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鸦胆子有效部位的提取、分离纯化及其抗肿瘤活性研究

欧阳辉桂  
【摘要】: 鸦胆子系苦木科鸦胆子属植物(Brucea Javanica Merr(L.))鸦胆子的成熟果实。近年来,它作为一种抗肿瘤天然药物,已引起了研究人员的广泛关注。本文主要围绕鸦胆子有效部位的提取、分离纯化及其抗肿瘤作用而展开,其试验结果主要如下: 采用溶剂加热回流提取方法,以无水乙醇为提取溶剂对鸦胆子中水溶性成分进行了提取。以鸦胆子苦味浸膏得率为考察指标,以提取温度、液料比、提取时间、提取次数为考察因素,采用正交试验法L9(34)确定了最佳提取工艺:提取次数3次,液料比7:1,提取时间每次2h,提取温度60℃。在此工艺参数条件下,苦味浸膏得率达到17.4%。 以鸦胆苦醇为对照品,运用香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法对鸦胆子中总三萜类物质含量进行了测定。并从仪器精密度、重复性、稳定性和平均加样回收率四方面,考察了该方法的可行性。试验结果分别如下:仪器精密度RSD 0.70%、重复性RSD 1.32%、稳定性RSD 4.19%、平均加样回收率RSD 1.17%,,四个方面的RSD都小于5%。由此表明,该方法所测数据可靠性高,结果重现性好,为鸦胆子及其提取物的内在质量控制方法建立提供了方法学上的保障。经该方法测得鸦胆子苦味浸膏总三萜类物质成分的平均含量为3.68%。 通过液-液分配萃取试验,将鸦胆子苦味浸膏分为Cpl.Cp2、Cp3、Cp4、Cp5、Cp6共6个部位;通过体外细胞增殖抑制试验,确定了抑瘤活性最强部位为三氯甲烷层Cp2。以Cp2部位为进一步分离纯化对象,经硅胶柱纯化后得到Cp2a、Cp2b、Cp2c、Cp2d共4组分;通过MTT和SRB方法,以HL-60人白血病、BGC-823人胃癌、BeL-7402人肝癌、KB人鼻咽癌为实验细胞株试验它们的体外抑瘤活性。结果表明,在相同浓度下Cp2d组分的体外抑瘤活性均强于其余三个组分。 以鸦胆苦醇为对照品,利用HPLC分析了Cp2d组分的主要成分,结果表明:Cp2d组分中的主要成分为鸦胆苦醇。


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