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《天津医科大学》 2005年
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腺病毒介导的血管抑素k1-5对卵巢癌的抑制作用

刘恩令  
【摘要】:众所周知,卵巢癌生长及转移是血管依赖性的(Angiogenesis-dependent),而诸如VEGF等血管生成因子能促进血管形成及肿瘤生长转移。目前基因治疗是卵巢癌研究的热点及难点,如何采用现代高科技手段将基因治疗、抗血管生成治疗(Anti-angiogenesis therapy)结合起来,从而开创一个卵巢癌新的治疗理念即抗血管生成基因治疗(Anti-angiogenesis gene therapy)。血管抑素K1-5(Angiostatin K1-5)是目前发现的最具抗血管生成活性的因子之一,本研究拟采用腺病毒作为载体,将血管抑素K1-5基因插入腺病毒,利用腺病毒的感染特性感染肿瘤组织及肿瘤血管,使抗血管生成基因血管抑素K1-5在肿瘤组织中表达,观察病毒-基因-抗血管生成系统(Gene-virus-anti-angiogenesis system)对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的抑制作用,为将来此方案应用于临床奠定实验基础。 第一部分 人血管抑素K1-5重组腺病毒载体的构建 目的 构建携带血管抑素K1-5的腺病毒载体 方法 采用基因重组及克隆技术,构建携带血管抑素K1-5的腺病毒载体,PCR鉴定,50%组织培养感染剂量法(TCID_(50))测定病毒滴度及氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。结果 经50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度及氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,病毒滴度为1.5×10~9 PFU/ml。按需要扩增一定量后,进行纯化,病毒滴度达1.1×10~(10) PFU/ml。结论 我们成功构建了携带血管抑素K1-5的腺病毒载体,为进一步体内外实验,研究其对血管形成的抑制作用奠定基础。 第二部分 血管抑素K1-5腺病毒载体对血管内皮细胞的抑制作用 目的 在成功构建携带血管抑素的腺病毒载体的基础上,研究其对血管内皮细胞(ECV-304)增殖及迁移的抑制作用。方法 采用直接感染台盼蓝染色排除法、MTT及体外趋化实验检测血管抑素K1-5对内皮细胞增殖及趋
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R737.31

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