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《天津医科大学》 2005年
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胚胎大鼠脑源性神经干细胞生物学特性及液压冲击脑损伤大鼠颅内移植的实验研究

陈荷红  
【摘要】:目的 采用悬浮培养技术,体外分离培养胚胎大鼠大脑皮质神经干细胞(Neural Stem Cells, NSCs),并进行扩增传代,观察其自我增殖和多潜能分化特性。 方法 1.取材及接种:无菌条件下取出胚胎14~16天SD大鼠的大脑皮质,用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA进行消化,以吸管吹散至单细胞状态,加入含有EGF和bFGF的NSCs标准培养液,以1×10~6/ml浓度接种于培养瓶中,置入37℃、饱和湿度、5%CO_2条件下开放悬浮培养。培养6~7d后形成的细胞球,用细口吸管进行机械分离,将大细胞球分散成单细胞或小细胞团传代培养。每3天以同样方法传代一次。 2.NSCs增殖能力的检测:在原代和第三代培养的NSCs培养液中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),培养24h,固定后行BrdU免疫细胞化学染色。 3.NSCs的分化培养:将原代和第三代NSCs接种于预先涂布鼠尾胶原的培养板中,加入含有脑源性神经营养因子(BDNF)的NSCs分化培养液,观察NSCs贴壁后的迁移、增殖和分化。 4.免疫细胞荧光染色法对NSCs及其多分化潜能的鉴定:分别用抗NSCs特异性骨架蛋白——巢蛋白(nestin)抗体及神经元(MAP2)、星形胶质细胞(GFAP)的特异性抗体,采用免疫荧光染色法鉴定原代及传代的神
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R651

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