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《天津医科大学》 2002年
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普通棉耳狨猴死亡病毒病因及与人群关系的研究

石建党  
【摘要】: 普通棉耳狨猴与人类的亲缘关系相近,加上体小、易饲养、好管理等优点,已广泛用于医学领域的研究。1987年天津医科大学从国外引进普通棉耳狨猴,用于地方病的基础研究,取得了满意的成果。经过努力已成功地繁育了第一代和第二代,使年拥有量在100只以上,成为国内目前唯一较为庞大的群体,并已向国家八五、九五攻关课题提供动物,产生了较大的社会效益和经济效益。 1999年6月,该动物中心饲养的普通棉耳狨猴群体中暴发急性呼吸道传染病,发病率几乎100%,死亡率达33%。本次发病具有明显的呼吸道病毒感染特征:突然暴发,迅速蔓延,发病率高并伴有一定的死亡率。为发展和保护我国唯一的狨猴种群基地,并了解病原体与人类的关系,我们对狨猴死亡的病因进行了深入研究。 第一部分研究主要是进行病毒分离及病原学鉴定。 在排除细菌感染的基础上,通过死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养,分离出一株具有很高血凝效价的病毒株。通过双份血清试验及动物接种试验,发现:(1)发病狨猴恢复期血清对分离病毒抗体效价有4倍以上升高;(2)分离病毒接种狨猴,狨猴出现呼吸道症状,4周后血清抗体与接种前相比有60倍以上升高;(3)分离病毒接种SPF小鼠,从死亡小鼠肺组织可分离出与接种病毒一致的病毒。确认该病毒是本次疾病流行的病原体。 我们在初步分析本次疾病流行规律的同时,发现动物中心工作人员都有此病原体的抗体,并且在正常人群(献血员)中也有此病毒的抗体,阳性率高达 46.7%门 人提示此病原体与人类有密切的关系,可能是一株人和诫猴共患 的呼吸道病毒。 第二部分研究的目的是对分离到的病原体进行进一步鉴定。 采用6种能够获得的呼吸道病毒标准血清及标准毒株(甲型流感HINI、 H3NZ;乙型流感BIBeijingl243197、BIBJll84193!the;新城疫病毒;仙台病毒) 用交叉血凝抑制试验对分离毒株进行鉴定,发现该毒株与仙台病毒血清学特征 最为接近,但与乙型流感病毒等也有交叉反应。 将病毒液浓缩后用磷钨酸负染,电镜观察进行形态学鉴定,分离毒株核衣 壳结构明显,具有典型的副粘病毒特征。 采用分子生物学方法,设计出 Inf A、Inf B、hPIV、仙台病毒、hPIVZ、 SVS、hPIV3和hPIV4等8对可能病毒的特异性PCR引物,用RTPCR技术检 测病毒基因组,发现只有仙台病毒的引物能够扩增出相应分子量大小的产物。 扩增产物经过序列测定后,用生物信息学方法与各基因库中核酸序列进行比较, 确认该分离毒株是副流感1型病毒中的仙台病毒。 第三部分主要是进行分离病毒与人群关系的研究,克隆病毒的HN基因并 将其与人副流感1型病毒进行比较,为开发一种可用于人类也可用于诫猴疾病 预防的疫苗提供理论和物质基础。 我们检验了天津市53份 14周岁以下)L童血清、36份 15~50岁青、中年 人血清、43份 50岁以上中、老年人血清和山西省 18份血清,抗体阳性率分别 为45.28%、41.67%、60.47%和50%。经统计学检验,不同年龄、省份的人群 血清中对应于仙台病毒Tiwiin株的抗体存在情况无差别,总体的抗体阳性率为 49.3 3%。提示该病毒与人关系密切。 仙台病毒的HN蛋白是其主要的抗原物质,有可能作为基因疫苗的成分之 一。为此,我们设计了扩增仙台病毒HN基因全部序列的PCR引物,用高保真 耐热 DNA聚合酶扩增出特异性 PCR产物,然后用普通 Tq酶为产物加上突出 4 的3人碱基,再用A/T连接的方式克隆到质粒载体上,并对其进行了序列测定。 根据测定的核酸序列推测出它的蛋白质序列,然后与人副流感1 型病毒 humMashingtonll957毒株的HN蛋白进行了同源性分析。发现它们整体同源 性为 71%,包膜外区同源性高达 76%。提示我们所克隆的 HN基因有望作为一 种疫苗成分同时增强人体和诫猴对这两种副流感1型病毒——仙台病毒和人副 流感1型病毒的抵抗力。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R-332

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【引证文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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