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《天津医科大学》 2002年
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Ginkgolide B对低氧时大鼠海马脑片内源性神经递质释放的影响

李晨  
【摘要】: 背景 低氧是描述组织氧供不足的通用术语。低氧条件下,作为神经细胞执行其功能活动和神经元之间主要通讯方式的神经递质和一些信使分子参与了低氧致损神经元的过程。已知细胞膜脂质代谢过程的产物之一PAF在脑组织血供和氧供不足时水平明显升高。研究者们在筛选和寻找防治缺血缺氧性脑损伤的过程中,已经确实证明了天然银杏叶的组分之一Ginkgolide B是一种强有力的高特异性天然PAF受体拮抗剂,可与位于突触前膜的特异性PAF受体结合。因此,Ginkgolide B的神经保护作用很可能或至少部分是由于它可以与突触前膜的PAF受体结合而抑制谷氨酸等神经递质的释放。已有较多的在体实验研究证实了Ginkgolide B具有对抗神经元损伤的作用,但迄今很少有其具有直接的神经保护作用的证据。另一方面,目前关于Ginkgolide B对某些神经递质的释放有作用的研究报道大多基于某些脑区或核团中神经递质总含量即静态含量的测定,鉴于细胞外液和突触间隙中兴奋性氨基酸浓度过度增高和Ca~(2+)参与的受体过度激活被普遍认为是造成神经元死亡的“最后公路”,神经递质的静态总含量的测定事实上很难反映细胞外液中神经递质的水平及功能。 目的 1进一步探讨低氧对海马内源性神经递质释放的影响; 2观察低氧时诲马神经元细胞外液中神经递质含量的变化; 3评价细胞外液中Ca~(2+)在海马神经元内源性递质释放中的作用; 4研究Ginkgolide B对低氧时海马神经递质释放的影响,为其是否具有直接的神经保护作用提供实验依据。 方法 1利用海马脑片体外存活技术,建立大鼠离体海马脑片的急性低氧模型。低氧条件为向脑片孵育液中通入95%N_2/5%CO_2混合气体,低氧时间为10min。 2用反相高效液相色谱结合紫外检测法和电化学检测法测定海马脑片孵育液中氨基酸类神经递质和单胺类神经递质的含量。 3实验采用随机区组设计,动物随机分为三组,各组动物制备的海马脑片分别进行三种不同介质的灌流实验,即正常介质组、高K~+去极化组和无Ca~(2+)组;各组中由同一只动物制成的海马脑片再随机分到三个不同的处理组,即:正常对照组、低氧组和Ginkgolide B预孵育组。海马脑片神经递质的基础释放量测定样本取自正常介质组;去极化释放量为高K~+刺激时的释放量,样本取自高K~+去极化组。共安排9种不同条件的实验。 4采用SPSS10.0和SAS6.12进行致据处理。用随机区组设计的方差分析进行总体均数 的差异显著性比较,组间比较用hD法和SNK法;不同神经递质之间的相关性分析用 Pearson相关分析法;不同孵育条件下同种处理组间比较用 Stwm’lt检验。 结果 氨基酸类递质 1低氧对海马脑片孵育液中氢基酸水平的影响 低氧时脑片孵育液中除Gn和Ala外,其余氨基酸的水平均卅高(Pd N),口豆U和GAB A 上升幅度最为明显,与对照组相比分别升高38.6%和126.0%。 2氨基酸基础释放量和去极化释放量比较 ①正常供氧条件下,除TaU外,海马脑片孵育液中各种氨基酸递质的去极化释放量与 基础释放量相比均升高:其中八甲(Pd.05)、GIU(P<0.of)、GABA(P<(.of)、la(Pd.05) 的去极化释放与基础释放量相比差异有显著性,分别升高52.4t,52.p,176.2%,33.0%。 Tau的去极化释放量低于基础释放量(Pd.of),降低了 18.7%. ②低氧条件下(向海马脑片孵育液中通人 95%Nof%COZ ##\体 l(h),高义刺激 对海马内源性氨基酸递质的释放影响较小:Gly和Tau的去侵化释放量大于基础释放量 (P<(.05),分别升高 31.7%,44.l%,其余氨基酸的去极化释放量与基础释放量相比差异 无显著性(P>(.05)。 3 C/”依赖性和非 Ca’”依赖性释放 ①正常供氧条件下去除脑片孵育液中的*”后,海马脑片孵育液中Gn、Tl、Gly水 平与对照组相比分别降低38.4%,12.7%,14.0%,差异有显著性(P<(.of,P<(.of,P<0.05)。 AsP、Gin、Asn、GABA、la的水平与对照组相比差异无显著性(PX).05)。 ②低氧条件下去除孵育液中的CJ循,GABA水平与对照组相比降低32.4%,差异有 显著性(P<0刀5);Gb水平与对照组相比降低15.0%,差异显著(Paos);其它氨基酸水 平在两种介质中差别无统计学意义(PX.05),其中AsP、Gill水平有升高趋势,但统计学检 验差异无显著性o劝.05)。 4 Pearson相关分析结果显示,三种不同介质中海马脑片释放到孵育液中中各种氨基酸 呈现不同程度的相关性(一0.05,双侧检验)。每两种氨基酸之伺的相关性因孵育介质不同 而异。 5 MOlide B对低氧脑片孵育液中氨基酸水平的影响
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R33-33

【参考文献】
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