收藏本站
《天津医科大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

肺癌细胞总RNA转染DC体外诱导肺癌患者抗瘤免疫的实验研究

李琤  
【摘要】: 目的: 充分利用人体外周血来源的树突状细胞(dendritic cells,DCs)强大的抗原提呈能力和激活T细胞尤其是初始型T细胞的能力,用肺癌细胞系Calu-6总RNA转染DC制成一种治疗性疫苗,观察这种疫苗体外诱导肿瘤患者抗原特异性抗瘤免疫的能力。 方法: 采集肺癌患者外周白细胞富集血,分离出单个核细胞,用贴壁方法分离单核细胞和淋巴细胞。非贴壁细胞一部分用小量IL-2维持生长,另一部分培养成为LAK细胞留作对照。贴壁的单核细胞在完全培养基加rhGM-CSF,rhIL-4及rhTNF-a的培养条件中培养7天获得成熟DC,光学显微镜及透射电镜下观察DC的形态,流式细胞仪确认成熟DC的表面标志。从肺癌细胞系Calu-6中提取总RNA,并通过参照基因GAPDH的RT-PCR结果来鉴定总RNA中mRNA的存在。不加TNF-a且只培养5天,经流式细胞仪鉴定为未成熟DC者用来转染肺癌细胞系Calu-6总RNA,转染时RNA需用脂质体包裹。流式细胞仪测定转染前后DC表面标志的变化。混合淋巴细胞增殖实验(MLR)比较转染前后的DC刺激异基因淋巴细胞增殖功能的差别。ELISA法测定转染前后DC分泌IL-12量的变化。转染后的DC与自体T淋巴细胞混合,诱导T淋巴细胞扩增为Calu-6抗原特异性CTL,流式细胞仪分析刺激前后淋巴细胞成分变化。LDH法测定CTL的杀伤活性,杀伤实验中的靶细胞使用Calu-6 RNA转染的DC(DC/Calu-6-RNA),对照组用胃癌细胞系823 RNA转染的DC 天津医科大学硕士研究生论文 (DC/823-RNA),以及不经转染只加入脂质体的DC,比较CTL对这 三种靶细胞的杀伤率,此外还用这种CTL与LAK细胞同时杀伤 DC/Calu七-RNA和DC用23-RNA,比较特异性杀伤和非特异性杀伤的 差别。用 *O*dU-6-RN A、**用23JINA 和OC 分别再次刺激 0**dU6伽A致敏的**L,*u*A法分别检测三组**L分泌117N- Y的浓度。 结果: 提取肺癌细胞Calu-6总NA后,电泳显示RNA完整未降解,参 照基因GAPDH的RT-PCR结果证实总RNA中InRNA的存在。培养 的成熟单核细胞来源DC在光学显微镜和透射电镜下可见其细胞膜具 有树伎状突起的典型形态。流式细胞仪分析结果显示,与加 TNF-Q培 养 7天的DC相比,不加 TNF-口培养 5天的 DC特征性表面标志均未 达到成熟,符合转染用DC的要求。转染肺癌细胞系总RNA后,DC 的特异性表面标志CD,CD83及呈递功能相关表面标志CD86 (B7-2),HLA-DR表达均较未转染的DC升高,MLR结果显示DC 转染RNA后刺激异基因T淋巴细胞增殖的能力比未转染时增强,这 些都说明KNA转染DC后促进了未成熟DC向成熟DC方向的发展, 抗原提呈能力增强,而未转染组无这种变化,间接说明了RNA在DC 中得到了表达。Calu-6总RNA转染DC刺激自体淋巴细胞5天后 *D矿T细胞比例上升巾刃刀5),诱导出的**L对具Culu*抗原的特 异性靶细胞DC/C:IU-6-NA的杀伤率在效靶比40:l,20:l和10:l时 均明显高于对具非特异性抗原的靶细胞DC/823-RNA及单纯DC的杀 伤率巾吻刀5),在40*和20:1时也高于LAK细胞对DCCulll6-RNA 和 DC侣23-RNA的杀伤率(p<0刀5人但 LAK细胞对 DC/CalU6-RNA 和DC/823-RNA 的杀伤率高于CTL 对DC/823-RNA 的杀伤率 -4- 天律医科大学硕士研究生论文 …吻.05人经DCC 七-RNA致敏的CDS\细胞在受到同种抗原的 再次刺激下可以分泌IFN-Y,其浓度明显高于无关抗原DC/823-NA 刺激或单独用DC刺激致敏CDS”T细胞后分泌的IFN、Y(p<0刀5人 结论: 肺癌细胞系Calu-6总RNA体外转染肺癌患者外周血单核细胞来 源的DC后,可以促进DC的成熟,并有效刺激T淋巳细胞增殖分化 为具有杀伤能力的抗原特异性CTL,特异性杀伤携带Catu-6肿瘤抗原 的靶细胞**/*dU-6-N A,这种特异性杀伤活性强于L*K细胞对这 种靶细胞的非特异性杀伤,并且这种*dU七特异性**L对于携带无 关抗原的靶细胞 DC/823-NA也无特异性杀伤。Calu-6 NA转染 DC 后致敏的CDS+T淋巴细胞在同一抗原的再次刺激下可以有效分泌促 进杀伤和吞噬的淋巴因于IFN-Y,分泌量高于用DC/823-RNA再次刺 激*劝U乃致敏*D矿T细胞分泌的WNWN-Y …叼刀5人本研究说明肺癌 细胞总NA转染DC在体外实验中是一种有效的治疗性肺癌疫苗,可 以诱导特异性抗瘤免疫杀伤肿瘤细胞,
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R734.2

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 鲁严,qqo.net;不同形式的肿瘤抗原负载树突状细胞的比较[J];癌症;2000年07期
2 陈国友;LAK细胞识别、结合及杀伤肿瘤细胞分子机制的研究进展[J];国外医学(免疫学分册);1994年03期
3 李明松,袁爱力;树突状细胞体外诱导高效而特异的抗肿瘤免疫[J];实用癌症杂志;1998年02期
4 杨德昌,杨拴盈;肺癌诊断水平的现状与进展[J];中华结核和呼吸杂志;2001年08期
5 章卫平,曹雪涛,黄欣,王建莉,张明徽,叶天星;基因修饰的树突状细胞融合后的瘤苗抗肿瘤免疫应答的实验研究[J];中华医学杂志;1997年01期
6 朱学军,曹雪涛,于益芝,陈国友,万涛,马施华,唐华,章卫平;人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1997年04期
7 曹雪涛;树突状细胞与肿瘤的免疫治疗和基因治疗——树突状细胞的细胞与分子生物学Keystone会议(美国)简介[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1998年02期
8 徐琪,邵莹,张乃宁,李霈霈,郝希山;肿瘤患者自体树突状细胞的建立[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1999年03期
9 王月丹,谢玮,邱玉华,顾宗江,张学光;CD40分子在树突状细胞抗人多发性骨髓瘤免疫应答中的作用及其机理[J];中国免疫学杂志;2000年09期
10 王国强,钟翠平,傅继东,范强,张新华,吴超群,顾云娣;小鼠肝癌总RNA转染的树突状细胞体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的研究[J];中国免疫学杂志;2002年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 任金荣,孙丽霞,杨淑琴,何兰欣,艾军;食管癌及其癌前病变患者血清补体总活性与红细胞CR1表达及临床意义分析[J];癌变.畸变.突变;2004年02期
2 孙丽霞;任金荣;单保恩;李元振;何兰欣;艾军;;大黄制剂对小鼠的急性毒性和自然免疫调节作用[J];癌变.畸变.突变;2006年01期
3 尹荣焕;白文林;吴长德;潘树德;刘丽霞;张文亮;;喹乙醇对小鼠免疫器官及红细胞免疫功能的影响[J];安徽农业科学;2007年03期
4 胡建国,侯彦强,陈勇,闵宏林,宋秀宇,李柏青;MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞体外增殖和杀瘤活性比较[J];蚌埠医学院学报;2001年05期
5 徐伟刚,胡梅齐,陆群;血清TSGF、CEA、CA242、CA19-9联合检测对消化道恶性肿瘤的诊断价值[J];蚌埠医学院学报;2004年02期
6 颜培宇;于晓红;张德山;闻杰;;黄芪总黄酮对免疫功能低下小鼠T细胞极化的影响[J];浙江中医药大学学报;2008年02期
7 张葛;花宝金;;晚期大肠癌中医药治疗研究进展[J];北京中医药;2012年06期
8 陈玉丙,张红梅,刘林林,范洪学;小鼠骨髓干细胞体外诱导成熟的树突状细胞对T细胞增殖的影响[J];吉林大学学报(医学版);2004年03期
9 胡素贤,黄瑾;实验性哮喘小鼠T淋巴细胞对B淋巴细胞产生特异性IgG的调节作用[J];吉林大学学报(医学版);2005年05期
10 吉蕾,邢佩霓,李梅生;树突状细胞与白血病的免疫治疗[J];白血病;2000年06期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 王毓玉;杨天鹏;应奇才;俞毅君;丁敏;郑婷;王艳芳;;聚丙烯酰胺水凝胶注入兔体的免疫效应研究[A];医用聚丙烯酰胺水凝胶(奥美定)论文汇编(第二辑)[C];2002年
2 郭芳;陈雁南;周岩民;;鸡免疫应激的研究进展[A];第十一届全国家畜环境科学讨论会论文集[C];2008年
3 潘学武;;术中5-FU植入剂并术后中药辅助治疗直肠癌28例的体会[A];江西省第二届胃肠外科学术会议暨江西省第十二次中西医结合普通外科学术会议论文汇编[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 颜培宇;不同穴位针刺对免疫抑制大鼠神经肽相关基因表达及免疫调节作用的分子机制研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 王琳;新等位基因HLA-B~*15:133的鉴定、重链胞外区多肽的原核表达及特异性单克隆抗体的制备[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2010年
3 王克玲;FOXP3基因过表达腺病毒转染未成熟树突状细胞对实验性变态反应性脑脊髓炎免疫耐受作用的研究[D];河北医科大学;2011年
4 李金成;健康成人乙型肝炎病毒疫苗接种后无应答者免疫功能研究[D];中南大学;2009年
5 沈明;负性共刺激分子B7-H1在A2B5阳性人脑胶质瘤干细胞样细胞中的负性调控作用探讨[D];复旦大学;2011年
6 张衡;不同亚型流感病毒NS1与PSD-95相互作用及对神经元NO的影响[D];汕头大学;2011年
7 李亦梅;包虫病所致过敏性休克患者免疫学保护性因素的研究[D];新疆医科大学;2011年
8 王忠敏;影像引导下~125I放射性粒子组织间植入治疗胰腺癌的基础和临床研究[D];苏州大学;2011年
9 王正昕;肿瘤微环境中浸润性树突状细胞的表型和免疫学功能的研究及其临床意义[D];第二军医大学;2000年
10 沈建良;脐血树突状细胞体外诱导抗白血病细胞毒效应[D];军医进修学院;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张毅;基于危险理论的入侵检测算法研究[D];郑州大学;2010年
2 邹玉红;高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏DC及其体外诱导T细胞产生IFN-γ的研究[D];泰山医学院;2005年
3 杨雪;高强度聚焦超声制备DC瘤苗及其治疗作用和促肿瘤凋亡作用的实验研究[D];泰山医学院;2007年
4 於锦;呼出气体及其冷凝物中肺癌标志物及其检测方法的研究[D];浙江大学;2011年
5 苏红权;血清CA19-9在肝外恶性梗阻性黄疽的诊断价值[D];广西医科大学;2011年
6 王亚敏;维生素B_(12)对复发性口腔溃疡大鼠IL-6表达影响的研究[D];山西医科大学;2011年
7 王雯;基于黄芩抗流感病毒研究的中药药效影响因素探讨[D];北京中医药大学;2011年
8 胡小明;改良湿疹膏外用治疗慢性湿疹的临床研究[D];北京中医药大学;2011年
9 袁建菱;妇科千金片对大鼠急性盆腔炎抗炎机理的实验研究[D];湖南中医药大学;2011年
10 李频;人CD80-IgG1Fc融合蛋白的表达、鉴定及其诱导的抗肿瘤效应[D];福建医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 李龙芸,汪斌超,陈勇,姚连昌,操乐杰,王瑜玲,毛琦善;改良Saccomanno法用于肺癌患者痰标本处理的应用体会[J];中国肺癌杂志;2000年04期
2 傅继东,钟翠平,王国强,范强,顾云娣,张新华;肝树突状细胞与骨髓树突状细胞体外生物免疫特性的比较研究[J];解剖学报;2000年S1期
3 王国强,钟翠平,范强,傅继东,顾云娣,黄辉,叶胜龙;小鼠肝癌抗原粗提物致敏树突状细胞体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的研究[J];解剖学报;2000年S1期
4 吴刚,余宏,韩本立,裴雪涛;树突细胞从凋亡癌细胞获取抗原后的免疫应答[J];免疫学杂志;2000年01期
5 王翎,王光杰,夏学鸣,马家用,王晖,张炜;痰液癌基因突变的检测在肺癌诊断中的应用[J];中华结核和呼吸杂志;1998年04期
6 裴雪涛,王立生,徐黎,冯凯,李梁,龙红,吴祖泽;CD_(34)~+造血祖细胞的定向诱导分化研究[J];中华血液学杂志;1998年06期
7 章卫平,曹雪涛,黄欣,王建莉,张明徽,叶天星;基因修饰的树突状细胞融合后的瘤苗抗肿瘤免疫应答的实验研究[J];中华医学杂志;1997年01期
8 曹雪涛;抗原提呈细胞与肿瘤生物治疗[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1997年03期
9 章卫平,曹雪涛,张明徽,黄欣,朱学军,叶天星;GM-CSF重组腺病毒扩增的骨髓树突状细胞体外经肿瘤抗原刺激后诱导抗肿瘤免疫应答[J];中国免疫学杂志;1997年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 关钧,范慕贞,曹淑兰;ODC反义RNA转染细胞的肿瘤相关基因表达及其致瘤性[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1995年04期
2 杨雪超;樊明文;;人骨形成蛋白7荧光真核表达载体的构建及体外生物学活性检测[J];中华口腔医学杂志;2006年04期
3 林观平;熊亮;李树梅;黄金文;周克元;;PTEN磷酸酶活性对乳腺癌细胞ZR-75-1迁移能力的影响[J];肿瘤;2007年10期
4 段艳;王冰;崔韶辉;赵不凋;姜云霞;杨颖;姜慧明;张树彪;;阳离子脂质体转染Hela细胞的实验[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年11期
5 雷炳喜;赵义营;牛江涛;邓跃飞;;pEGFP-ING4真核表达载体的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达[J];中国微侵袭神经外科杂志;2011年01期
6 徐海燕,於葛华,刘琳,郑路,李文香,施勤,邱玉华,张学光;人Blys转染细胞对B细胞功能的影响[J];现代免疫学;2005年02期
7 安英华;孙树汉;张治;朱彦琪;张建军;;血管内皮生长因子基因转染促进骨髓间质干细胞增殖的实验[J];中国临床康复;2006年41期
8 刘官智;伍津津;朱堂友;鲁元刚;杨亚东;杨桂红;;外源性人端粒酶逆转录酶基因转染对正常人毛乳头细胞的影响[J];第三军医大学学报;2008年03期
9 王兴旺;药物敏感基因与肿瘤的化学治疗[J];中国肿瘤临床;1996年09期
10 陈伟红,丁劲,宫卫东,聂青和,王九平,周永兴;内源性TNF-α对HBV转染细胞HLAⅠ表达的诱导作用[J];中华微生物学和免疫学杂志;2004年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡忠良;文继舫;;TGIF基因转染对胃癌细胞蛋白表达谱的影响[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
2 闫晓明;李勇杰;关云谦;张愚;;人重组NT-3基因体外转染胚胎干细胞及其表达[A];中国医师协会神经外科医师分会第二届全国代表大会论文汇编[C];2007年
3 刘可人;吴士良;;人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年
4 韩艳辉;徐世文;;鸡硒蛋白W基因对过氧化氢诱导的CHO-K1凋亡的影响[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
5 郑煜煌;张春迎;何艳;李慧;谌资;刘猛;周华英;刘纯;李靖;尹伟;袁宏丽;;不同变异位点的HIV-1 vpr重组真核表达载体对转染细胞凋亡作用的观察[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年
6 陶谦;吕标;乔彬;郑超群;陈之锋;;转染hTERT永生化成釉细胞瘤细胞的生物学特性[A];第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编[C];2009年
7 郭丽萍;房殿春;张汝钢;罗元辉;;hTERT干扰促肝癌HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的动态演变[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
8 王敬春;王惠民;丁伟峰;孙宝兰;景蓉蓉;;裸鼠移植瘤实验研究APRIL在人结直肠癌中的作用[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
9 张会来;王华庆;孙燕;宋拯;刘贤明;郝希山;;BCRP高表达耐药细胞系的建立及其耐药机制的初步研究[A];第十一届中国抗癌协会全国淋巴瘤学术大会教育论文集[C];2009年
10 章军辉;陈永强;汤亭亭;楼觉人;郝永强;郁朝峰;戴尅戎;;透明质酸复合BMP-2转染兔骨髓基质干细胞的体内外成骨研究[A];2004年浙江省骨科学术会议论文汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张中桥;四军医大西京医院成功建立胃癌GC9811P-GFP细胞株[N];中国医药报;2006年
2 吴一福;四军医大构建HBV全基因克隆质粒细胞系[N];中国医药报;2006年
3 冯世容;CD95基因转染可提高胰腺癌对化疗药物敏感性[N];中国医药报;2001年
4 张中桥;反义技术抑制COX-2过表达可逆转膀胱癌细胞恶性表型[N];中国医药报;2006年
5 黄馨;“不死基因”能抗衰老?[N];保健时报;2007年
6 张中桥;纳米微囊载体具有基因治疗应用潜能[N];中国医药报;2004年
7 吴一福;四军医大成功建立HCV多表位基因P815细胞系[N];中国医药报;2006年
8 张中桥;纳米微囊载体用于基因治疗[N];健康报;2005年
9 医药互联网;X-SCID基因治疗亮起“红灯”[N];中国医药报;2002年
10 李思维;班丽丽;内皮抑素治疗肿瘤喜中有忧[N];中国医药报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 费宇杰;CD151-整合素α3β1/α6β1复合体体外促进HepG2细胞增殖、侵袭中的作用及机制[D];华中科技大学;2012年
2 刘嵘;TIM-3对人气道上皮细胞株16HBE的NF-κB及炎症相关因子表达水平调控的研究[D];华中科技大学;2010年
3 张勇;靶向Stat3的合成MicroRNA转染胰腺癌细胞的实验研究[D];苏州大学;2011年
4 周勇;水动力转染技术在IFNβ-Luc小鼠模型与HBV树鼩模型研究中的应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
5 吴鹏翠;肌细胞增强因子2A对血管内皮细胞功能的影响及其机制探讨[D];中南大学;2010年
6 万亚峰;肝细胞癌AFPmRNA转染CD40配体活化的B细胞诱导抗肿瘤免疫的实验研究[D];华中科技大学;2010年
7 盛建飞;hTERT非端粒酶依赖途径调控喉鳞癌细胞凋亡的研究[D];武汉大学;2012年
8 孙云;IL-33过表达对鼠脑胶质瘤生长的抑制作用及其机制的相关研究[D];华中科技大学;2013年
9 程露;鼠源Fcε-Fcγ融合蛋白的瞬时基因表达、大量制备及其对小鼠的抗过敏作用[D];华东理工大学;2011年
10 东洁;miR-21对胰腺癌细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响及其作用机制[D];北京协和医学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 何彩霞;新型非病毒基因转染体系的构建及其在骨髓间充质干细胞基因重组中的应用[D];浙江大学;2011年
2 邹颜阳;Sulfiredoxin-1经Nrf2/ARE通路保护PC12细胞氧化损伤的机制研究[D];重庆医科大学;2013年
3 毛志荣;Tim-3对H.pylori作用的鼠源性巨噬细胞内TLR4信号通路的影响[D];南昌大学医学院;2013年
4 范丽;转染有骨形成蛋白-2、7真核表达载体的MG 63细胞与壳聚糖膜组合的生物学性能研究[D];浙江大学;2011年
5 李盈凯;IκBα-M基因诱导舌鳞癌Tca-8113凋亡的相关研究[D];山东大学;2011年
6 杜雷;重组9型腺相关病毒转染大鼠心脏成纤维细胞及对NF-κB通路的影响[D];新疆医科大学;2010年
7 魏丹;Ad-HGF转染大鼠脑膜间皮细胞的效率与细胞活性研究[D];新乡医学院;2013年
8 徐兴超;猪的转腺苷一磷酸脱氨酶1基因细胞系的制备[D];东北农业大学;2011年
9 闻海兵;转染缝隙连接蛋白CX43在脑胶质瘤化疗旁观者效应影响的体内外实验研究[D];南昌大学;2011年
10 何君贤;梅山、大白猪FIT1基因真核表达载体的构建及其转染研究[D];华中农业大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026