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初级感觉神经元血管内皮生长因子及其受体在神经病理痛中的作用研究

林加日  
【摘要】: 目的神经病理性疼痛过程复杂,P2X3和P2X2/3受体在慢性病理痛的伤害性信息传递中发挥重要作用。本研究在初级感觉神经元P2X3和P2X2/3受体介导下探讨VEGF及其受体(VEGFR-2)在神经病理痛中的作用。 方法建立右侧坐骨神经结扎损伤模型。SD雄性大鼠随机分为三组:假手术组(Ⅰ)(Sham group,Ⅰ),坐骨神经慢性压迫性损伤神经病理痛模型(chronic constriction injury,CCI)(Ⅱ)(CCI group,Ⅱ)和anti-rVEGF处理神经病理痛模型组(Ⅲ)(CCI+anti-rVEGF group,Ⅲ)。采用鞘内注射方法对Ⅰ和Ⅱ组注入磷酸盐缓冲生理盐水(PBS),Ⅲ组注射anti-rVEGF。每隔两天测量大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)的变化,第15天急性分离取出大鼠脊髓L4-6背根神经节,通过原位杂交、RT-PCR、免疫组织化学和蛋白印迹分析方法分别检测L4-L6背根神经节(dorsal root ganglia, DRG) P2X2、P2X3、VEGF和VEGFR-2的表达。 结果行为学实验显示Ⅱ组的MWT和TWL均明显低于Ⅰ组和Ⅲ组(p0.05);原位杂交结果显示Ⅱ组L4-L6 DRG的P2X2、P2X3、VEGF和VEGFR-2的mRNA阳性细胞平均光密度值均高于Ⅰ组和Ⅲ组(p0.05);RT-PCR检测显示在目的条带经β-actin标化后Ⅱ组L4-L6 DRG的P2X2、P2X3、VEGF和VEGFR-2的mRNA表达均高于Ⅰ组和Ⅲ组(p0.05);免疫组化结果显示Ⅱ组L4-L6 DRG的P2X2、P2X3、VEGF和VEGFR-2的阳性细胞平均光密度值均高于Ⅰ组和Ⅲ组(p0.05);蛋白印迹分析表明在目的条带经β-actin标化后Ⅱ组L4-L6 DRG的P2X2、P2X3、VEGF和VEGFR-2的蛋白表达均明显高于Ⅰ组和Ⅲ组(p0.05)。而Ⅲ组L4-L6 DRG的P2X2、P2X3、VEGF和VEGFR-2的mRNA和蛋白表达量略高于Ⅰ组(p0.05)。 结论CCI组大鼠DRG内P2X2、P2X3、VEGF和VEGFR-2表达增强,CCI大鼠鞘内注射anti-rVEGF后大鼠后爪机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)明显升高,同时P2X3和P2X2/3受体表达减小,提示VEGF及其受体(VEGFR-2)可能在神经病理痛发病过程中发挥作用,其作用机制可能涉及P2X3和P2X2/3受体。


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