收藏本站
《天津医科大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

高恶性膀胱移行细胞癌与相应正常上皮差异表达基因的克隆及功能研究

齐湘杰  
【摘要】: 膀胱癌的发生发展跟多种基因的突变和表达异常有关,要弄清楚其确切的机制,需要对选择性表达的基因进行分离、克隆和序列分析,并对其氨基酸组成、表达产物和结构功能等进行相应的研究。以往研究基因表达差异的方法很多,但最行之有效的方法是Diatchenko建立的抑制消减杂交技术,它不仅特异性高、灵敏度高、假阳性率低,而且能克隆高、低丰度基因。 本课题应用抑制消减杂交技术构建人膀胱移行细胞癌和正常膀胱上皮组织差异表达的cDNA消减文库,进一步利用斑点印迹杂交(Dot blot)从中筛选出BTCC差异表达的基因,随机选取部分克隆进行测序,结果在GenBank中作同源性对比分析。应用Northern blot技术对所克隆的高拷贝新基因片段进行差异表达分析;对其中有明显差异表达的膀胱癌特异的新基因片段应用SMART RACE技术进行全长克隆,应用免疫荧光原位杂交技术进行染色体定位,并初步推断所克隆的新基因全长序列的编码区和蛋白结构。应用反义核酸技术阻断该新基因在膀胱癌EJ细胞中的表达后,观察膀胱癌EJ细胞形态、生长、凋亡、死亡、转移、增殖活性等的变化,通过以上研究来探讨该新基因的功能。最后应用RT-PCR技术检测新基因在不同分级、分期临床膀胱癌标本中 的表达及意义。 研究结果表明:应用SSH技术构建了具有高消减效率的人膀胧癌 组织cDNA消减文库,文库中含有376个阳性克隆和83个阴性克隆, 阳性克隆率为78%。随机挑出的100个阳性克隆中,89个克隆载有插 入片段,片段插入率达84%,提示每一克隆均有插入特异片段的可能性。 在89个克隆中,有76个克隆含有肿瘤差异表达的基因片段,4个克隆 含有可能污染的基因片段,9个克隆含有未消减掉的来自正常组织的基 因片段,说明SSH具有很高的消减效率。对76个克隆中的插入片段进 行同源性比对分析,其中有66个克隆代表23种已知基因,其余的IC 个克隆代表5种未知基因,这表明消减文库中37%的克隆代表着不同 的基因。在23种差异表达的己知基因中,18种为跟膀肤癌有关的基因, 其余5种基因目前尚无文献报道跟膀肤癌有关,这些差异表达基因的克 隆为膀肤移行细胞癌的进一步研究提供了新的线索,可能从中筛选到 膀肤移行细胞癌新的治疗靶点或瘤标。结合其他已发现的差异表达的 已知基因,绘制膀肤移行细胞癌差异表达的基因谱,以利彻底阐明其 发生、发展的分子生物学机制。 未知新序列中BQ135232共有3个拷贝。Northern杂交分析显示它 在膀肤癌组织中明显表达,而在正常膀胧组织中无明显表达,这表明 BQ135232是膀胧癌特异表达的新基因。应用SMART RACE技术获得 BQI 35232的全长,经GENBANK检索证明其为序列和功能均未知的新基 因。应用免疫荧光原位杂交染色体定位结果显示BQ135232位于第12 号染色体近末端处。组织分布显示BQI 35232在膀脱癌组织和膀肤癌细 胞株中特异性高表达,而在正常膀眺组织表达量极低甚至不表达,在 肾癌、前列腺癌组织及非膀肤癌细胞株中表达则很低,在乳腺癌组织、 j反津医科大学博d匕学位论文 、 肺癌组织、肝癌组织及宫颈癌组织中未见明显的表达。BQ135232反义 寡核昔酸转染膀肮癌EJ细胞后,可明显抑制其生长、降低其增殖活性、 减少核分裂、并诱导其持续性凋亡。应用RT一PCR技术检测BQI 35232 在不同分级、分期膀胧癌标本中的表达,结果表明BQ 1 35232在高级、 高期膀胧癌中的表达明显高于在低级、低期膀肤癌中的表达。本研究 表明BQ135232是跟膀肤癌发生发展密切相关的新基因,它的表达与膀 肤癌细胞的生长、增殖、抗凋亡密切相关。它的成功克隆为阐明膀胧 癌发生发展的分子生物学机制开辟了新的途径,为今后膀胧癌的诊断、 治疗提供了新的理论依据。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R737.14

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 齐湘杰,畅继武,马富玲,董美钰,孙光,马腾骧;膀胱移行细胞癌差异表达基因的克隆与鉴定[J];中华泌尿外科杂志;2003年07期
2 王晓丽,刘丽,郭丽,范洪学;高、低正加速度耐力大鼠脑组织差异表达基因的分离[J];吉林大学学报(医学版);2002年05期
3 艾军魁,黄啸,王雨娟,白银,吕英谦,叶雄俊,辛殿旗,那彦群,张志文,郭应禄;应用抑制消减杂交技术筛选人肾癌差异表达新基因[J];癌症;2002年10期
4 林方;;40岁前的膀胱移行细胞癌[J];国际泌尿系统杂志;1990年05期
5 陈至善,熊显华,张岩;抗癌基因P53突变、周期素与膀胱移行细胞癌的关系[J];中华泌尿外科杂志;1996年09期
6 陈强,王新生,董胜国,李玉军,孙显露,申东亮;MTS1 基因产物 P16 蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达[J];中华泌尿外科杂志;1997年04期
7 杨风光!350001福州,陈梓甫!350001福州,施作霖!350001福州,陈文榜!350001福州;p~(53)对膀胱移行细胞癌细胞增殖和凋亡的调控意义[J];中华泌尿外科杂志;2000年08期
8 杨占斌,陈坚,莫曾南,白先忠,黄伟华;VEGF在膀胱移行细胞癌中的表达及意义[J];广西医科大学学报;2002年01期
9 杨兵,叶锦;卡介苗加白细胞介素-2膀胱灌注治疗56例膀胱移行细胞癌[J];现代医药卫生;2004年07期
10 陈伟;张方毅;陈洪德;李叶平;黄卡特;;Galectin-3蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义[J];临床泌尿外科杂志;2007年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 姚海军;王忠;蒋跃庆;任晓敏;董国勤;蔡志康;卢慕峻;徐明曦;张克;达骏;陈其;鲍泳扬;;膀胱移行细胞癌伴前列腺腺癌的诊断与治疗(附7例报告)[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年
2 李超志;李海波;梁宇;冯鹏程;吴博益;孟杰;;FGFR3基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年
3 胡建达;陈晓梨;陈鑫基;祝亮方;杨月玲;陈元仲;吕联煌;;抑制性消减杂交法研究初治和复发急性淋巴细胞白血病基因的差异表达[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
4 霍然;朱叶飞;马翔;林敏;周作民;沙家豪;;GRP78在精子发生过程中的差异表达及其可能的作用:抵抗生精细胞凋亡[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年
5 王家丰;;高温胁迫下甘蓝型油菜发育种子相关基因的差异表达研究[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
6 张忱;肖波;;大鼠癫痫持续状态后海马miRNA[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
7 于磊;邹飞;罗炳德;王斌;;应用抑制性消减杂交技术研究兔外周血单核细胞热适应相关基因的差异表达[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年
8 朱芷葳;张赟;姜俊兵;范瑞文;贺俊平;董常生;;MicroRNAs在羊驼不同被毛颜色皮肤组织中的表达[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年
9 钱丽丽;贾青;;山羊卵巢组织繁殖力相关基因的差异表达研究初报[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
10 韩雪榕;朴丰源;;TOCP暴露鸡脊髓神经中Stathmin和MBP的差异表达[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张超群;膀胱移行细胞癌研究获重大进展[N];中国医药报;2003年
2 通讯员 刘旭林 记者 刘传书;我科学家发现染色质重塑与膀胱癌关系[N];科技日报;2011年
3 记者 白毅;染色质重塑异常可能为膀胱癌发生的重要机制[N];中国医药报;2011年
4 记者  齐芳 通讯员  李雪;我国太空实验表明空间环境可能对细胞抗体产生影响[N];光明日报;2006年
5 赵强 杨声瑞;膀胱癌与多基因改变有关[N];中国医药报;2003年
6 ;表阿霉素髂内动脉化疗预防膀胱癌术后复发[N];中国医药报;2003年
7 记者 秦勉;破解膀胱癌的致病原因[N];北京科技报;2011年
8 记者 陈汉桥;PA菌苗可防膀胱癌复发[N];健康报;2001年
9 高等学校蛋白质组学研究院;蛋白质组学将造福人类[N];科技日报;2001年
10 中国营销实战专家 路长全;品牌的4S战略[N];中华合作时报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 齐湘杰;高恶性膀胱移行细胞癌与相应正常上皮差异表达基因的克隆及功能研究[D];天津医科大学;2003年
2 王刚;膀胱移行细胞癌潜在生物标记物探索[D];浙江大学;2009年
3 赵国庆;糠秕马拉色菌菌丝态和酵母态基因表达差异的研究[D];四川大学;2007年
4 谢宇;Ezrin在膀胱移行细胞癌的表达、作用及机制研究[D];中南大学;2010年
5 魏卓;肿瘤干细胞标志物usp22在人膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义[D];华中科技大学;2011年
6 杨建勋;膀胱移行细胞癌中c-FLIP mRNA表达及临床相关性[D];中国医科大学;2008年
7 简华刚;皮肤创伤愈合相关差异表达基因的克隆、筛选及鉴定[D];重庆医科大学;2002年
8 赵建华;反义c-myc寡核苷酸提高膀胱癌细胞对MMC的敏感性和c-myc癌基因蛋白在膀胱移行细胞癌表达的临床意义[D];第四军医大学;2002年
9 杜喜玲;水稻和玉米组织特异表达基因的克隆及功能分析[D];复旦大学;2004年
10 张卫星;微小染色体维持蛋白5、存活素对膀胱移行细胞癌诊断价值的研究[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘冉录;肿瘤转移抑制基因KALI1与膀胱移行细胞癌分化及浸润转移的关系[D];郑州大学;2004年
2 江峰;Survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义[D];苏州大学;2004年
3 权浩锡;Ki-67/MIB-1、MMP-2及其抑制物TIMP-2在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义[D];吉林大学;2004年
4 赵海岩;膀胱移行细胞癌微卫星分析及相关抑癌基因的研究[D];山西医科大学;2004年
5 陈晓波;PTEN、CDK4蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义[D];广西医科大学;2004年
6 杨金辉;PSMA和AR在膀胱移行细胞癌中的表达及其相关性研究[D];天津医科大学;2010年
7 李向前;TSP-1和TGF-α在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义[D];兰州大学;2010年
8 韩镇远;Hec1及Cyclin D1在膀胱移行细胞癌中的表达及意义[D];兰州大学;2010年
9 于江华;HER-2和MGMT在膀胱移行细胞癌中的表达及意义[D];河南科技大学;2011年
10 蓝建华;ILK和E-cadherin在膀胱移行细胞癌中的表达及意义[D];重庆医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026