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《天津医科大学》 2011年
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细胞融合诱导上皮源性肿瘤发生的实验研究

李保松  
【摘要】:目的:细胞融合在肿瘤发生和进展中的作用值得重视,融合可能诱导产生肿瘤干细胞。本研究体外培养人正常胃粘膜上皮细胞系(GES-1)及脐带、脐血来源间充质干细胞(CM-MSCs、CB-MSCs),探索胃粘膜上皮细胞与CM-MSCs及CB-MSCs融合参与上皮细胞恶性转化的可能,探索肿瘤干细胞的起源。 方法:体外培养GES-1细胞,免疫荧光染色鉴定上皮特异性角蛋白18(CK-18)在GES-1细胞表达情况。脐带及脐血来源间充质干细胞的培养,探索间充质干细胞的培养条件,观察间充质干细胞生长特性。流式细胞分析间充质干细胞表型分子Thy-1 (CD90)、SH2(CD105)、SH4(CD73)、HLA-ABC、HLA-DR、CD34、CD45表达。PKH26标记GES-1,CFSE分别标记CM-MSCs及CB-MSCs,50%PEG诱导CM-MSCs及CB-MSCs与GES-1体外融合,流式细胞仪分选双阳性融合细胞。观察融合细胞生长特性,免疫荧光及流式细胞仪鉴定融合细胞CK-18及细胞表面抗原CD90表达情况。划痕实验及transwell检测融合细胞侵袭、迁移能力。融合细胞注射至裸鼠体内验证成瘤能力。 结果: 1.脐血内可获得CB-MSCs,细胞形态第一代时为圆形及梭形,传代后变为纺锤形及多角形,贴壁能力较强,具有很强的自我更新能力,本实验观察其可在体外传至25代。 2.流式细胞技术分析CM-MSCs、CB-MSCs细胞表面免疫表型特征为:SH2(CD105)、SH4(CD73)、HLA-ABC强阳性,CD90弱阳性,、HLA-DR、CD45、CD34阴性,与文献报道相符。 3.细胞经聚乙二醇体外融合可由流式细胞仪分选融合细胞,本实验CM-MSCs与GES-1细胞融合率为3%,CB-MSCs与GES-1细胞融合率为8.7%。分选后融合细胞三天内高表达标记的红荧光及绿荧光,形态不规则,可见巨大融合细胞。两周后细胞开始增殖,增长迅速,可稳定传代。 4.GES-1与CM-MSCs及CB-MSCs的融合细胞胞浆高表达CK-18,融合细胞形态发生改变,细胞核增大,胞浆减少,呈现恶性肿瘤细胞特性。GES-1细胞表面不表达CD90,而CB-MSCs、CM-MSCs及其与CES-1的融合细胞均表达CD90。通过免疫荧光及细胞表面抗原CD90的鉴定证实所分选的细胞为融合细胞。 5.DNA倍体分析结果示融合细胞为多倍体及非整倍体细胞,随细胞代数的增长,非整倍体细胞所占比例增加。 6. CM-MSCs与GES-1的融合细胞增殖活性较CM-MSCs及GES-1明显增强;获得向基质胶侵袭的能力,迁移与侵袭能力增强;融合细胞注射至BaLb/C裸鼠腋下,可在裸鼠皮下形成肿瘤结节,HE染色病理证实为肿瘤组织 结论:MSCs和GES-1在PEG2000刺激下可产生融合细胞。细胞融合后形态发生改变,具有GES-1及MSCs二者的表型。胞浆表达CK-18,表面抗原CD90阳性。融合细胞增殖活性较CM-MSCs及GES-1明显增强,具有向基质胶侵袭的能力,迁移与侵袭能力增强。融合细胞可在裸鼠皮下形成肿瘤结节,表明间充质干细胞和上皮细胞融合可导致上皮细胞的恶性转化。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R730.2

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