化酪丁酸梭菌产丁酸的研究[D];浙江理工大学;2010年
7 俞云峰;不同惰性载体上发酵产蜡蚧轮枝菌分生孢子生物特性的研究[D];浙江理工大学;2010年
8 陈辉;桦褐孔菌胞外多糖液体深层发酵及木质纤维素促进产糖效果的研究[D];浙江理工大学;2010年
9 于忠良;根霉ZM-10脂肪酶酶学性质和化学修饰[D];山东农业大学;2010年
10 崔光军;花生突变体种子皱缩形成机理及其遗传研究[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 丁荣;钟世安;李念;杨静娟;;基于氯化镁饱和溶液中固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化光皮树油脂合成生物柴油[J];燃料化学学报;2010年03期
2 王庭;秦刚;;脂肪酶及其在食品工业中的应用[J];肉类研究;2010年01期
3 肖舸,雷芳,喻东,唐成康,刘克武,国锦琳,曹威;一株产纤维素酶绿色木霉的筛选及发酵条件优化[J];四川大学学报(自然科学版);2004年02期
4 韩寒冰;李松佳;沈伟煌;彭翠苹;吴小梅;;生物柴油脂肪酶产生菌的筛选及培养条件研究[J];茂名学院学报;2010年01期
5 雷国光;;用纤维质原料生产燃料乙醇是我国再生能源发展的方向[J];四川食品与发酵;2007年01期
6 刘颖,邵红;纤维素酶产生菌的鉴定与筛选[J];饲料博览;2000年03期
7 刘德海 ,杨玉华 ,安明理 ,陈小鸽;纤维素酶酶活的测定方法[J];中国饲料;2002年17期
8 陈锋菊;谭树华;黄凤玲;贺玲;;产低温脂肪酶菌株Psychrobacter sp.7342的筛选及粗酶性质研究[J];生命科学研究;2010年03期
9 张强,赵文娟;液体发酵纤维素酶菌种的选育及产酶条件研究[J];陕西农业科学;2005年04期
10 赵玉萍;杨娟;;四种纤维素酶酶活测定方法的比较[J];食品研究与开发;2006年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 司武阳;磷脂酶A1产生菌的选育[D];安徽工程大学;2010年
2 刘川顺;谷氨酰胺合成酶产酶菌株的筛选[D];安徽农业大学;2010年
3 罗永生;固态混菌发酵纤维素酶工艺研究[D];郑州大学;2010年
4 于忠良;根霉ZM-10脂肪酶酶学性质和化学修饰[D];山东农业大学;2010年
5 桂春燕;耐盐碱产纤维素酶芽孢杆菌的选育及酶学特性的研究[D];山东农业大学;2010年
6 杨春燕;纤维素酶发酵生产及其降解秸秆性能研究[D];天津大学;2010年
7 王晓芳;产纤维素酶的真菌筛选与纤维素酶的诱导及其理化性质研究[D];南京师范大学;2002年
8 夏安;纤维素酶水解动力学及影响因素研究[D];四川大学;2002年
9 贺芸;产耐高温纤维素酶细菌的筛选及酶学性质研究[D];南京理工大学;2004年
10 范艳丽;纤维素降解菌的筛选及特性研究[D];武汉科技大学;2004年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 郭倩倩;吴拥军;卢彪;韩丽珍;;餐厨垃圾堆肥发酵菌株筛选[J];山地农业生物学报;2012年02期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王怡平,荚荣,陈伟元,凌芸,徐怀恕;球形红假单胞菌和荚膜红假单胞菌的原生质体融合[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2000年02期
2 余荔华,刘进元,赵南明;克氏固氮菌与枯草芽孢杆菌的原生质体电融合[J];清华大学学报(自然科学版);1999年06期
3 范洪;王立新;侯英荣;;已婚育龄妇女生殖道感染后的危险因素研究[J];中国全科医学;2005年23期
4 马玲,刘会平;干酪中风味化合物的形成及其影响因素[J];乳业科学与技术;2005年04期
5 张大勇;大剂量甲基托布津对家蚕的危害[J];四川蚕业;2002年03期
6 张广志;杨合同;李纪顺;陈凯;扈进东;黄玉杰;;褐球固氮菌和荧光假单胞菌原生质体制备条件的研究[J];山东科学;2006年06期
7 韩风华;;酱油生产如何制好曲[J];山东食品发酵;2002年01期
8 黄勤妮,刘佳,宋秀珍,杨秀山;大肠杆菌和枯草芽胞杆菌的原生质体融合[J];首都师范大学学报(自然科学版);2002年01期
9 柳欣琦,颜卫荣;快速尿胰蛋白酶原-2检测在急性胰腺炎早期诊断中的应用价值[J];山东医药;2002年10期
10 郑强;王竞;沈子威;赵南明;;细胞融合技术的新进展[J];生物工程学报;1989年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 林树梅;白地霉2.498与白腐真菌5.776原生质体融合[D];沈阳农业大学;2004年
2 周海霞;灭活原生质体融合选育α-ALDC-高产菌株[D];河北大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张惠玲;吴素萍;;L-苏氨酸产生菌的原生质体融合育种研究[J];中国酿造;2011年07期
2 龙建友;唐世荣;吴文君;;原生质体融合技术对秦岭霉素产量提高的影响[J];中国农业科学;2007年07期
3 王宜庆;;细胞融合育种技术综述[J];江苏食品与发酵;1985年02期
4 王登宇;臧威;孙剑秋;蒋本庆;王鹏;李铁;;细菌原生质体融合育种技术及其应用进展[J];中国酿造;2008年07期
5 陈娟;阚建全;杨蓉生;杜木英;;原生质体融合技术及其在果酒酵母育种上的应用[J];食品研究与开发;2010年09期
6 王艳江;王选良;江洁;刘颖;刘惠珍;王梦林;尚玉馨;王积鹏;宇仁芳;;谷氨酸生产菌原生质体制备及其融合[J];江苏食品与发酵;1989年01期
7 王燕;张文学;;酿酒酵母LⅡ-E12与高糖化力白曲霉ZZH原生质体融合研究[J];中国酿造;2011年03期
8 张琇;王永娟;马爱瑛;张丽琴;;灵武长枣果酒酿酒酵母与红酵母原生质体融合的研究[J];西北农业学报;2011年06期
9 王鲁燕,宋正昭,张颖,顾觉奋;黑暗链霉菌原生质体融合[J];江苏药学与临床研究;1996年04期
10 李明元;李明华;;米曲霉原生质体融合条件的优化研究[J];食品科技;2009年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱昌雄;谢德龄;粟燕;倪楚芳;;利用原生质体融合技术选育农抗120高产菌株及应用的研究[A];全国生物防治学术讨论会论文集[C];1991年
2 张嫒莉;孟威;刘艳;闫国栋;;蛹虫草原生质体融合高产菌株的筛选[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
3 罗红霞;黄彦芳;王芳;孙玉清;王建;;抗酸奶后酸化乳酸菌菌株选育研究进展[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年
4 张兴国;陈劲枫;刘佩瑛;李向辉;孙勇如;李文彬;;黄瓜和南瓜原生质体融合得到愈伤组织[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
5 余志晟;张洪勋;庄绪亮;;运用原生质体融合技术构建内醚糖乙醇发酵菌株的初步研究[A];微生物生态学研究进展——第五届微生物生态学术研讨会论文集[C];2003年
6 张广志;杨合同;李纪顺;陈凯;扈进东;黄玉杰;;褐球固氮菌和荧光假单胞菌原生质体制备条件的研究[A];山东农业微生物技术学术研讨会论文集[C];2006年
7 张建萍;张正波;赵航;余柳青;;弯孢与突脐蠕孢原生质体融合及融合子基因鉴定[A];农业生物灾害预防与控制研究[C];2005年
8 金红;贾敬芬;郝建国;;沙打旺与首蓿原生质体融合再生属间体细胞杂种[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
9 戴雪梅;黄霞;陈云凤;黄学林;;大蕉与巴西蕉胚性细胞悬浮系的建立及其原生质体融合的研究[A];全国“植物生物技术及其产业化”研讨会论文摘要集[C];2007年
10 夏光敏;陈惠民;;簇毛麦原生质体培养及融合[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 陈素华 刘占洪;广泛应用于农业的生物技术[N];山东科技报;2002年
2 丁湖广;珍菇松茸的特性及人工驯化栽培技术[N];福建科技报;2006年
3 记者 西林;生物医药欲为京城经济新支点[N];中国企业报;2001年
4 温鲁;食用菌生产技术进展[N];中国绿色时报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 廖劲松;原生质体融合提高玫瑰茄细胞生长速率的研究[D];华南理工大学;2004年
2 谢志鹏;发酵法生产米多霉素的菌种选育、培养条件优化和动力学研究[D];浙江大学;2005年
3 龙淼;耐酸性反刍兽月形单胞菌构建及对瘤胃微生物发酵的影响[D];吉林大学;2009年
4 蔡兴奎;原生质体融合创造抗青枯病的马铃薯新种质及其遗传分析[D];华中农业大学;2004年
5 江年琼;三白草和鱼腥草原生质体融合的研究[D];中南林学院;2002年
6 彭仁;耐有机溶剂脂肪酶的筛选、重组表达及其催化特性研究[D];华东理工大学;2010年
7 田小群;红发夫酵母(Phaffia rhodozyma)的诱变和原生质体融合及发酵优化研究[D];华南理工大学;2003年
8 严成其;体细胞杂交创建表达高抗白叶枯病基因的水稻新种质[D];浙江大学;2005年
9 龙建友;秦岭链霉菌开发利用的前期基础研究[D];西北农林科技大学;2006年
10 袁玉兰;富铁酵母工程菌的构建及细胞中铁的生物转化、分布和结合状态的研究[D];四川大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张莉滟;双歧杆菌与乳杆菌原生质体融合的初步研究[D];重庆医科大学;2002年
2 黎永学;双歧杆菌和酿酒酵母原生质体融合的研究[D];重庆医科大学;2002年
3 高鹤;脂肪酶产生菌的细胞融合选育及其产酶条件优化[D];南昌大学;2010年
4 赵炜;利用原生质体技术选育聚β羟基丁酸高产菌株和发酵条件的研究[D];西北大学;2004年
5 王春平;鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌融合菌株的构建及其双重PCR检测方法的建立[D];山东农业大学;2009年
6 丛国正;原生质体融合技术构建禽霍乱双型链依型菌株[D];甘肃农业大学;2001年
7 朱惠;纳他霉素产生菌基因组重排育种[D];浙江大学;2006年
8 郑宗宝;基于基因组重排技术的红法夫酵母虾青素高产株选育[D];天津大学;2008年
9 郭俊红;利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究[D];华中农业大学;2010年
10 牛艳芳;蒙古口蘑与双孢蘑菇原生质体融合育种研究[D];内蒙古师范大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026