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《天津医科大学》 2003年
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热疗及化疗前后大肠癌细胞粘附分子表达和细胞凋亡的研究

埃赫维(KOUMAKPAYI.I.Hervé)  
【摘要】: 为了探讨热疗及热化疗联合对大肠癌细胞株粘附分子表达和细胞凋亡的影响以及了解热疗对肿瘤转移过程的分子生物学改变本研究首先用免疫组织化学方法在HT29,HCT-8,LoVo,T84和SW620等人类大肠癌细胞株中筛选表达粘附因子ICAM-1、CD44V6、E-Cadherin及nm23的细胞株。 将体外培养的人类大肠癌细胞株HT-29、HCT-8及LoVo。于实验室模拟热疗条件(单纯水浴43℃,60分钟)加以处理。用免疫组织化学检测大肠癌细胞株中ICAM-1、CD44V6及E-Cadherin蛋白表达的改变。利用RT-PCR了解细胞株中粘附因子mRNA转录水平表达情况;采用流式细胞仪监测大肠癌细胞株中细胞凋亡(DNA倍体,早期凋亡)。用丝裂霉素以及热化疗联合处理HT-29、HCT-8及LoVo等细胞并利用上述方法同样观察蛋白质表达的变化,mRNA转录水平改变以及细胞凋亡情况。共设计四个实验组:热疗前,热疗后(0h,2h,4h,8h,12h,24h,48,72h),化疗以及热化疗联合。 本课题分四部分: 1.大肠癌细胞株中细胞粘附因子及肿瘤抑制基因表达的筛选 2.热疗和化疗对大肠癌细胞粘附分子表达的影响 3.丝裂霉素对大肠癌细胞化疗及热化疗联合的敏感性 4.热疗和化疗对大肠癌细胞细胞周期的影响和早期凋亡的研究 博士研究生学位论文中文摘要 论文一:大肠癌细胞株中细胞粘附因子及肿瘤抑制基因表达的筛选 目的:筛选大肠癌细胞株中表达粘附因子IcAM一1、CD44V6、E一Cadherin 及nm23的细胞株。方法:本实验采用了酶免疫组织化学技术SABC法。此法 是将亲合素(A)与生物素(B)标记的过氧化物酶结合,形成可溶性的亲合素 一生物素化酶复合物(Avidin一Biotin一讲roxidase Co娜lex,ABC),并通过分解用 辣根过氧化物酶的底物二氨基联苯胺(DAB)显色。结果:L大肠癌细胞株HT29、 HCTS、LoVo、SW620和T84的细胞膜和细胞浆均有E一钙粘蛋白表达,HT29 和HCTS在40%一70%,功Vo、SW620和T84在10%一40%;2.大肠癌细胞株 HT29,HCT一8,LoVO,SW620和T84细胞膜上有CD44V6基因表达,但HT29 和LoVo之间无明显差别,表达率在70%一100%范围,而HCT-8,SW620和T84 在40%一70%范围内;3.大肠癌细胞株HT29,HCT一8,切VO,SW620和T84 细胞膜上均有ICAM一1基因表达,HT29,LOVo,SW620和T84在40%一70% 范围内,而HCT一8有10%一40%的表达。结论:HT29,HCT-8,切vo,SW620 和T84等细胞均能表达E一Cadherin、CD44V6和ICAM。SW620和T84表达率 低。nln23基因在四种细胞系(HT29,劫Vo,SW620和T84)均无表达。HCT一8 细胞能表达nm23基因,但阳性率很低。 论文二:热疗和化疗对大肠癌细胞粘附分子表达的影响 目的:了解热疗,化疗和热疗联合丝裂霉素化疗对大肠癌细胞粘附分子表 达的影响。方法:实验室模拟热疗(单纯水浴43℃,60分钟)条件处理细胞, 用免疫组织化学检测大肠癌细胞株中犯AM一l、CD44V6及E一Cadherin蛋白表达 的改变,用RT一时时定量PCR了解细胞株中粘附因子mRNA转录水平表达情况。 结果:L热疗后HT29、HCTS和助vo细胞的E一Cad基因mRNA转录水平表达 有显著性差异伊0 .05),H长9细胞E一cad基因mRNA转录水平高于HCTS细 胞和劫Vo细胞,LoVo细胞高于HCTS细胞。三种细胞不同处理方式之间E一Cad 基因mRNA转录水平表达无显著性差异;2.HT29、HCTS和Lovo细胞的CD44叽 2 博士研究生学位论文中文摘要 基因mRNA转录水平表达有显著性差异(P0 .05),切Vo细胞CD44 v6基因 mRNA转录水平高于HT29细胞和HCTS细胞而HT29细胞高于HCTS细胞。 三种细胞不同处理方式之间CD44 V6基因mRNA转录水平表达有显著性差异 (P0 .01),对照与热疗无显著性差异,对照组与化疗组有显著性差异,对照组与 热疗化疗联合组有显著性差异;3.HT29细胞、HCTS细胞和助Vo细胞之间 IcAM一1基因mRNA转录水平表达有显著性差异(P0 .01)。HT29细胞和L。、b 细胞之间无显著性差异,它们与HCTS细胞有差异。HCTS细胞表达高于HT29 细胞和L。、b细胞。三种细胞不同处理方式之间ICAM基因mRNA转录水平表 达有显著性差异,对照组与单纯热疗组无显著性差异,对照组与化疗组有显著 性差异,单纯热疗组与热疗化疗联合组有显著性差异。结论:本研究证明在一 定的温度热疗对细胞粘附分子表达有影响。不同肿瘤细胞的热敏感性有差别、 不同肿瘤细胞系的粘附分子表达不同而且热疗对不同粘附分子的影响也不同。 论文三:丝裂霉素对大肠癌细胞化疗及热化疗联合的敏感性 目的:了解丝裂霉素对大肠癌细胞系化疗及热化疗联合的敏感性 方法:丝裂霉素化疗和热疗联合处理细胞,用MTr检测HT29细胞、HcTS细 胞和切Vo细胞的细胞抑制率。结果:1.HT29细胞、HCTS细胞和切Vo细胞对 丝裂霉素的敏感性有显著性差异;2.化疗和热疗化疗联合对HT29、HCTS和功Vo 的细胞毒性有显著性差异;3.热疗不同时间段24h、48h和72h对HT29、HCTS 和切vo的细胞毒性有显著性差异;24h与48h和72h有差异而48h和72h之间 无明显差异;4.丝裂霉素浓度0.olglL和0.02gl
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R735.34

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