收藏本站
《天津医科大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人脑胶质瘤AKT2基因表达及反义和显性负调节AKT2抑制胶质瘤增殖和侵袭的实验研究

康春生  
【摘要】: 胶质瘤是人类最常见的原发性颅内肿瘤。尽管目前胶质瘤联合治疗的手段包括手术切除、放射治疗和化疗,但近二十年来恶性胶质瘤患者预后仍无明显改善。随着肿瘤生物学和分子遗传学的进展,人们逐渐认识到:和人体其他部位的肿瘤一样,胶质瘤发生发展主要是原癌基因的激活与抑癌基因的突变缺失并由此产生一系列基因异常和动态演进的结果。 我们以往的研究表明:EGFR基因扩增和过表达是恶性胶质瘤发生发展的一种早期的始动事件。EGFR的过表达可以通过PI3K使下游AKT通路的活性上升,AKT被PI3K磷酸化后在肿瘤细胞的增殖和侵袭性生长中发挥关键作用。但到目前为止,AKT基因在胶质瘤中的表达及其在肿瘤恶性进展中的作用尚未深入研究。因此,本课题首先从AKT2及其相关基因的蛋白表达研究入手,然后进行反义和显性负调节AKT2治疗胶质瘤的体外实验,最后利用大鼠C6荷瘤模型进行了反义AKT2 cDNA治疗胶质瘤的动物实验研究,以期进一步了解AKT在胶质瘤中的作用以及阻断EGFR-PI3K-AKT通路对胶质瘤恶性进展的影响。 课题研究计划 本课题第一部分研究了50例胶质瘤标本AKT2及其相关基因的表达状况,并进一步在表达水平分析了EGFR,p-AKT,AKT2,MMP2/9和Ki67之间的相关关系及其与胶质瘤恶性程度之间的联系。以p-AKT代表PI3K的活性状态,以MMP2/9为侵袭指标,Ki67指数为增殖活性指标,应用免疫组化方法研究了EGFR、AKT2、MMP2/9和Ki67的表达,应用蛋白印迹方法研究AKT2和p-AKT的表达。 在本课题的第二部分,将逆转录病毒LXSN为载体的反义AKT2 cDNA和显性负调节AKT2(E299K)构建体-脂质体复合物直接转染人脑胶质瘤细胞系TJ905和鼠脑胶质瘤细胞系C6,LXSN载体转染组为空载对照。随机筛选阳性克隆并应用蛋白印记和原位杂交鉴定转染。MTT法和TUNEL法评价细 ' 天津医科大学博士学位论文 胞的增殖活性和凋亡,Transwell和球体培养法分析侵袭能力,球体培养和划 痕实验研究细胞迁移能力,流式细胞法分析细胞周期,并进行GFAP的表达 分析。 本课题第三部分为体内实验。应用立体定向技术将C6细胞和转染反义 AKTZ cDNA的C6细胞种植到SD大鼠的右侧尾状核,分别命名为对照组和 转染组。对颅内已经成瘤的大鼠进行反义AKTZ cDNA和LXsN空载体的立 体定向治疗,并分别命名为治疗组和空载组。每组10只大鼠,观察指标包括 实验大鼠的一般状态和生存时间,MRI动态监测荷瘤大鼠颅内肿瘤生长情况, 并应用组织病理学方法检测肿瘤标本AKTZ,MMPZ/9,PCNA,G队P,和 cyclin Dl的表达以及肿瘤细胞的凋亡情况。此外,将对照组1只2周的大鼠 进行了大剂量、多途径联合反义AKTZ cDNA的实验性治疗,并选择1只反 义治疗组4周大鼠进行了活化型AKTZ的实验性治疗。 结果 EGFR一PI3K一AKTZ一MMPZ/9一儿67的表达及分析 在胶质瘤中AKTZ的表达水平水平随肿瘤恶性程度增加而明显上升,低 恶度胶质瘤与高恶度胶质瘤的蛋白表达水平有显著差异;p一AKT的研究结果 与AKTZ结果相同。对EGFR、AKTZ、MMPZ/9和Ki67的免疫组化分析发 现:上述指标在胶质瘤中的表达阳性率和表达水平随肿瘤恶性程度增加而增 加,在低级别和恶性胶质瘤之间存在显著性统计学差异:此外相关分析发现 EoFR,p一^盯,A盯2,MMPZ/9和儿67之间存在着显著性的关系。上述 研究结果表明:EGFR一PI3K一AKT通路对胶质瘤的恶性进展作用显著,激活 这条通路可以促进肿瘤细胞增殖和侵袭这两种重要的恶性表型。此外,阻断 EGFR一PI3K一AKT通路可以成为阻止胶质瘤恶性进展的关键策略,因而AKTZ 可能是胶质瘤基因治疗的一个侯选基因。 体外研究 C6细胞和TJgOS细胞在AKTZ构建体转染后应用蛋白印记和原位杂交鉴 定转染成功。与对照组和空载组比较,转染反义或显性负调节AKTZ构建体 后胶质瘤细胞增殖抑制率和增殖能力明显受到抑制,并可诱发细胞凋亡;同 时肿瘤细胞MMPZ/9的活性下降;细胞周期分析表明出现GO/GI阻滞,GEAP 表达上调。 体内实验 对照组和空载组的平均生存时间分别为17.8士0.92天和17.5士1.10天, 2 天津医科大学博士学位论文 两组间生存时间没有显著性差别。反义AKTZ cDNA治疗组大鼠生存时间明 显延长,在治疗120天后仍有3只大鼠生存;转染组在60天时有4只动物存 活,生存时间也明显延长。MRI检查发现对照组和空载组全部成瘤;但转染 组在4周有4只没有肿瘤生成,治疗组在4周时有3只肿瘤消失。对照组1 只大鼠在第2周时MRI检查证实形成右测半球巨大肿瘤,对这只实验动物进 行了颅内、肌肉各20ug的反义AKTZ cDNA一脂质体复合物治疗。治疗后动态 MRI检测发现颅内肿瘤逐渐缩小,治疗4周后肿瘤消失。治疗后第4周时对 1只带有残留病灶的动物进行颅内原位sug活化型AKTZ质粒DNA一脂质体复 合物治疗,治疗后动态MRI检查发现颅内同侧缩小的肿瘤逐渐增大,该动物 于治疗后7时周时死亡。免疫组化研究发现:转染组和治疗组AKTZ表达下 降或消失,peN
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R739.4

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 聂兴玉;张海三;;额极胶质瘤脑叶切除术31例临床观察[J];中国社区医师(医学专业);2011年19期
2 王华民;杨学军;;血管生成拟态及其在胶质瘤中的研究进展[J];中国神经肿瘤杂志;2011年02期
3 柯金;胡喜梅;周水阳;何杰;朱海清;;胶质瘤中肿瘤干细胞的分布及与p53、MGMT的关系[J];现代肿瘤医学;2011年07期
4 程家明;;氯喹治疗胶质瘤临床观察[J];医学综述;2011年12期
5 李鹏;张亚;;人脑胶质瘤组织中增殖细胞核抗原表达与病理分级和患者预后关系的研究[J];滨州医学院学报;2011年03期
6 肖仕印;毛庆;;高级别胶质瘤综合治疗后的假性进展[J];四川医学;2011年07期
7 朱海峰;耿晓增;沈洲明;伏承平;尤永平;程刚;傅震;;荧光定量PCR检测脑胶质瘤中miR-125b[J];中国神经肿瘤杂志;2011年02期
8 顾文栋;裴红蕾;;69例脑胶质瘤术后三维适形放射治疗临床分析[J];中国神经肿瘤杂志;2011年02期
9 邱莎莎;邓晓;杨庆春;;右颞叶AVM伽玛刀治疗后放射性脑病并发胶质瘤1例[J];实用医学杂志;2011年15期
10 刘建民;孙鸿;黄良文;胡鹏;戴先才;;XRCC1基因多态性与脑胶质瘤相关性研究[J];现代预防医学;2011年16期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨玉山;;胶质瘤免疫组化检查对患者个体化治疗的意义[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
2 黄强;;胶质瘤干细胞分化过程中的若干问题探讨[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
3 洪柳;李青;陈广生;张丰;聂蕾;张丽英;林圣彩;;RGS16与p53在人胶质瘤中的表达及相关性研究[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
4 娄江涛;胡成进;;KLK6在胶质瘤中的表达及生物学意义[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
5 陈忠平;;胶质瘤血管生成拟态的分子靶点探讨[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
6 刘文科;;创伤与大鼠C6胶质瘤肿瘤干细胞致瘤相关性的实验研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
7 徐宏;曾义;韩杨云;;基因MDM2、VIM在胶质瘤恶性进展中的作用研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
8 徐宏;韩杨云;孙中书;李新军;;与胶质瘤代谢通路相关的候选基因筛选[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
9 岳晓;韩磊;张安玲;杨旸;王广秀;贾志凡;浦佩玉;康春生;;胶质瘤中β-catenin/Tcf4转录调控miR-21的机制与生物学功能研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
10 徐春华;李东海;洪涛;;IL-18基因联合HSV-TK基因对C6鼠胶质瘤[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 湖南省肿瘤医院 何正文博士;胶质瘤是“癌”不是“瘤”[N];大众卫生报;2002年
2 记者匡远深;早期判定胶质瘤放疗效果有新法[N];健康报;2009年
3 仇逸;上海发现胶质瘤中转录因子异常现象[N];中国医药报;2001年
4 蒋明;武大二院新法治疗胶质瘤[N];中国医药报;2002年
5 记者 匡远深;胶质瘤最易侵袭部位为岛叶[N];健康报;2009年
6 匡远深;胶质瘤组织中四种蛋白与化疗耐药相关[N];中国医药报;2008年
7 记者 任珊珊 实习生 肖欢欢 通讯员 卢忠光;头晕头痛不早治竟然瘫痪?[N];广州日报;2004年
8 仇逸;我国医学家发现胶质瘤中转录因子异常[N];大众科技报;2001年
9 匡远深;大脑岛叶是旁边缘系统胶质瘤最易侵袭部位[N];中国医药报;2009年
10 蒋明;抑制血管通透因子治疗胶质瘤机制[N];中国医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 康春生;人脑胶质瘤AKT2基因表达及反义和显性负调节AKT2抑制胶质瘤增殖和侵袭的实验研究[D];天津医科大学;2003年
2 别黎;跨平台整合微阵列数据筛选与胶质瘤级别相关基因的实验研究[D];吉林大学;2011年
3 朱莉;高b值磁共振弥散加权成像在胶质瘤中的应用研究[D];复旦大学;2011年
4 王虎;人脑胶质瘤PTEN基因表达和突变及PTEN基因转导抑制胶质瘤增殖和侵袭的实验研究[D];天津医科大学;2004年
5 邹启桂;功能磁共振成像对幕上胶质瘤术前分级临床应用价值初探及优化指标选择[D];华中科技大学;2011年
6 张家墅;术中磁共振与多模态导航在语言区胶质瘤手术及脑穿刺活检中的应用[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
7 蒋雪峰;人脑胶质瘤CD105表达和胶质瘤干细胞在血管生成中的作用及机制初探[D];第三军医大学;2011年
8 孙继勇;胶质瘤恶性进展相关新基因研究[D];苏州大学;2003年
9 高宜录;人胶质瘤细胞转染p16基因后生物学特性的观察[D];苏州大学;2001年
10 吴安华;胶质瘤特异性肽疫苗相关肽及胶质瘤特异性启动子的鉴定[D];中国医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邵耐远;胶质瘤恶性进展相关基因表达谱的建立和初步研究[D];苏州大学;2002年
2 王爱东;胶质瘤恶性进展相关基因表达谱中凋亡相关基因的初步研究[D];苏州大学;2003年
3 许进;人脑胶质瘤中uPA的表达及临床意义[D];吉林大学;2005年
4 李志清;脑胶质瘤的多体素磁共振波谱研究[D];中国医科大学;2002年
5 王莉;SV40、JCV和BKV与人胶质瘤病因的相关性研究[D];郑州大学;2003年
6 连葆强;高表达HSP70鼠脑胶质瘤瘤苗的体内抗瘤作用研究[D];福建医科大学;2003年
7 陆军松;胶质瘤、脑膜瘤患者IGF-1、IGFBP-3测定的意义[D];苏州大学;2004年
8 郑虎;Skp2和p27在人脑胶质瘤中的表达及其意义[D];武汉大学;2005年
9 史万超;Ki-67增生指数与~(99m)Tc-MIBI吸收在胶质瘤恶性度评估中的价值比较[D];中国医科大学;2003年
10 吴祥祯;端粒酶基因hTERT在脑胶质瘤的表达及其临床意义[D];福建医科大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026