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《天津医科大学》 2003年
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干细胞移植在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中应用的实验研究

张卉  
【摘要】: 缺血性脑血管病的发病率正逐年增高,这种疾病对人类健康乃至生命的威胁使其愈来愈受到关注。但目前现有的治疗措施对许多患者还未取得理想的效果,因此如何促进脑缺血患者受损神经功能的修复仍是目前研究的重点。近年来成年哺乳动物乃至成人脑中NSCs的发现为CNS疾病治疗点燃了新的希望。NSCs的发现提示脑组织自身修复功能的存在,脑损伤后内源性神经前体细胞的激活有助于受损神经功能的恢复;另外外源性NSCs移植也可用于修复受损的神经功能。但来源受限使得NSCs不能得到广泛应用,BMSCs可取自自体骨髓并具有多种分化潜能,满足种子细胞的基本要求。基于以上各点,对脑缺血后内源性神经前体细胞的激活、NSCs和BMSCs移植治疗脑缺血进行分析将会对脑缺血治疗提供重要的理论帮助。 第一部分 大鼠局灶性脑缺血后内源性神经前体细胞的激活 目的:采用大鼠局灶性脑缺血模型观察不同时间点和不同脑区的内源性神经前体细胞的激活情况及神经生成情况,进一步阐明自身修复的启动过程,为临床治疗脑缺血提供理论帮助。 方法:采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,成年健康雄性Wistar大鼠随机分为6组,包括正常对照组;假手术组;局灶性脑缺血3、7、14和21天组。在大鼠处死的前3天开始以BrdU腹腔注射标记增殖细胞,在最后一次注射后1天处死。以大鼠神经功能障碍的出现作为脑缺血的整体评价;采用光镜、Evans Blue和TTC染色判断脑缺血的部位及范围;以免疫组织化学法检测nestin、BrdU;结合RT-PCR技术检测脑组织中nestin、NSE、GFAP mRNA分析脑缺血后内源性神经前体细胞激活及神经生成情况。 结果:(1)应用线栓法短暂闭塞大鼠右侧大脑中动脉后,大鼠出现以左 博士研究生学位论文摘要 上肢为重的偏瘫同时伴有右侧Homor氏征。Evans Blue、竹C和HE染色均 显示缺血区域位于右侧纹状体、颗顶区皮层,位置和范围较为稳定。(2)正 常大鼠侧脑室SVZ和海马DG处均可见到nestin阳性的细胞。局灶性脑缺血 后,这两个部位的nestin阳性细胞数均较正常组明显增加,在缺血后7天达 到峰值,但海马DG处nestin阳性细胞数变化不如侧脑室SVZ处明显:在缺 血区域及周围也可见到大量的 nestin阳性细胞,在脑缺血后7天达到峰值。 缺血侧与对侧相比nestin阳性细胞变化情况一致,但缺血侧阳性细胞数明显 多于对侧。(3)正常大鼠侧脑室SVZ和海马DG处均可以见到BrdU阳性的 细胞,数量少于nestin阳性细胞。局灶性脑缺血后,这两个部位的BrdU阳 性细胞数均较正常组明显增加,在脑缺血后7天达到峰值,但海马DG处BrdU 阳性细胞数目少、变化不如侧脑室SVZ处明显;在缺血区域及周围也可以见 到大量的BrdU阳性细胞,在脑缺血后3天达到峰值,缺血侧与对侧相比BrdU 阳性细胞变化情况一致,但缺血侧阳性细胞数明显多于对侧。(4)大鼠局灶 性脑缺血后nestin mRNA水平与对照组相比明显增加,在脑缺血后7天达到 高峰。NSE、GEAP mRNA水平在脑缺血后14天有所增加,21天时有一定的 表达,而且GFAP mRNA水平高于NSE mRNA水平。 结论:(l)大鼠线栓法MCAO模型是研究局灶性脑缺血后自身修复和内 源性神经前体细胞激活理想的动物模型。(2)正常成年大鼠侧脑室SVZ和海 马DG均存在少量nestin阳性细胞,BrdU染色证实这些细胞部分处于增殖状 态,提示成年脑中存在具有增殖活性的神经前体细胞。(3)脑缺血可以使内 源性神经前体细胞增殖增加;损伤周围成熟细胞中nestin的表达提示由非神 经前体细胞启动的另一种修复过程的存在。(4)脑缺血所激活的内源性神经 前体细胞可逐渐分化为成熟的神经元和星形胶质细胞,但这种分化过程需要 一定的时间才能实现。 第二部分神经干细胞在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中 应用的实验研究 目的:通过体外NSCs的培养,了解NSCs的生长、增殖以及分化等生 物学特性,并观察NSCs移植入脑缺血大鼠后,细胞存活、迁移、分化以及 大鼠的神经功能障碍恢复情况,探讨NSCs移植对于神经功能修复的作用及 可能机制,以期为NSCs移植治疗脑缺血提供帮助。 方法:在特定培养条件下进行新生大鼠NSCs培养和诱导分化,通过细 胞形态学观察、MTT检测、nestin、PCNA、BrdU、NSE、GFAP、 MAP一2、 天津医科大学5 博士研究生学位论文摘要 NF、GalC染色了解其生物学特性。将实验大鼠随机分为单纯MCAn组、 MCAo+DF组及MCA。+NSCs组,将以BrdU标记的NSCs通过立体定向植 入大鼠脑缺血区周围。通过脑缺血后1、7及14天时神经功能缺损评分、HE 染色、nestin及BrdU免疫组化染色以及BrdU月呵SE、BrdU/GEAP免疫组化双 染观察植入NSCs的存活、迁移、分化及对神经功能改善的影响。 结果:(1)新生大鼠NSCs在特定的培养基及神经营养因子EGF、bFGF 的作用下可以持续分裂增殖,形成神经球,呈nestin、PCNA、BrdU阳性反 应;当撤去营养因子并加入血清后可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶 质细胞,且胶质细胞比例大于神经元比例。〔2) NSCs移植后,MCA。十NSCs 组随时间延长,神经
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R743.3

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1 王力,王和鸣;骨髓基质细胞成骨影响因素的研究进展[J];福建中医学院学报;2003年02期
2 李建伟;胡蕴玉;魏义勇;彭华志;白建萍;;BrdU体外标记脂肪成体干细胞的实验研究[J];中国骨肿瘤骨病;2007年05期
3 邓展生,沈民仁,鞠洪斌,孙太存,许宇霞,张旋;大鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性的实验研究[J];医学临床研究;2005年11期
4 朱六龙;骨髓间充质干细胞的诱导分化与骨修复[J];河南诊断与治疗杂志;2003年02期
5 席刚明,汪华侨,唐廷勇,范华燕,叶天雄;大鼠海马结构中细胞发生的时间及其迁移路线[J];解剖科学进展;1999年03期
6 朱六龙,孔荣,孙自敏,尚希福,童元,方诗元,汪健,翟志敏,吴竞生;成人间充质干细胞体外成骨的初步研究[J];临床骨科杂志;2001年02期
7 张文志,孔荣,方诗元,朱六龙,童元,汪健;兔自体骨髓间充质干细胞体内复合移植的成骨研究[J];临床骨科杂志;2002年02期
8 杨桂玲;岳军峰;汪清铭;石庆之;李剑;汤爱萍;;自体骨髓间充质干细胞输注支持长期反复化疗急性白血病的疗效观察[J];实用临床医学;2008年07期
9 苏海鹏;王东;;脂肪间充质干细胞的研究进展及临床展望[J];实用骨科杂志;2008年02期
10 汪建民,袁群芳,姚志彬;大鼠室管膜下区和齿状回神经前体细胞增殖的衰老性变化[J];神经解剖学杂志;2002年01期
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6 刘辉;神经干细胞生物学特性、神经干细胞移植治疗颅脑损伤后神经功能缺失及免疫基因治疗大鼠胶质瘤的研究[D];天津医科大学;2002年
7 张端珍;成体干细胞自体移植治疗缺血性心脏病研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
8 林欣;大鼠骨髓基质细胞和神经干细胞共同培养及颅内移植的实验研究[D];天津医科大学;2004年
9 马勇江;骨髓与脂肪间质干细胞分离与诱导分化为成骨细胞的研究[D];西北农林科技大学;2004年
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2 黄晓宇;骨髓单个核细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心室重构的影响[D];郑州大学;2011年
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1 韦斌垣;赵伟佳;;大脑巢蛋白的研究进展[J];医学综述;2006年19期
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1 ;厚朴酚对脑缺血的保护作用[N];中国医药报;2003年
2 郑健刚;杜元灏;石学敏;针刺能增加脑缺血大鼠脑血流量[N];中国医药报;2005年
3 谢涛 鲍冬生;神经介入可治疗脑缺血[N];家庭医生报;2006年
4 ;各方细说恩必普[N];医药经济报;2004年
5 特约记者 朱丽丽;颅内支架治疗脑缺血[N];健康时报;2003年
6 江山 张彬;治疗脑血栓的关键:挽救脑缺血“半暗带”[N];人民日报;2005年
7 王德江;刘藏;王贵怀;曹勇;王新生;肖新如;交流最新进展 提高诊治水平[N];中国医药报;2005年
8 壮壮;手发麻 找病根[N];卫生与生活报;2008年
9 冯琳;大脑中动脉置支架治疗频发脑缺血[N];中国医药报;2005年
10 耕耘;降压不当能导致脑缺血[N];中国老年报;2006年
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1 张卉;干细胞移植在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中应用的实验研究[D];天津医科大学;2003年
2 曲友直;神经保护剂联合应用对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究[D];第四军医大学;2004年
3 赵万标;针刺改善局灶性脑缺血脑微血管内皮细胞功能的动态观察[D];北京中医药大学;2004年
4 潘殿卿;神经保护剂鸡尾酒疗法对大鼠脑缺血的保护作用[D];河北医科大学;2003年
5 周峻伟;清开灵有效组份对缺血性中风病“毒伤脑神”证的理论及实验研究[D];北京中医药大学;2004年
6 卞杰勇;雌激素对大鼠局灶性脑缺血保护作用的实验研究[D];苏州大学;2002年
7 余路阳;Ⅰ.A20基因在脑缺血和I型糖尿病中的抗凋亡作用 Ⅱ.异种移植中针对Gal alpha 1,3 Gal修饰基因的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
8 朱巍;转基因神经干细胞移植对脑缺血后神经血管保护作用的研究[D];复旦大学;2003年
9 田京伟;20(S)-人参皂苷Rg_3抗脑缺血作用研究[D];中国海洋大学;2005年
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1 徐慧敏;小鼠局灶性脑缺血后24小时内脑水肿及血脑屏障通透性的变化[D];浙江大学;2004年
2 文娜;针刺对局灶性脑缺血模型大鼠神经功能保护作用的机理研究[D];北京中医药大学;2003年
3 李润辉;雌激素对雄性大鼠局灶性脑缺血的保护作用及对Bcl-2蛋白表达的影响[D];中国医科大学;2003年
4 李志梅;联合应用神经保护剂对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积和神经元凋亡及caspase-3蛋白表达的影响[D];河北医科大学;2003年
5 顾振;大鼠局灶性脑缺血后NOS活性与细胞凋亡关系研究[D];南京医科大学;2002年
6 周建平;大鼠短暂性局灶性脑缺血后神经细胞再生、碱性成纤维细胞生长因子表达及其相互关系的研究[D];南京医科大学;2003年
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